甘露醇磷酸化酶基因的敲除对D-甘露醇合成的影响

为了探究甘露醇分解利用途径对甘露醇合成的影响,在重组菌株R_1(K-12/pTrc99a-mdh)的基础上,通过CRISPR/Cas9敲除E.coli PTS系统中的cmtA、cmtB、mtlA基因,阻断了E. coli K-12中甘露醇的分解途径,获得了重组菌株R_3(K-12/?cmtA?cmtBmdh~+)和R_5(K-12/?cmtA?cmtB?mtlAmdh~+)。与出发菌株R_1相比,R_3的生长速率没有降低,而R_5的生长速率明显下降。并且R_5在以甘露醇为唯一碳源的培养基上已无法生长,说明cmtA、cmtB、mtlA三个基因全部敲除后,菌株已无法再利用甘露醇作为碳源进行生长。最后,构建的重组菌株R_5,测得MDH酶活力为258 U/mL,用高效液相色谱对胞外产物进行检测,可检测到少量的甘露醇,为进一步探究大肠杆菌合成甘露醇的调控机制奠定基础。     

鲤两种孕激素受体基因克隆、表达及比较分析

孕激素受体(Progesterone receptor,Pgr)是介导孕激素调控鱼类性腺发育和生殖细胞成熟的受体。为研究鲤(Cyprinus carpio)2种Pgr时空表达模式和表达分化趋势,采用cDNA末端快速扩增方法克隆两种Pgr基因(Pgr1和Pgr2)。Pgr1和Pgr2的全长cDNA序列分别为2 713 bp和2 730 bp,均编码628个氨基酸。二者核酸和蛋白质一致性分别为91%和90%。这两个基因都含有锌指结构域和核激素受体域同源超家族两个功能域。进化分析将鲤Pgr1和鲫Pgr1聚在一起,鲤Pgr2和鲫Pgr2聚为一支;这两支再与斑马鱼Pgr汇成一支。鲤Pgr1和Pgr2的非同义替换率与同义替换率比值为0.360,表明Pgr1和Pgr2受负选择压力。实时荧光qPCR分析表明,Pgr1和Pgr2在性腺的表达显著高于其他组织,说明二者可能参与性腺发育过程。催产素诱导后,Pgr1和Pgr2在精液和卵细胞的表达量高于受精卵,表明这两种基因与鲤生殖细胞成熟相关。大多数状态下Pgr1表达量显著高于Pgr2,表明Pgr1是介导鲤性腺发育和生殖细胞成熟的主表达基因。     

罗布麻通过抑制氧化应激反应减轻心肌缺血再灌注损伤

目的:观察罗布麻叶提取物(apocynum venetum leaf extract AVLE)预处理对心肌缺血再灌注(MI/R)损伤的影响。方法:采用SD大鼠MI/R模型,随机分为sham(假手术)组、MI/R组、AVLE预处理+MI/R组,检测血流动力学,采用氯化三苯基四氮唑和伊文思蓝双染法检测心梗面积、以血浆肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)活性检测心肌损伤情况、以超氧化物、丙二醛(MAD)和超氧化物歧化酶(SOD)含量检测心肌氧化应激以及Western blot方法检测gp91phox的表达。结果:与MI/R组相比,AVLE预处理组左室压上升、下降最大速率(±LVdp/dtmax)升高(P0.05),心肌梗死面积减少,两组分别为41.5±4.5%和32.0±3.5%(P0.05),血浆CK和LDH活性分别降低到1653±62 U/L和2461±152 U/L(P0.05),减少了心肌组织超氧化物的含量(P0.05)。AVLE治疗显着降低gp91phox的表达(P0.05),使SOD活性增加(P0.05),MDA水平显著降低(P0.05)。结论:AVLE通过抑制I/R心肌的氧化应激发挥心脏保护作用。     

凋亡信号调节激酶1信号通路在肾脏疾病中的作用

凋亡信号调节激酶1(apoptosis signal-regulating kinase 1, ASK1)是丝裂原激活蛋白激酶激酶激酶(mitogen-activated proteinkinase kinases kinase, MAP3K)的家族成员之一,可以响应氧化应激、内质网(endoplasmic reticulum, ER)应激等多种应激刺激,从而激活下游丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)中的c-Jun N末端激酶(c-Jun N-terminal kinase, JNK)和p38丝裂原激活蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase, p38 MAPK)信号通路,调节细胞凋亡、炎症和纤维化,介导急性肾损伤(acute kidney injury, AKI)、糖尿病肾病(diabetic kidney disease, DKD)、心肾综合征(cardiorenal syndrome, CRS)等多种肾脏疾病的进展。本文讨论了ASK1主要的激活和失活机制及其在多种肾脏疾病进展...     

喷雾助剂对2种药剂防治花蓟马的减量增效作用

为探讨4种喷雾助剂(强力源、穿导、激健、怀农特)对乙基多杀菌素和吡虫啉防治花蓟马Frankliniella intonsa Trybom的减量增效作用,分别采用叶管药膜法和喷雾法,比较了4种喷雾助剂对两种药剂室内毒力增效作用和田间药效的减量效果。室内测定结果表明,乙基多杀菌素LC50为0.05 mg/L,4种喷雾助剂对乙基多杀菌素的增效作用顺序依次为：强力源>穿导>激健>怀农特,增效比介于20.41%～61.22%之间。吡虫啉LC50为43.33 mg/L,4种喷雾助剂对吡虫啉的增效作用顺序依次为：强力源>怀农特>穿导>激健,增效比介于20.36%～47.95%之间。田间试验结果表明,添加强力源可使乙基多杀菌素减量30%,添加强力源和怀农特可使吡虫啉减量30%。其中,乙基多杀菌素减量20%添加强力源药后3 d对花蓟马的防效高达90.11%,较单剂显著提高14.97%,增效比为19.92%;药后7 d防效保持在63.04%。乙基多杀菌素推荐剂量减量20%添加强力源可推荐应用于防治花蓟马实际生产中。     

茎瘤固氮根瘤菌Azorhizobium caulinodans ORS571基因组分泌蛋白的生物信息学分析

为了获取茎瘤固氮根瘤菌(Azorhizobium caulinodans ORS571)的分泌蛋白,以便更深入地了解该菌的共生固氮作用,本研究采用SignalP、TMHMM、PSORTb、TargetP、LipoP、TatP和SecretomeP软件对该菌全部4717个蛋白序列进行分析预测。结果共识别了653个分泌蛋白,其中具有分泌型信号肽的蛋白54个,具有RR-motif型信号肽的蛋白1个,具有脂蛋白信号肽的蛋白2个和非经典分泌蛋白596个。该菌含信号肽分泌蛋白仅占全部蛋白的1.2%,低于其它固氮菌。在分泌蛋白中识别了核酸内切酶和核糖核酸酶等6个核酸酶。它们可能参与宿主植物遗传物质的降解,干扰宿主遗传代谢,进一步在宿主植物侵染过程中起到重要作用。此外还识别了超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽S-转移酶等4个抗氧化酶。它们可能参与活性氧的清除以保护固氮酶,是该菌固氮过程的重要参与者。     

基于不同光源的无标记显微成像技术

目的:随着对微观世界探索的不断深入,人们对显微成像系统的性能,如成像效率、成像质量以及三维成像等均提出了越来越高的要求。方法:近年来,在显微成像领域涌现出一批代表性的技术如定量相位成像技术、太赫兹成像技术以及结构光超分辨成像技术等,此类技术凭借无损伤、无侵入、无电离辐射、可实时、可定量等优势,在医学诊断、无损检测和安全检查等方面有着广泛应用。结论:本文根据光源的不同对显微成像技术进行了分类,首先对高相干激光、低相干光、太赫兹波以及结构光作为光源的四类无标记成像技术进行了简要介绍,并阐明了成像的基本原理,然后对这几类技术进行了特征分析。最后探讨了显微成像技术的发展趋势。     

噬菌蛭弧菌对鱼类常见致病菌裂解作用的研究*

调查了北京地区２５份水样,其中２４份检出噬菌蛭弧菌。本次试验选用４株鱼类主要致病菌为宿主菌,检出的蛭弧菌对上述４种细菌的裂解范围有所不同。其中嗜水气单胞菌可被全部检出的蛭弧菌裂解（２４／２４）,其他３株菌仅部分被裂解,依次为肠型点状气单胞菌（１７／２４）,荧光假单胞菌（９／２４）,鳗弧菌（７／２４）。本次试验直接从水样中检出６株对４种宿主菌均有裂解作用的蛭弧菌,为进一步利用蛭弧菌防治鱼类常见细菌性疾病提供了可用资料。