RNA干扰沉默Smad3对人肺成纤维细胞Ⅰ型胶原产生的影响

目的:转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)通过Smad3(drosophila mothers against decapentaplegic)依赖的细胞因子信号转导通路,促进I型胶原的合成和分泌,在哮喘气道重塑中起重要作用.近年来RAN干扰技术在基因治疗及功能研究取得很大进步,本实验探讨RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默Smad基因表达对人肺成纤维细胞(human lung fibroblast-1,HLF-1)合成I型胶原的影响.方法:设计并合成Smad3特异性小发卡干扰RNA(short hairpin RNAs,shRNA),用脂质体转染入培养的人HLF-1细胞,反转录聚合酶链反应(reverse transfection PCR,RT-PCR)法和蛋白质印迹(Western blot)法观察基因沉默效果,酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunoadsordent assay,ELISA)检测RNA干扰对人HLF-1细胞合成I型胶原的影响.结果:shRNA-Smad3成功转染入人HLF-1细胞并有效沉默Smad3的表达,RT-PCR结果显示shRNA-Smad3转染后Smad3mRNA表达与正常对照组和阴性对照组比较,分别降低68.2％和69.5％,差异有统计学意义(P＜0.05);Westem blot结果显示shRNA-Smad3转染后Smad3蛋白表达与正常对照组正常对照组和阴性对照组比较,分别降低了67.1％和64.7％,差异有统计学意义(P＜0.05).ELISA检测结果显示shRNA-Smad3转染后I型胶原为正常对照组和阴性对照组的59.3％和61.1％,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:shRNA-Smad3能有效沉默HLF-1细胞中Smad3 mRNA和Smad3蛋白的表达,并减少HLF-1细胞I型胶原的合成.为进一步应用干扰RNA技术治疗哮喘患者气道重塑提供新的思路.     

中国水产科学研究院黄海水产研究所刘萍研究员学科团队简介

本学科团队在刘萍研究员的带领下,主要从事虾蟹遗传育种和水生生物种质资源的研究,主持国家"863"、支撑和自然科学基金以及省部级课题等10项,合同经费达到2000多万元。组建了"海洋生物种质资源利用与遗传多样性研究"团队。在种质资源、分子辅助育种和新品种选育研究中取得多项具有国际先进水平的创新性科研成果,主要业绩如下:     

建构主义教学模式在医学微生物学教学实践中的应用

传统的教学模式是以"教师为中心",建构主义教学模式强调"以学生为主体"。医学微生物学教学存在课时少、内容繁杂、知识点琐碎、逻辑性较差等特点,采用传统教学模式往往不能达到较好的教学效果。通过将建构主义理论引入医学微生物学教学实践中,我们设计了适合医学微生物学的建构主义教学模式,充分调动学生的主动性、积极性和创造性。该模式的应用,进一步提高了医学微生物学的教学质量,增加了学生综合素质的培养。     

黄河三角洲滨海滩涂不同密度柽柳林的土壤盐碱与养分特征

为探讨黄河三角洲滨海滩涂不同密度柽柳林的土壤盐碱和养分特征,明确不同密度柽柳林的“盐谷”及“肥岛”效应,以黄河三角洲山东省滨州市北海新区滨海滩涂的低密度（1100 株/hm2）、中密度（4100 株/hm2）和高密度（7100 株/hm2）柽柳林为研究对象,测定分析不同密度柽柳林及柽柳植株周边不同位置的土壤pH、电导率、速效氮、速效磷、速效钾、有机碳等指标。结果表明：（1）土壤电导率随林分密度增大表现为逐渐减小,在中、高密度柽柳林,土壤电导率分别比低密度降低28.39%、55.74%;随距离柽柳植株远近不同,中、高密度柽柳林土壤电导率表现为根部<冠幅中心<冠幅边缘<株间空地,即中、高密度柽柳林出现“盐谷”效应,而低密度林分未出现。（2）土壤速效氮、速效磷和有机碳含量随林分密度增大表现出先增大后减小,在中、高密度柽柳林,柽柳植株周边不同位置的速效氮、速效磷和有机碳含量存在显著差异（P<0.05）,表现为根部>冠幅中心>冠幅边缘>株间空地,而低密度柽柳林差异不显著（P>0.05）;即中、高密度柽柳林出现“肥岛”效应,而低密度林分未出现。（3）中密度柽柳林在养分含量、养分富集率方面高于高密度,在盐分富集率方面低于高密度,具有更强的“肥岛”、“盐谷”效应。（4）不同密度柽柳林以及柽柳植株周边不同位置的土壤pH差异均不显著（P>0.05）。林分密度显著影响土壤盐分及养分含量,中密度柽柳林具有显著提高土壤肥力的作用,高密度次之,而低密度较差。不同密度柽柳林的降盐作用表现为中、高密度较好,低密度较差。基于柽柳林改良土壤盐碱与养分的作用,建议黄河三角洲滨海滩涂柽柳合理的初植密度为4100 株/hm2。     

基于MS2噬菌体lys基因的质粒型条件自溶菌的构建与应用

【背景】传统外源蛋白的原核表达通常需要以超声破碎或者酶解的方式破碎菌体,过程比较烦琐。【目的】构建基于MS2噬菌体lys基因的质粒型条件自溶菌,以简化外源蛋白的获取流程。【方法】从MS2噬菌体中克隆lys基因,构建重组表达质粒,并在大肠杆菌BL21(DE3)中异源表达,以此构建质粒型条件自溶菌,通过生长曲线和菌落形成单位反映自溶菌裂解效率,利用SDS-PAGE检测外源蛋白释放情况。【结果】构建了pBAD-lys BL21(DE3)、pBAD-Opti-lys BL21(DE3)及pCDF-BAD-Opti-lys BL21(DE3)这3种质粒型条件自溶菌。以上自溶菌在阿拉伯糖诱导后其宿主裂解效率均为99.99%以上,CFU结果显示含pCDF-BAD-Opti-lys质粒的宿主裂解效果更优,在此自溶菌BL21(DE3)中表达含His标签的重组绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP),经阿拉伯糖诱导后菌体中约63.00%以上的eGFP释放至胞外,利用Ni-NTA可以直接从培养基中纯化得到约30 kDa的单一目的蛋白。【结论】基于MS2噬菌体lys基因成功构建了阿拉伯糖诱导的质粒型条件自溶菌,此自溶菌能够以自我裂解的方式释放大部分胞内外源蛋白,简化传统外源蛋白获取流程。     

Cx43基因在人类及小鼠胎心发育中的时空表达规律

目的　检测Cx4 3在人类和小鼠的胚胎心脏的表达 ,了解该基因在心脏发育过程中的表达规律。方法　选取人类 6～ 18孕周正常胚胎或胎儿心脏 6 3例 ,小鼠孕龄 9 5～ 16 5d胚胎心脏 6 4例 ,采用免疫组化法显示Cx4 3基因在心脏的表达。结果　早期人类胚胎心脏中 ,Cx4 3在心室肌中没有表达 ,心房肌表达微弱 ,原始小梁网中表达很高 ,随着胚胎发育 ,在心房和心室的表达逐渐增强 ,小梁网的表达在胚胎 13～ 14周达到高峰。室间隔的肌部表达量较弱 ,膜部室间隔不表达。房室瓣和大动脉根部管壁Cx4 3没有明显表达。除了在大动脉管壁表达不同 ,小鼠胚胎心脏表达规律与人类基本相同。结论　Cx4 3对于胚胎心脏的发育至关重要。     

抗人肿瘤坏死因子-α单链抗体与其配体的相互作用

为了在大肠杆菌中表达纯化抗人 TNF- α单链抗体并检测其结合活性与中和活性 .利用GST融合蛋白系统在大肠杆菌中表达抗人 TNF- α单链抗体 E6Sc Fv;分离包含体后进行变性和复性 ,再用亲和层析法进行纯化 ;用 ELISA法和酵母双杂交系统检测 E6Sc Fv与配体的结合 ;用 L92 9细胞检测 E6Sc Fv对人 TNF- α细胞毒作用的中和活性 .经变性 ,复性与亲和层析 ,E6Sc Fv被纯化 ,在 SDS- PAGE上为单一蛋白带 ;体外结合与中和实验表明 ,表达纯化的 E6Sc Fv可与人 TNF-α结合并中和其细胞毒活性 ;进一步用酵母双杂交系统证明当表达于细胞内时 ,E6Sc Fv仍保持了与TNF-α相结合的能力 .     

治沙措施通过植物群落的质量效应驱动土壤因子变化——以玛曲高寒草甸沙化区为例

沙漠化是玛曲高寒草甸面临的主要生态问题之一,研究沙障固定+种草植灌+围封共同构建的综合性治沙措施对不同调查区(县城南岸与河曲马场)玛曲高寒草甸严重沙漠化区域(流动沙地)植物群落和土壤因子的影响,以及植物群落驱动土壤因子变化的生态机制,有助于科学合理的开展沙漠化防治与生态恢复工作。结果表明：治沙措施实施后,植物群落的主要优势种由青藏苔草(Carex moorcroftii)转变为垂穗披碱草(Elymus nutans)与青藏苔草并重。不受调查区制约,治沙措施能够显著改善植物群落数量特征与物种多样性,表现为县城南岸与河曲马场的地上生物量大幅提高至18.04 g/m²和24.67 g/m²(P<0.05),盖度分别为23.8%和31.1%,较流动沙地显著提高了487.3%和589.2%(P<0.05),物种丰富度和Shannon多样性指数的变化规律与盖度相近。土壤因子方面,除pH值外,治沙措施能够显著提高县城南岸与河曲马场的土壤全氮、全碳、全磷、速效磷和速效钾。线性混合效应模型表明,治沙措施实施后,地上生物量是驱动土壤有机质、全氮和全碳...     

T7启动子作用下抗人TNF-α单链抗体的表达

基因工程技术构建的抗人TNF-α单链抗体克隆入表达载体pET15b-Etag中,在T7启动子的作用下,经0.1 mmol/L IPTG诱导,在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效表达,其表达量占菌体总蛋白的38%.表达产物大部分以包涵体形式存在,而一小部分以有活性的可溶性形式出现于细菌的外周质中.这部分可溶性的表达产物占菌体总蛋白的6%,经双抗体夹心法和斑点印迹分析表明它具有抗原结合活性.     

一阶时间序列模型的诊断

本文研究用条件均值与条件方差的非参数估计识别非线性时间序列模型的方法。并通过模拟考察了上述条件量对于模型识别的效果，指出对于一阶模型，条件均值是一个很好识别指标，本文最后还给出了确定模型阶数为一阶的方法，从而解决了一阶模型的识别问题。