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利用细小RNA 病毒属脑炎和心肌炎病毒(EMCV)的内核糖体进入位点(IRES)元件构建了人肿瘤坏死因子受体75 基因(hTR75) 和新霉素抗性基因(neoR)的双顺反子表达载体, 通过电脉冲转染BHK21 细胞, 筛选出分别和同时稳定过量表达两种hTNF受体的细胞株。这些细胞在mRNA 和蛋白质水平均可检测到hTR75 的表达。利用野生型和具有两种受体选择性结合活性的hTNFα突变体对这些细胞株进行测定, 发现过量表达的hTR75 可以独立地介导hTNFα对BHK21 细胞的细胞毒性, 而hTR55 的存在并不能显著增强这种作用。上述结果为进一步阐明TR75 的功能以及两种受体间的相互作用提供了一条新的途径。 相似文献
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前言 基因决定着生物的性状和遗传,它在生物学中的意义是不言而喻的。从化学上讲,基因是一段特定的具有生物功能的DNA顺序。因此,一旦知道了基因的结构以后,基因的合成也就被提上了日程。1965年,Holley第一个阐明了酵母丙氨酸tRNA的化学结构,第二年,Khrorana立即根据这个结果可能确定出的基因的结构。 相似文献
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人白细胞介素-3(humanInterleukin3,hIL-3)是一种造血前体细胞早期分化的关键调节因子。用PCR方法从人T淋巴细胞cDNA文库中扩增出0.44kb的DNA片段,并克隆入pUC19载体中。经DNA序列测定,确定0.44kb的PCR产物合完整的编码人白细胞介素-3成熟蛋白cDNA序列,并在信号肽与成熟蛋白编码序列之间通过突变引入了限制性内切酶位点和ATG起始密码。构建的PL启动子控制下的hIL-3cDNA表达质粒,转入大肠杆菌Tap106,经42℃热诱导,获得hIL-3的表达产物。SDS-PAGE电泳显示表达产物为15kd,约占细菌总蛋白的15%。表达产物经ELISA和Western-blot验证。hIL-3表达产物在细胞内形成包涵体,纯化包涵体,使产物纯度提高到70.8%,产物复性后,能明显促进hIL-3依赖细胞株生长,具有明显的生物活性。产物转移到PVDF膜后进行N端序列分析,N端16个氨基酸正确。 相似文献
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本文报道用固相磷酸三酯法化学合成了限制性内切酶HinP_1Ⅰ的底物片段d-ATGCGCAT。固相载体采用β-丙氨酰基聚苯乙烯树脂(2%交联度)。合成的产物经顺序分析得到证明,同时能被限制性内切酶HinP_1Ⅰ识别并在专一位置上水解。 相似文献
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基因工程技术的现状与发展 总被引:1,自引:0,他引:1
基因工程技术乃是近十多年来发展起来的一门新的生物学技术。它的出现对于推动分子生物学、细胞生物学、遗传学、生物化学以及其它生物学科诸多领域的发展都起了重要的作用。基因工程技术亦即重组DNA技术包括了多种技术。这些技术可以划分为以下三个方面,即:①基因的制备与扩增;②基因的转移、检测和DNA序列分析;③基因的表达与表达载体的构建。下面将简单谈谈有关这些方面的现状与发展。 相似文献
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过去,人们为了从生物材料中获得某一段特定的DNA(基因)顺序或者进行其顺序分析或鉴定,需要经过非常繁琐的步骤并耗费大量的时间,而且往往还会由于所从事样品的复杂性、不均一性或含量太少而无法达到目的。最近由美国Cetus公司人类遗传部的一个小组研究和发展起来的聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,简称PCR)技术则是在这方面 相似文献
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本文采用化学方法和化学与酶促相结合的方法分别合成了自身互补的EcoRI 接头片段脱氧八核苷酸d-GpGpApApTpTpCpC。化学方法使用二酯法(4 4)的路线,各中间片段和最终产物用DEAE-葡聚糖凝胶A-25柱层析纯化。酶促合成是用化学合成的两个片段d-GGAA和d-TTCC,借RNA 连接酶连接成脱氧八核苷酸。两种方法合成的八核苷酸都能被限制性内切酶EcoRI 识别并水解得到预期的产物,同时双向指纹图谱分析证明合成的产物具有正确的核苷酸排列顺序。 相似文献
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本文采用化学方法和化学与酶促相结合的方法分别合成了自身互补的EcoRI接头片段脱氧八核苷酸d-GpGpApApTpTpCpC。化学方法使用二酯法(4 4)的路线,各中间片段和最终产物用DEAE-葡聚糖凝胶A-25柱层析纯化。酶促合成是用化学合成的两个片段d-GGAA和d-TTCC,借RNA连接酶连接成脱氧八核苷酸。两种方法合成的八核苷酸都能被限制性内切酶EcoRI识别并水解得到预期的产物,同时双向指纹图谱分析证明合成的产物具有正确的核苷酸排列顺序。 相似文献
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本文报道了酵母丙氨酸转移核糖核酸5′-半分子中二氢尿嘧啶环区的九核苷酸AGDCGGGDAG的合成工作。合成的方案是采用先合成AGD、CGG和DAG三个三核苷二磷酸片段,然后再以AGD pCGGDAG(3 p6)或AGDCGG pDAG(6 p3)两种方式用T_4RNA连接酶连接成为所需要的九核苷酸。CGG和DAG是采用磷酸二酯法进行化学合成,AGD是用AG>P同D借核糖核酸酶N_1酶促合成。这个路线的优点是三个三核苷二磷酸片段易于大量合成制备,无论是3 p6或6 p3两条路线的中间产物AGDCGG(产率61%)和CGGDAG(产率64%)和最终的九核苷酸产物都能得到好的连接产率和分离纯度。3 p6和6 p3两条路线所得的九核苷酸的连接产率分别为52%和82%。合成的产物均经过毗邻分析,5′末端~(32)P标记后的电泳-同系层析双向纯度鉴定或凝胶电泳以及核苷酸顺序分析证明了合成产物的均一性和结构的正确性。 相似文献