草鱼树突状细胞的分离鉴定及益生芽孢杆菌对其免疫功能的影响

为揭示草鱼(Ctenopharyngodon idellus)树突状细胞(Dendritic cells)的生物学特性及益生芽孢杆菌对其免疫功能的影响,研究通过草鱼体外细胞培养技术分离获得草鱼DCs,对其形态学特征、生物学功能及膜表面标记分子的表达进行了分析鉴定; RT-PCR检测了益生芽孢杆菌对草鱼DCs免疫相关细胞因子表达的影响。结果表明草鱼DCs具有典型的树突状形态,可有效地激活T淋巴细胞的增殖并具有迁移能力。LPS刺激可促进其成熟过程,显著提升膜表面标记分子CD80/86、CD83的表达。这表明草鱼DCs和哺乳动物DCs在形态和功能上具有高度相似性。RT-PCR结果显示,在体外条件下使用紫外照射灭活的益生枯草芽孢杆菌对草鱼DCs进行刺激后,抗炎性因子IL-4, IL-10的表达水平显著提升(P<0.05),并在12h时达到峰值。这表明枯草芽孢杆菌可通过促进树突状细胞分泌抗炎性因子来影响其免疫功能。以上结果为进一步研究鱼类树突状细胞的生物学特性及益生芽孢杆菌对其免疫功能的影响提供了重要的依据。     

果寡糖对银鲫非特异性免疫功能的影响

为研究果寡糖（Fructooligosaccharides）对银鲫（Carassius auratus）非特异性免疫功能的影响,以50g左右的银鲫为实验对象,在其基础饲料中分别添加浓度为0．5g／kg（A。组）、1g／kg（A：组）、2g／kg（A,组）、4g／kg（A。组）的果寡糖,另设基础饲料为对照组（A。组）,分别于7d、14d、21d、28d、42d、56d检测银鲫血液中白细胞吞噬活性、血清溶菌酶活力、血清SOD酶活性和补体C3的含量。结果表明,A2组的白细胞吞噬活性、血清溶菌酶活力、血清SOD酶活性和补体C3的含量显著高于A0组（P〈0．05）,分别于第28、第21、第14、第14天达到最大值;A,组的白细胞吞噬活性、血清溶菌酶活力、血清SOD酶活性和补体C3的含量显著高于A0组（p〈0．05）,分别于第14、第14、第7、第14天达到最大值。A3组的补体C3的含量显著高于A2组（P〈0．05）,白细胞吞噬活性、血清溶菌酶活力、血清SOD酶活性与A2组相比差异不显著,但其活性高于A2组。A1组、A4组与A0组之间的白细胞吞噬活性、血清溶菌酶活力、血清SOD酶活性和补体C3的含量在各时间点均无显著差异。     

益生芽孢杆菌对草鱼肠黏膜结构的保护作用

为了研究益生菌对草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肠道黏膜结构的保护作用, 选取健康草鱼随机分成3组: ①对照组: 口灌无菌PBS 0.2 mL/尾后第2和第4天分别口灌无菌PBS 0.1 mL/尾; ②嗜水气单胞菌组(Ah组): 口灌嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)菌液0.2 mL/尾(1.0×107 cfu/mL)后第2和第4天分别口灌无菌PBS 0.1 mL/尾; ③枯草芽孢杆菌保护组(Ah+Bs组): 口灌嗜水气单胞菌菌液0.2 mL/尾后第2和第4天分别口灌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌液0.1 mL/尾(1.0×107 cfu/mL); 连续7d取中肠中部, 通过检测草鱼肠黏膜形态及肠上皮细胞微丝骨架的变化, 旨在研究益生枯草芽孢杆菌对嗜水气单胞菌造成的肠黏膜结构损伤的保护作用。结果表明: Ah组病变主要表现为肠道黏膜上皮细胞变性, 坏死, 大量脱落; 固有层出血、水肿变粗; 大量炎性细胞浸润; 超微结构变化表现为紧密连接缝隙明显变宽; 微绒毛萎缩变短, 稀疏, 排列紊乱; 线粒体可见明显肿胀、嵴减少, 内质网明显扩张; 肠上皮细胞中的微丝呈绿色雾状, 微丝荧光强度逐渐减弱, 明显低于对照组。与Ah组相比, Ah+Bs组上述病变有明显改善, 肠道黏膜上皮细胞轻微脱落, 炎症和出血等症状明显减轻; 紧密连接缝隙明显变窄; 微绒毛数量多且排列较整齐; 线粒体无明显肿胀; 肠上皮细胞中的微丝荧光强度高于Ah组。结果说明益生芽孢杆菌对嗜水气单胞菌造成的肠黏膜结构损伤有一定的保护作用。     

中华鳖肠道益生菌的筛选、鉴定与生长特性研究

通过点种法初筛和牛津杯法复筛, 从中华鳖肠道筛选到1株对嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、温和气单胞菌(A. sobria)以及豚鼠气单胞菌(A. caviae)具有拮抗作用的益生菌株Dec-43。对该菌株进行形态、生理生化特征分析, 结果与《常见细菌系统鉴定手册》中屎肠球菌(Enterococcus faecium)的生理生化特征一致。提取细菌基因组DNA, 通过16S rRNA基因通用引物进行PCR扩增, 从该菌株的16S rRNA基因中克隆到了一个长度1448 bp的片段, 经测序和序列比对, 该片段与Genbank中屎肠球菌的序列相似性达99%, 因此, 该菌株确定为屎肠球菌。通过单因素试验确定了该菌株的最佳生长温度、盐度、初始pH、接种量等参数分别为: 36℃、盐度0.6%、培养基初始pH 7、接种量10%; 通过正交试验, 确定了该菌株培养基中碳源(葡萄糖)、氮源(蛋白胨)最适含量分别为15和10 g/L。研究发现了一株中华鳖肠道潜在益生菌, 并研究了其生长特性, 为中华鳖养殖行业益生菌的应用提供了基础。       

黄颡鱼肠道病原拮抗性芽孢杆菌的筛选与特性研究

采用80℃水浴法从黄颡鱼肠道分离到65 株芽孢杆菌, 牛津杯法拮抗试验筛选到3 株抑菌活性很强的菌株, API 50CHB 试剂盒鉴定它们为枯草芽孢杆菌。选取抑菌活性最强的F14 进行特性研究。结果显示: F14在80℃、90℃和沸水浴中处理5min 后的存活率分别为96.7%、95.3%、52.9%。随时间的延长, F14 在90℃和沸水浴中的存活率均出现了较大幅度的下降。沸水浴处理10min 时, 其存活率减少至8.3%。在pH 3.0—5.0的范围内, 处理F14 1h、2h 后的存活率分别在98%、87%以上。F14 代谢粗提物具有较强的抑菌作用, 病原性嗜水气单胞菌在粗提物中培养2h, 细菌数量就开始急剧下降, 至 24h 时已检测不到活的细菌。此外, 喷洒在饲料中的F14 在室温、4℃和?20℃条件下储存, 细菌数量在4℃和?20℃存储20d 均无显著变化, 仅在室温下存储至第20 天时显著减少。研究表明, F14 抗菌谱较广, 抑菌作用强, 耐高温和酸性环境, 在饲料中稳定性好, 具有作为水产益生菌应用的潜力。