猪链球菌口服疫苗的制备及小鼠血清免疫效果的评价

为构建猪链球菌(Streptococcus suis)新型疫苗,给猪链球菌病的防治提供新思路,首先在大肠杆菌中表达猪链球菌毒力因子EF和MRP,以His-tag柱纯化重组蛋白,并制备EF和MRP鼠源多克隆抗体.随后将ef和mrp基因置于组成型启动子P59和信号肽Usp45下,克隆到乳酸菌表达载体pMG36e上,电击转化到干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)ATCC27092中进行表达.Western blot 检测显示EF和MRP蛋白均能在乳酸菌中成功表达,且EF蛋白的表达量随着重组菌生长时间的增长而增大,而MRP蛋白的表达量在重组菌生长到OD600为0.8时达到最高,随后慢慢下降.用含有表达EF和MRP蛋白的重组干酪乳杆菌喂饲C57BL/6J小鼠,发现重组菌可在小鼠体内存活2d左右,并可有效刺激小鼠产生EF和MRP特异性抗体,为研制乳酸菌口服疫苗防治猪链球菌病的可行性进行了有益的探索.     

纯化标签的不同位置对Δ6脂肪酸脱饱和酶异源表达的影响

【背景】目前利用酵母表达系统已鉴定了多种物种中的Δ6脂肪酸脱饱和酶(FADS6)。由于FADS6是一种具有多个跨膜螺旋的膜蛋白,使得其大量表达和纯化具有挑战性。【目的】探索FADS6的高效表达策略,研究纯化标签添加的位置对高山被孢霉FADS6I (Ma FADS6I)重组表达效率的影响。【方法】在毕赤酵母表达载体中插入串联亲和标签HRV 3C-Protein A-His,利用改造后的载体构建带有N端或C端标签的Ma FADS6I表达载体;通过电转化获得毕赤酵母重组表达菌株;利用斑点印迹杂交(DotBlot)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PolyacrylamideGelElectrophoresis,SDS-PAGE)和免疫印迹(Western Blot)分析重组蛋白的表达水平,并利用气相色谱-质谱(Gas Chromatography-Mass Spectrometry,GC-MS)分析检测Ma FADS6I催化生成的脂肪酸。【结果】通过大量的毕赤酵母转化子筛选,最终获得高效表达Ma FADS6I的毕赤酵母重组菌,证实各转化子的表达具有差异性,Ma FADS6I的C端带有纯化标签较N端更有利于表达。【结论】在Ma FADS6I的C端添加纯化标签比在N端添加更有利于该蛋白在酵母系统中的表达以及底物的转化,为进一步探究FADS6高效表达和结构功能奠定了基础。     

典型草原区布氏田鼠鼠害防治的经济阈值

采用种群动态分析方法,分析了内蒙古典型草原区布氏田鼠防治经济阈值.结果表明,1995 ～2005年间布氏田鼠(Lasiopodomys brandtii)早春化学防治的经济阈值分别为36.4、48.8、45.2、39.6、51.2、51.7、48.6、47.2、45.4、40.8、40.1只/hm2,而2010 ～ 2012年间的经济阈值则为41.8、39.8、38.7只/hm2.1995～2012年间,布氏田鼠防治的经济阈值基本稳定在45只/hm2左右.布氏田鼠鼠害的防治经济阈值主要受牧羊放牧收益、灭鼠成本和灭鼠成效的影响,牧羊年均放牧收益与布氏田鼠早春防治经济阈值呈反比关系.根据2010～2012年间的调查结果,近年来布氏田鼠早春防治经济阈值的参考数值为40只/hm2.     

植物乳杆菌ZS2058的亚油酸异构酶基因在乳酸克鲁维酵母中的克隆表达

目的：将植物乳杆菌ZS2058（Lactobacillus plantarum ZS2058）的亚油酸异构酶基因在乳酸克鲁维酵母（Kluyveromyces lactis）中进行克隆表达。方法：根据NCBI中已报道亚油酸异构酶（linoleate isomerase,LAI）基因的序列特征,设计引物对筛得的植物乳杆菌ZS2058进行PCR扩增,得到亚油酸异构酶全基因序列,克隆至乳酸克鲁维酵母表达载体pKLAC1,电转化得重组菌pKLAC1-LAI /Kluyveromyces lactis GG799。结果：SDS-PAGE检测,重组菌进行分泌表达获得目的蛋白,大小约为67 kDa;气相色谱（Gas Chromatogram,GC）检测到共轭亚油酸（conjugated linoleic acids,CLA）典型峰。结论：植物乳杆菌ZS2058中的亚油酸异构酶基因在乳酸克鲁维酵母中得到分泌表达,重组酶转化效率约为26%。     

肝型脂肪酸结合蛋白研究进展

肝型脂肪酸结合蛋白(liver-type fatty acid binding protein,L-FABP,FABPI)是脂肪酸结合蛋白家族的成员之一,主要在肝脏、小肠、肾脏及胰腺等组织细胞中有表达.研究发现,L-FABP与脂肪酸的摄取、转运、代谢调节有关.近年研究表明,肝型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)与肿瘤、肾脏疾病、脂肪肝、肥胖、糖尿病等多种疾病的发生发展密切相关.本文就肝型脂肪酸结合蛋白的分子结构、功能以及与疾病的关系作一综述.     

前导肽二级结构对bovicin HJ50修饰和加工的影响

[目的]阐明羊毛硫细菌素bovicin HJ50前导肽的二级结构对原肽修饰和加工的影响规律.[方法]采用半体外生物合成系统构建boviein HJ50前导肽突变体,然后利用MALDI-TOF质谱鉴定成熟肽的修饰情况.同时,结合HPLC和抑菌活性分析其对成熟肽加工效率的影响.[结果]我们构建了6个bovicin HJ50前导肽二级结构相关的突变体(F-16A,V-15E,E-14L,E-8P,L-7D,L-4K).F-16A,V-15E,L-4K几乎不影响修饰和加工;E-14L和E-8P的修饰则发生了变化;另发现L-7D导致加工过程受到强烈抑制.[结论]Bovicin HJ50前导序列中保守的螺旋结构区对修饰酶BovM和蛋白酶BovT150活性都有不同程度影响,其二级结构的维持对bovicin HJ50的修饰和加工具有重要作用.     

抗黄曲霉毒素B1单链抗体在大肠杆菌中的表达及优化

摘要：【目的】继杂交瘤技术后,重组抗体技术是新一代的抗体制备技术。然而如何用原核系统中较多地表达具有生物活性的单链抗体,避免包涵体形成仍是一个需要探讨的问题。【方法】将目的基因scFv-H4克隆到载体pET22b上,分别转入大肠杆菌BL21（DE3）和Origami（DE3）中,通过改变诱导温度和IPTG浓度,比较具有生物活性的蛋白量以及包涵体的量。【结果】在BL21（DE3）中,pET22b能产生大量表达scFv-H4,而BL21(DE3) 的含有trxA和gor双突变的衍生菌Origami（DE3）表达的scFv-H4的总量较少,但是具有生物活性的蛋白量较多（35 mg/L培养物）,具有生物活性的蛋白比例也较BL21（DE3）高。另外IPTG的浓度对scFv-H4表达没有显著影响,而较高的诱导温度会促使表达的蛋白形成包涵体。【结论】在较低的温度下,pET22b能在Origami（DE3）能较好地表达具有生物活性的scFv-H4,减少包涵体的比例,为后续的抗体性质研究和改造奠定了基础。     

北京白河与温榆河浮游动物调查

2004～2006年对北京地区白河和温榆河浮游生物群落进行调查.结果显示:白河浮游动物137种,隶属于78个属,其中原生动物最多,共计73种,其次是轮虫55种,枝角类7种,桡足类2种;温榆河浮游动物135种,隶属于83个属,其中原生动物共计65种,轮虫类53种,枝角类13种,桡足类4种.两河浮游动物种类组成大部分相同,以原生动物为主,但两河大型浮游动物的种类组成差别较大.据两条河流浮游动物的生态状况和凋查结果综合分析,白河的水质较好,多数站点水体清洁,只有少数站点水体达轻度污染,温榆河水质较差,大多数站点水体属轻度污染,个别站点属中度污染.     

耐热重组β-半乳糖苷酶的制备及酶稳定性研究

编码嗜热脂肪芽孢杆菌β—半乳糖苷酶基因的重组枯草芽孢杆菌WB600／pMA5—bgαB,经5L发酵罐发酵收集菌体超声波破壁,冷冻离心后再经过热处理和盐析纯化,比活力达80．3U／mgpr,回收率73．6％,纯化倍数12．4倍。β—半乳糖苷酶在细胞内及破壁后都具有较好的稳定性,60℃热处理对酶构象的影响不大。     

北京幽灵蛛的附肢自残

附肢自残是北京幽灵蛛（Pholcus beijingensis Zhu ＆ Song,1999）的习性之一。野外调查表明,约20％的个体至少失去1只步足;个体自残的发生率在2—7月间有显著的差异,同时第一对步足自残的比例最高（43．47％）;个体失去步足的比例随着年龄的增加而增加;左侧和右侧步足失去的比率接近（1．03：1）。野外调查发现,正在交配的个体与单独生活的个体相比,步足的完整性上并无显著差别。实验室研究表明,北京幽灵蛛附肢自残后没有再生现象。通过对自残幼体与非自残幼体的3龄与4龄龄期研究,发现各处理组间并无显著的差别。步足自残被认为是北京幽灵蛛在极端情况下的“避险策略”（Bet-hedging strategy）[动物学报54（6）：998-1004,2008]。