重组大肠杆菌的发酵与代谢工程

在工程菌的发酵中,外源基因高表达条件下的高密度发酵对于提高生产效率、降低生产成本、简化产品纯化工艺以及降低扩大生产投资都具有非常重要的意义．然而在大肠杆菌的高密度发酵中遇到了许多困难［‘］,其中主要包括有机酸类代谢副产物累积并抑制细菌自身生长、供氧限制和外源基因高表达引起宿主细胞生理负担过重等问题。对此,国内外学者作了许多有意义的探索。应用代谢工程技术对工程菌进行改良,使之有利于外源基因的高表达及高密度发酵,是一项很有应用前景的研究课题,引起了广泛关注。本文拟对近年来有关应用代谢工程改良重组大肠…     

短芽孢杆菌细胞壁蛋白基因多启动子和信号肽编码序列的分离

具有高蛋白分泌能力的短芽孢杆菌分泌到胞外的蛋白质主要是细胞壁蛋白,本通过PCR从5株筛得的具有高蛋白分泌能力且没有胞外蛋白酶活性的短芽孢杆菌中分离出细胞壁蛋白基因多启动子和信号肽编码序列,对其分析发现与具有高蛋白分泌能力的短芽孢杆菌47和HPD31的相应序列高度同源,该结果表明分泌蛋白能力强的短芽孢杆菌细胞壁蛋白的合在 可能受同样的机理调控。     

改构的野生革耳漆酶基因在毕赤酵母中的表达和活性鉴定

在野生革耳漆酶的cDNA序列3’端添加15个核苷酸后得到突变基因lccT。将其克隆入表达载体pPICZαA,重组质粒pPICZαA／lccT经PmeⅠ线性化,电击转化毕赤酵母X-33细胞。经过菌落PCR鉴定的转化子pPICZαA／lccT—X一33在甲醇诱导后分泌表达活性重组漆酶LCCT,比未添加该段序列的野生革耳漆酶基因lcc在毕赤酵母中表达的活性提高2倍多。其培养液上清经凝胶过滤层析和离子交换层析后,得到了电泳纯的漆酶蛋白,以ABTS为底物在pH4．5时测得比活为3．68U／mg。根据SDS-PAGE测定的重组漆酶LCCT的表观相对分子质量为62600。     

关于TRAIL对凋亡的作用

凋亡,即程序性细胞死亡,是允许多细胞动物严格调控细胞生长,防止癌症、免疫缺陷及自身反应性等病理过程的一种关键机制。在哺乳动物细胞中,凋亡可通过两个主要途径起始：一个与死亡受体的参与有关,另一个则与线粒体释放细胞色素c有关。线粒体途径既可由外部信号也可由内部信号如DNA损伤所触发。Bcl-2家族的促凋亡(pro—apoptotic)和抗凋亡(anti—apoptotic)成员可聚集于线粒体表     

质量政策——遵从GMP的关键

在制药业中 ,质量政策是遵从现行ＧＭＰｓ的关键。ＩＳＯ90 0 0指南要求制定一些质量政策以保证行政管理部门建立质量管理系统。已依照ＩＳＯ 90 0 0指南制订了欧洲ＧＭＰｓ ,已经形成强调对质量管理的责任。美国ＧＭＰｓ(修订版 )最近也已被修改 ,并且它们也要求由行政管理部门建立质量政策。尽管美国现行的制药业ＧＭＰｓ没有要求建立质量政策 ,但他们的制度就是要求有健全的商业行为 ,作者在本文中也提倡这一点。质量政策就象任务说明一样 ,设定了在机构内许多决定公司有关质量的基本数值。质量政策确定了各个系统以及行政管理对质量的义…