乙型脑炎病毒可视化分型基因芯片的制备

目的:制备乙型脑炎病毒(JEV)可视化分型基因芯片。方法:根据JEV的基因组序列,应用生物学软件设计JEV分型引物及探针,制备其可视化分型基因芯片;用生物素标记的引物PCR扩增目的片段,并与固定于玻片上的探针杂交,加入链霉亲和素标记的纳米金,银增强实现可视化;进行特异性、灵敏性及重复性试验。结果:探针特异地与相应的标记目的基因片段杂交,并在芯片上呈现较强的阳性杂交信号;2号探针能特异性检出JEV,3、4号探针可分别对Ⅰ型和Ⅲ型JEV进行分型;芯片对JEV质粒检测的灵敏度达105拷贝/mL;以蓝耳病病毒等5种病毒为对照,芯片只对JEV响应,具有特异性;制备的基因芯片具有批间、批内重复性。结论:制备的基因芯片具有高特异性、灵敏性及重复性,可以快速、准确、高通量地对JEV进行可视化分型检测。     

潮霉素抗性3T3细胞的建立和鉴定

目的　建立具有潮霉素 (hygromycin)抗性的 3T3细胞系 ,用于转染目的基因 (pTRE Ins human)的ES阳性细胞克隆筛选的饲养层。方法　通过脂质体转染的方法 ,将含有潮霉素B磷酸转移酶基因的质粒pHyg导入 3T3细胞中 ,利用潮霉素的药物选择特性 ,对转染细胞进行压力筛选 ,并对其进行PCR鉴定。结果　经 5 0 0 μg ml的潮霉素压力筛选后 ,获得了抗性细胞克隆。抗性 3T3细胞的形态和生长速度与正常 3T3细胞没有差异 ,特异性核苷酸引物检测抗性细胞基因组DNA ,可以扩增出对应的核苷酸片段。结论　成功地培育了潮霉素抗性的 3T3细胞 ,为进行目的基因 (pTRE Ins human)转染ES细胞的阳性细胞克隆筛选奠定了基础。     

传染性法氏囊病毒VP2 蛋白的分子生物学研究进展

本文综述了IBDV的保护性抗原蛋白VP2与病毒形态、毒力变异、抗原变异间的关系及在诱导宿主细胞凋亡中的作用。同时也探讨了其在新型疫苗开发中的应用等方面的研究进展。     

常染色体显性遗传非综合征性耳聋致病基因定位研究

耳聋具有高度的遗传异质性, 迄今已定位了51个常染色体显性遗传非综合征型耳聋(autosomal dominant non-syndromic sensorineural hearing loss, DFNA)基因位点, 20个DFNA相关基因被克隆。文章收集了一个DFNA巨大家系, 家系中有血缘关系的家族成员共170人, 对73名家族成员进行了详细的病史调查、全身检查和耳科学检查, 提示39人有不同程度的迟发性感音神经性听力下降, 未见前庭及其他系统的异常。应用ABI公司382个常染色体微卫星多态标记进行全基因组扫描连锁分析, 将该家系致聋基因定位于14q12-13处D14S1021-D14S70之间约7.6 cM (3.18 Mb)的区域, 最大LOD值为6.69 (D14S1040), 与已知DFNA9位点有4.7 cM (2.57 Mb)的重叠区, DFNA9致病基因COCH位于重叠区域内。下一步拟进行COCH基因的突变筛查, 以揭示该家系耳聋的分子致病机制。     

酵母出芽细胞电镜观察、颜色反应与尿素酶活性的比较研究

观察了6个属的1 2株酵母菌出芽时的胞壁结构、重氮基蓝色B盐颜色反应和尿素酶活性,认为出芽型和颜色反应二者有相关性,可以说明这些属种之间的亲缘关系。     

诱导大肠杆菌分泌功能性抗体分段

在正常情况下,细菌不能正确地折叠蛋白质,这是利用重组体细菌产生抗体的主要障碍之一。但是现在情况变了。International Genetic Engineering Inc.(即INGENE公司,在美国加利福尼亚州圣莫尼卡)透露,它已经用大肠杆菌产生并分泌折叠正常的,有功能的抗体分段。该公司的科学家应用它们的技术已产生了含有小鼠可变区和人恒定区的嵌合抗体的Fab(抗原结合分段)。此嵌合抗体分段与原先的小鼠抗体的区别在于它能与靶癌抗原结合。但是,rDNA Fab     

TFP刺激裂殖酵母细胞钙离子内流的质膜效应

ＴＦＰ（１０－１００μｍｏｌ／Ｌ）可引起裂殖酵母（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｐｏｍｂｅ）胞外Ｃａ２＋内流,ＴＦＰ浓度不同,促进Ｃａ２＋内流程度也不一样,５０μｍｏｌ／ＬＴＦＰ的促进作用最大。并且ＴＦＰ浓度越大,Ｃａ２＋内流出现峰值也越早,１０、２０、５０、１００μｍｏｌ／ＬＴＦＰ处理后,胞内总钙出现峰值时间分别为４５、４５、３０、１５分钟。胞外Ｈ＋浓度也会对ＴＦＰ引起的Ｃａ２＋内流产生不同影响,缓冲液的ｐＨ值为６．０时最有利于ＴＦＰ引起胞内Ｃａ２＋含量增加,碱性条件下ＴＦＰ的效果最不明显。由ＴＦＰ引起的Ｃａ２＋内流增加要比单一地增加外钙浓度效果好得多,ＴＦＰ在１０μｍｏｌ／Ｌ浓度的外钙条件下引起的胞内钙含量数值比１０００μｍｏｌ／Ｌ的外钙条件而无ＴＦＰＴ所引起的胞内钙含量还要高５３．９％。缓冲液中加入０．８％的钙离子通道阻断剂ＬａＣ１３或溶液中无葡萄糖的存在,ＴＦＰ的促进作用消失,说明ＴＦＰ促进Ｃａ２＋内流是通过钙离子通道来完成的并需要能量参与。     

人羊水祖细胞的分离和基因修饰

探讨从孕中期羊水中分离出人羊水祖细胞的有效方法和FIX基因修饰后的效果,为血友病B的产前治疗提供可行的基础。从镜下分离出呈致密克隆生长的梭形细胞集落,经培养传代后,通过第3代慢病毒载体将hFIX导入该细胞,经酶联免疫反应(ELISA)等方法检测hFIX的表达并检测凝血活性。用这种方法得到的羊水祖细胞呈成纤维细胞样,倍增时间为39.05 h,该细胞在不仅在蛋白水平表达干细胞表面分子SSEA4,TRA1-60,在基因水平还可检测到NANOG,OCT4,SOX2mRNA的表达。羊水祖细胞导入hFIX cDNA后,能合成并分泌hFIX蛋白,传代后48 h在上清液中的浓度为20.37%±2.77%,凝血活性16.42%±1.78%。上清液中的浓度在第4天达到平台期,为50.35%±5.42%,凝血活性可达45.34%±4.67%。ELISA检测显示转染后的羊水细胞表达的hFIX蛋白的水平呈现基本稳定趋势,波动幅度较小;同时检测FIX凝血活性也与蛋白浓度呈正相关。从羊水中可以分离得到具有多能性祖细胞,转染了hFIX的羊水祖细胞在体外能持续合成有凝血功能的hFIX蛋白,为血友病B产前治疗的新方法提供了实验依据。     

利用异地和往年的气象因子构建郴州地区烟田斜纹夜蛾的年发生动态预测模型

【目的】以湖南省郴州市烟田害虫斜纹夜蛾Spodoptera litura(Fabricius)历年虫情资料为例,探讨利用异地和前一年气象因子构建其当年害虫发生动态预测模型的可行性。【方法】收集整理2000-2013年长沙、2000-2015年郴州、广州、南昌4地历史气象资料(如:温度、湿度、降雨量、日照时数等)以及2000-2015年郴州地区烟田斜纹夜蛾的历史虫情(如:成虫和幼虫的年发生量等)资料,利用SPSS软件中逐步回归分析法和卡平方分析法构建和筛选有效的多因子预测模型。【结果】利用郴州市16年斜纹夜蛾虫情资料,郴州、长沙2个不同地区对应年份的共170个气象因子,广州、南昌2个不同地区对应年份的共104个气象因子,按回归模型(方程)满足(1)总体或某因子显著水准P≤0.05;(2)多重共线性方差膨胀系数最大值VIF≤5;(3)理论模拟值或预测值与实测值的χ~2适合性检验值(Karl.Pearson)P(χ~2)≥0.05的3个基本条件,筛选模型中的影响因子和有效预测模型,共获得显著影响因子67个,建立显著有效模型16个。卡方检验结果表明,16个模型的全部回测结果均满足χ~2χ_(0.995)~2,即所建这些模型的回代预测值与实测值几乎完全相同;对未参与建模的年份的幼虫成虫进行预测,共获得4组卡方累计值,第1组满足χ~2χ_(0.995)~2,第2组满足χ~2χ_(0.950)~2,第4组满足χ~2χ_(0.500)~2,第3组满足χ~2χ~20.250。【结论】合理利用异地和前一年气象因子预测同一地点当年害虫年发生动态的方法是准确可行的。该方法与以往仅利用当年和本地气象因子进行预测的方法相比,具有明显的下列优点:(1)可提前发布长期预报的时间;(2)某地只要有足够时长的系统的历史虫情资料积累,即便没有当地对应的历史气象资料,同样可以开展预测模型的构建。而以上两点正是人们一直在寻求要解决的现实问题,因此本研究结果具有较强的可实用性和可推广性。     

发光酶基因lux AB标记硅酸盐细菌NBT菌株的研究

外源基因标记技术为研究土壤引入细菌的生态行为提供了有效的检测手段,通过选择不同的碳源和降低碳氮比筛选获得0．25％麦芽糖作为碳源的菌体制备培养基,对硅酸盐细菌BT菌株进行紫外诱变和抗生素抗性驯化获得—株抗利福平200μg·ml^-1的NBT-R200菌株,含发光酶基因luxAB的质粒pTR102：：luxAB在辅助质粒pRK2013的帮助下转入该菌株中,从而赋予NBT菌株以发光活性和利福平、卡那霉素、四环素三种抗生素抗性．以对数生长期的菌体制备受体细胞,发现对数生长前期的细胞转移频率最高,可达6．70×10^-5,杂交比例以1：1：1适宜．标记菌株RL85的释钾能力没有丧失且有提高,发光特性稳定,连续转接20次后仍具有发光活性和3种抗生素抗性,适用于根际微生态学研究。