安徽地区克氏原螯虾白斑综合征的诊断及朔源

[目的]诊断安徽地区养殖的克氏原螯虾发生疫情的病原,追踪感染源,为疫病的防控提供依据.[方法]采集病料,参照OIE推荐的套式PCR法检测白斑综合征病毒(WSSV).将病螯虾鳃丝组织研磨后离心,取上清液接种健康克氏原螯虾.透射电镜观察病原特征.综合流行病源学及病原检测,分析养殖地区的可能感染源.[结果]发病螯虾感染了WSSV,动物实验可见和发病螯虾相同的临床症状,证实该病原引起养殖螯虾发病.电镜观察可见典型的白斑综合症病毒颗粒.流行病学调查显示,水产颗粒膨化饲料和冷冻饲料甲壳类检测阳性.[结论]该地区养殖的克氏原螯虾近年爆发的疫病病原为WSSV,推断地区性克氏原螯虾WSSV的感染并流行与污染的饲料有关.     

肝脏去唾液酸糖蛋白受体特异性RNA适配子的SELEX筛选与鉴定

目的获得能够特异性高亲和力结合肝脏特异性去唾液酸糖蛋白受体（asialoglycoprotein receptor,ASGPR）的RNA适配子,为开发诊断和治疗肝脏疾病的靶向性试剂和药物奠定基础。方法合成一个长度为115nt含有25个随机序列的单链DNA随机文库,通过体外转录构建出单链RNA适配子随机文库,以肝脏ASGPR大亚基为靶蛋白,采用SELEX（systematic evolution of ligands by exponential enrichment）技术筛选具有高亲和力的AsGPR特异性RNA适配子;通过膜结合测定实验、凝胶阻滞实验鉴定筛选适配子对靶蛋白的特异性和亲和力。结果经过12轮筛选获得了具有高亲和力的肝脏ASGPR特异性RNA适配子。结论成功地筛选出了具有离亲和力的肝脏ASGPR特异性RNA适配子库。     

杭州石荠苧生态学特性的研究

杭州石荠（Ｍｏｓｌａｈａｎｇｃｈｏｗｅｎｓｉｓ）的种子完全靠风传播,但由于种子大,传播距离不远;种子在冬季休眠,春天（２月末３月初）萌发,种子萌发率很低,尤其是水选上层种子,主要原因是质量差。杭州石荠的营养期从３月初到８月上旬,株高在８月中旬以前基本为匀速增加,早期生长极为缓慢。形态和生殖力的环境可塑性极强,自然生长的植株冠幅变动在４～５６１６ｃｍ２之间。杭州石荠在自然生境中有时形成单优群落,通常与其它植物伴生。由于早期生长慢,限制了其在群落中的竞争能力,在土壤条件好的地方绝大部分被排挤掉,只是由于其极强的耐旱能力才在高温、干旱、土少的生境中得以存活。将同属不濒危的华荠与之比较,其种子小于杭州石荠,但萌发率却高于杭州石荠。华荠的植株较矮,花色不如杭州石荠鲜艳,同在路边生长,不像杭州石荠那样容易被人采摘;华荠的根较杭州石荠的根深,抗雨水冲刷能力较强。华荠在自然生境中植株投入生殖的比例大于杭州石荠。     

酶法拆分生物素中间体及其反应条件的优化

探讨多种具有水解酯键的商品化酶作用于生物素中间体1（1H-呋喃[3,4-d]并咪唑-6-氢-1,3-二苄基-2,4-二酮）的两种异构体,在水-有机相中进行选择性水解结果并进行了活性比较,从而找到一种活性较高的中性脂肪酶。最后对该酶最佳反应条件（水/有机相体积比、有机溶剂的选择、温度、pH值）作了研究,并建立快速鉴定两种异构体的方法。该酶的最佳反应条件为：在50ml苯或甲苯为介质,加水6ml,35℃ pH7,反应6h,产物的EE值为99%。     

三氯化铁比色法测定曲酸含量方法的改进

曲酸(Ｋｏｊｉｃａｃｉｄ)又名5-羟基-2-羟甲基-4-吡喃酮,1907年斋滕在蒸米发酵物中发现曲酸,1924年,薮田测定了曲酸的结构[1]。曲酸在食品中可作为防腐剂、保鲜剂、护色剂,由于其特殊的性质和结构能抑制熏肉中亚硝酸钠转化为致癌的亚硝胺;曲酸具有抑制黑色素生成酶-酪氨酸酶活性的功能,有显著的增白作用,现已在美白化妆品、浴剂及牙膏等日化工业中应用[2];它还可作为香料合成的中间体,故此国内外近来对曲酸开展了广泛研究。目前,发酵法生产曲酸的方法有:表面静态培养法、通风发酵法、半连续微孔薄膜表面液态培养技术、固定化细胞技术等[3]…     

高中生物学遗传与变异实验课教学案例开发

通过接合作用,大肠杆菌携带的质粒载体pFAJ1819::mTn5gusA -pgfp21转入目标受体菌催娩克氏菌;载体上的转座子mTn5gusA -pgfp21携带的葡萄糖苷酸酶基因(gusA,无启动子)、卡那霉素抗性基因(nptⅡ,有启动子)和2个绿色荧光蛋白基因(gfp,有启动子)插入到催娩克氏菌的基因组DNA中;借助绿色荧光蛋白、gusA及卡那霉素抗性基因的表达,形成的表型直观变化展示细菌的遗传与变异现象,可以作为高中生物学实验的教学案例.     

金环蛇(Bungarus fasciatus Schneider)蛇毒的研究——Ⅰ.金环蛇蛇毒毒性组分的分离纯化与鉴定

金环蛇毒经羧甲基-葡聚糖凝胶C-50柱层析分离为几个主峰,其中Ⅷ、Ⅹ、ⅩⅢ、ⅩⅣ、ⅩⅤ及ⅩⅥ六个峰为主要致死成分。在大白鼠膈神经-膈肌及其他神经肌肉标本上用电生理方法检测蛋白含量较高的Ⅹ_2、ⅩⅢ_2、ⅩⅣ_2及ⅩⅥ_1峰的作用,观察它们对微终板电位、终板电位及肌膜电位的影响。此外,还检测它们的离体去神经肌肉标本对乙酰胆碱敏感性的影响。实验结果提示,ⅩⅣ_2峰及ⅩⅥ_1峰中含有作用于突触后的神经毒性组分,ⅩⅢ_2峰中含有细胞毒性组分,X_2峰中含有细胞毒性及突触前神经毒性作用组分。再经Bio Rex-70柱层析后,从ⅩⅢ_2峰中纯化得一个细胞毒素,从ⅩⅣ_2峰中纯化得一个突触后神经毒素,它们在8M 尿素聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳中呈单一区带。凝胶过滤法测得该细胞毒索的分子量为13200、神经毒素的分子量为7,900。细胞毒素的小白鼠静脉注射最小致死量为4.1微克/克,神经毒素为0.16微克/克。     

棉铃虫卵和龟纹瓢虫,中华草蛉分布格局的关系研究

通过田间调查,研究了棉铃虫卵和龟纹瓢虫、中华草蛉空间分布的关系．研究表明,棉铃虫卵和龟纹瓢虫、中华草蛉在棉株垂直各层上的数量间相关系数６ 月分别为０ ．５６９６ 、０ ．８６２０ ,７ 月为０ ．８３００ 、０ ．９２８２ ,８ 月为０ ．９０８３ 、０ ．８２０１ ,除６ 月龟纹瓢虫外,其余皆达显著或极显著水平;垂直格局上棉铃虫卵和龟纹瓢虫扩散系数和久野指数间相关系数分别为０ ．８２１１ 、０ ．７７９１ ,皆达极显著水平;水平格局上棉铃虫卵和中华草蛉扩散系数和久野指数间相关系数分别为０ ．７９２５ 、０ ．５２２８ ,分别达极显著和显著水平．     

一种被毛孢(Hirsutella sp.)培养液中自由基清除剂的分析、分离和制备

[目的]在一次对虫生真菌代谢物进行大规模的清除自由基活性物质筛选中,发现一种被毛孢(Hirsutella sp.)菌株RCEF0881发酵液中存在有较强的清除自由基活性物质.本研究目的是初步搞清这些活性成分的具体组成,并制备出一定量的纯品用于进一步的结构鉴定.[方法]用有机溶剂法提取活性成分;用二苯基苦基苯肼自由基(DPPH)酶标仪法和薄层色谱法进行活性测定;用高分辨液质联用方法进行活性成分初步分析和鉴定;用反相制备色谱法制备活性组分.[结果]提取实验结果表明具清除自由基活性的物质能较好地被乙酸乙酯提取出来;液相色谱-质谱-活性测定分析表明提取物中活性组分的可能分子式分别为C7H6O4、C8H8O3和C12H14N2O.结合色谱特性、紫外光谱特征、质谱碎片和数据库查询可初步推断它们分别为二羟基苯甲酸、羟基甲基苯甲酸和生物碱类物质,但具体结构还有待于进一步确认.从高效液相色谱和质谱离子流的峰面积可知上述3种活性物质中C12H14N2O的含量最高.本研究成功地用反相制备色谱制备出该天然活性组分的纯品.该3种清除自由基活性物质都是首次发现存在于虫生真菌的代谢物中.     

腺相关病毒介导的小鼠Ⅸ因子在血友病B小鼠体内表达研究

通过重组HSV/AAV辅助病毒方法制备出高滴度(>10¹²)的重组AAV/mFⅨ病毒颗粒, 并注射到血友病B小鼠的后肢骨骼肌中, 获得了稳定的高水平小鼠Ⅸ因子表达(>370 ng/mL), 持续时间超过350 d. 治疗组小鼠体内的Ⅸ因子活性达到正常值的30%, 而且出血症状得到显著改善. 在小鼠血浆中未发现抗Ⅸ因子的中和抗体, 第1次注射后抗AAV抗体的水平也非常低. 重复注射AAV/mFⅨ病毒后, 不同剂量组的小鼠体内的抗AAV抗体出现了不同的结果. 组织分析结果证实了血浆中有功能的FⅨ因子确实来源于骨骼肌. 以上结果显示, AAV介导的基因转移是血友病B基因治疗的极有前途的方法.