广东省水库3株水华微囊藻16s rRNA序列分析

微囊藻是有害淡水水华的主要藻种,但其形态分类困难,制约了相关研究的深入;16SrRNA序列分析广泛应用于微生物种类鉴定。测定广东3个水库的3株水华微囊藻16SrRNA基因部分序列,运用Mega3软件分析其遗传特征,结果表明,3株藻同源序列长度为1305bp,没有插入与缺失,序列中有3个变异位点,A T含量最大差异仅为0.2%,核苷酸相似性在99.85%以上,不能区分广东省水库同一藻种的不同藻株,表明水华微囊藻种内16SrRNA基因序列相当保守。要准确鉴定广东省水库微囊藻种类,丰富广东省水库微囊藻分子层面的分类资料,需要比较更多形态和地理来源的藻株,建立16SrRNA和其它基因序列核苷酸数据库,分析种间和种内差异,设计种专一性的分子探针。     

MTA1转基因小鼠的构建及鉴定

目的将人的MTAl外源基因整合到C57BL／6J小鼠中,构建稳定高表达MTAl的小鼠模型。方法通过RT—PCR方法克隆人的MTAl编码序列,将MTAl插入真核表达载体pcDNA3．1构建pcDNA3．1-MTAl载体,回收片段后利用显微注射技术将目的基因片段注入到受精卵的雄原核中,使用MTAl特异性的引物经PCR鉴定出基因型阳性的转基因小鼠,再利用Western—blot及免疫组化方法检测MTAl在转基因小鼠全身级织表达情况。结果成功构建了MTAl转基因注射片段。在320枚显微注射受精卵中挑选出300枚存活卵移植到10只ICR小鼠假孕受体的输卵管中,10只ICR小鼠均怀孕,移植成功率为100％,共生出子代鼠80只,经PCR检测其中共有9只整合了MTAl基因,整合率为11．25％。经PCR鉴定MTAl整合阳性的F1代小鼠,再经Western—blot和免疫组化分析检测MTAl表达水平在脑、肺、肝、肠等组织中表达明显增高,肾、骨骼肌表达无差异。结论成功构建了脑、肝、肺、结肠高表达MTAl的转基因小鼠,为进一步MTAl研究奠定了良好的研究模型。     

内蒙地区发热患者血清中冠状病毒抗体的检测

目的分析内蒙地区发热患者中冠状病毒的感染情况。方法以SARS冠状病毒感染Vero细胞涂片为冠状病毒抗原片,用间接免疫荧光法分别检测55例发热患者和68例正常人血清中冠状病毒的IgG、IgM抗体。结果发热患者血清中冠状病毒IgG抗体和IgM抗体阳性率分别为29.1%(16/55)和10.9%(6/55),而正常人血清中只检测到2.9%(2/68)的IgG抗体,且未检测到IgM抗体,2组患者的IgG和IgM抗体阳性率比较差异均有显著性;随机选取7例患者的IgG阳性血清进行SRAS冠状病毒的特异性抗体封闭实验,结果有6例血清仍为阳性,有1例血清转为阴性,说明冠状病毒IgG抗体阳性血清中85.7%为普通冠状病毒特异性,14.3%为SARS冠状病毒特异性。结论普通冠状病毒是内蒙地区发热患者的主要病原体之一,部分患者还存在SARS冠状病毒的既往感染。     

一株α-苯乙胺的微生物降解菌的优选及其最佳生长条件研究

针对磷霉素制药废水处理难的问题,采用生物强化处理技术,在前期获得两株磷霉素制药废水中α-苯乙胺降解菌P1和P2的基础上,优选出一株α-苯乙胺优势降解菌,并对其最佳生长条件进行研究.结果 表明:两株菌P1和P2中优势降解菌为P2;其最佳生长条件为:接种量20％,温度35℃,pH7;P2的降解效率受传代次数的影响,传代17...     

太平洋牡蛎i型溶菌酶基因的克隆与重组高效表达

在双壳类软体动物牡蛎体内,溶菌酶(Lysozyme)在实现宿主免疫防御,破坏和消除侵入体内的病原中发挥着重要的作用.根据GenBank已有的太平洋牡蛎溶菌酶的全长cDNA序列(GenBank:AB179775),通过RT-PCR技术,从太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)中克隆得到溶菌酶(简称为CgLys)基因的开放阅读框(open reading frame,ORF)序列.生物信息软件分析表明,其ORF为414 bp,编码137个氨基酸(aa),前20个aa为信号肽,成熟肽由117个aa组成,其分子量为13.2 kD.通过构建分子系统发育树对其同源性进行分析比较,初步推断该CgLys属于i型溶菌酶.将该CgLys基因的成熟肽亚克隆进原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组质粒pET32a(+)-CgLys,再转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS.该基因工程菌经IPTG诱导发酵后,成功高效地表达了重组CgLys蛋白,其分子质量约为18 kD.该重组CgLya蛋白主要存在于细菌裂解液的上清液中,即以可溶性蛋白形式存在.上述结果将显著简化后续的蛋白纯化过程,为今后扩大规模生产牡蛎溶菌酶提供参考.     

黄河上游玛曲县生态环境问题与综合治理对策

1　自然地理条件概况玛曲县位于甘肃省西南部 ,10 0°4 5′4 5″～ 10 2°2 9′0 0″Ｅ ,33°0 6′30″～ 34°30′15″Ｎ ,土地总面积 1 0 19× 10 4 ｋｍ2 ,是黄河上游以藏民族聚居为主的纯牧业县。阿尼玛卿山、西倾山两大山系主脉形成的西部高山区、中南部阿尼玛卿山东南端和西倾山前山地带丘陵区及黄河沿岸河流阶地构成地形地貌格局[12 ] ,大部分区域海拔 35 0 0～ 380 0ｍ。玛曲属高原大陆性气候 ,年平均气温 1.1℃～2 .7℃ ,年平均降水量 5 0 1.6～ 6 15 .5ｍｍ ,主要集中于 5～ 9月 ,年蒸发量 10 0 0～ 15 0 0ｍｍ[5] 。年平均风速 2…     

小兴安岭白头鹤繁殖习性初报

白头鹤(Grus monacha)仅繁殖于俄罗斯的远东地区和中国的小兴安岭森林沼泽湿地,越冬于日本南部、韩国南部沿海和中国长江中下游(Col-lar,2001),是国家一级保护野生动物,被中国濒危动物红皮书列为濒危物种,I UCN(1994,2001)列为易危(VU)物种,并列入CITES附录Ⅰ中(郑光美、王岐山     

产气肠杆菌菌体内核苷磷酸化酶的诱导表达

目的:阿糖腺苷(Ara-A)是一种广谱抗病毒药物,临床上用于治疗多种病毒性疾病.同时也是合成阿糖腺苷单磷酸(Ara-AMP)的重要原料.本课题旨在寻找一种高效酶法生产嘌呤类阿糖核苷的方法.方法:以产气肠杆菌完整细胞为酶源,研究产气肠杆菌菌体培养条件对核苷磷酸化酶的影响及其诱导性.结果:胸苷磷酸化酶、尿苷磷酸化酶和嘌呤核苷磷酸化酶均可被多种核苷、核苷酸甚至碱基诱导.胞苷或胞苷酸的添加量为15-20mmol/L,诱导时间在0-8小时均可.经胞苷和胞苷酸诱导的菌体可使酶反应时间缩短6倍,大大提高了反应效率.经诱导的菌体,在反应后仍保持较高的核苷磷酸化酶活力;而未经诱导的菌体,一次反应后即丧失大量的酶活力.结论:核苷磷酸化酶的活性可以通过诱导而提高,以此优化阿糖腺苷的生产.     

RNA干扰抑制结肠癌血管内皮生长因子的体内实验研究

目的:应用RNA干扰技术抑制血管内皮生长因子(VEGF)表达,并通过体内实验,观察在体内复杂环境下能否有效抑制VEGF表达,以及结肠癌细胞凋亡的情况,为RNA干扰技术的临床应用奠定基础。方法:体内实验中,将RNA干扰质粒以水动力法导入结肠癌裸鼠模型,通过RT-PCR观察VEGF mRNA表达受抑的程度;Western杂交检测VEGF蛋白的表达情况;通过测量比较瘤体大小和Tunel法,观察VEGF受抑制后,肿瘤形态和细胞凋亡的变化。结果:体内实验中,通过RT-PCR和Western杂交检测,发现这两种抗VEGF表达载体能够有效抑抑制裸鼠结肠癌模型瘤体VEGF的表达;VEGF受抑制后,瘤体增长受到抑制,Tunel法显示,RNA干扰可致肿瘤细胞凋亡增加。结论:Tunel法分析显示,当VEGF受抑制后,肿瘤细胞凋亡发生率明显增加,针对VEGF基因的shRNA表达载体能够明显抑制裸鼠VEGF基因的表达。     

用同位素竞争技术研究与L-天门冬酰胺酶相关的代谢产物

同位素竞争(isotopic competition)技术是揭示各种代谢产物相关性的有效而便捷的手段。Roberts等曾报告借助这一方法考查野生型大肠杆菌氨基酸生物合成的途径。该研究技术基于以下原理:在以~14C-葡萄糖为唯一碳源的培养基上培养微生物,放射性~(14)C将分布于微生物体的各种氨基酸中。倘若同时把某已