家蝇细胞凋亡起始酶Caspase-1基因的克隆及在不同虫态的表达

为了研究Caspases家族在昆虫发育变态中的作用,通过RT-PCR扩增并结合RACE技术,克隆得到家蝇Musca domestica Caspase-1基因1条,命名为Mdom-Caspase-1（GenBank中cDNA序列号为EU854472, 氨基酸序列号为ACF71490）。该基因全长1 295 bp,阅读框序列870 bp,共编码289个氨基酸,理论分子量32.83 kDa,等电点8.67。 Mdom-Caspase-1蛋白有5个保守的半胱氨酸位点QACQG, 具有Caspase的典型特征; 整个分子呈现亲水性, 有8个区域共89个氨基酸为亲酯性, 蛋白质二级结构主要由11个α螺旋区、7个β-折叠区、17个β-转角区组成。昆虫间Caspase-1分子具有明显的保守性, Mdom-Caspase-1与黑腹果蝇Drosophila melanogaster、埃及伊蚊Aedes aegypti和致倦库蚊Culex quinquefasciatus的Caspase-1氨基酸序列相似性为65%~77%。RT-PCR半定量分析结果表明, Mdom-Caspase-1基因在家蝇各个虫态中均有表达, 但在卵期、3龄幼虫、预蛹、蛹和羽化5 d的雌虫中的表达量明显高于其他虫态。这些结果提示Caspase-1可能与昆虫发育变态关系密切, 为进一步研究昆虫Caspase-1功能、设计Caspase-1抑制剂提供了分子基础。     

基于BLI技术的脂多糖转运蛋白LptA/LptC相互作用检测方法的建立

革兰阴性菌脂多糖转运蛋白 (Lipopolysaccharide transport,Lpt) LptA和LptC通过稳定的相互作用对脂多糖装配起到重要作用,它们相互作用的阻断会导致脂多糖层缺损和菌体死亡,因此具备成为抗菌药物筛选靶标的可行性。文中应用生物膜干涉 (Biolayer interferometry,BLI) 技术对LptA/LptC相互作用进行检测,为建立体外的LptA/LptC蛋白相互作用阻断剂筛选方法奠定基础。首先在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3) 中进行大肠杆菌LptA全长、LptA去信号肽和LptC蛋白的表达;纯化的蛋白使用生物素标记后结合到预先稀释液封闭的超级链霉亲和素 (Super streptavidin,SSA) 生物传感器,然后再检测与未标记蛋白之间的结合信号,同时做无蛋白的稀释液对照;使用同样的方法检测生物素化蛋白与小分子的结合以及相互作用的阻断;空白对照采用未结合生物素化蛋白的传感器,检测上述系列稀释样品。响应信号采用稳态分析 (Steady state analysis) 方式拟合,计算样品平衡常数 (KD) 值。本研究成功获得高纯度的LptA和LptC蛋白,并且检测到结合传感器的LptC蛋白与LptA全长蛋白和LptA去信号肽蛋白均具有良好的结合活性,KD值分别为2.9e–7±7.9e–8、6.0e–7±2.8e–8;结合传感器的LptA去信号肽蛋白与LptC蛋白具有良好的结合活性,KD值为9.6e–7±7.2e–9;所有结合曲线呈现出明显的快结合-快解离形态。小分子化合物IMB-881能够与LptA结合来阻断LptA/LptC之间的相互作用,与LptC之间无结合活性。文中首次建立了基于BLI技术的LptA/LptC相互作用检测方法,并且证实该方法能够用于小分子阻断剂阻断活性的评价,为后续的LptA/LptC蛋白相互作用阻断剂筛选奠定了基础。     

雷公藤解毒持效双向发酵工艺的建立

采用双向发酵的原理,运用"发酵过程动态比较法"研究了灵芝接种于雷公藤药性基质上发酵不同时间所得菌质的化学成分、急性毒性和免疫功能的变化,以其确定雷公藤解毒持效双向发酵的最佳发酵终点。研究结果表明:发酵第30天所得的菌质(G30)总二萜的含量最低,为0.57%;与雷公藤生药比较,G30的LD50最高,且发酵第30天所得菌质的体液免疫和细胞免疫抑制作用最强。综合对成分含量、毒性及药效的动态数据联系比较、分析,确定了雷公藤解毒持效双向发酵的发酵终点与适宜的发酵周期是菌丝长满瓶后的第30天。     

厦门市入侵害虫芒果壮铗普瘿蚊（双翅目：瘿蚊科）为害情况调查

【背景】芒果壮铗普瘿蚊是厦门市2000年发现为害芒果树的一种入侵害虫,并呈现逐年扩散趋势。【方法】本文于2009～2010年针对厦门市7个代表性地点（集美大学周边、同安小西门、思明湖滨南路、东渡周边、鼓浪屿、海沧沧虹路、杏林镇）的芒果壮铗普瘿蚊的为害率、为害程度及羽化率情况进行调查。将叶片上的虫瘿密度划分为3个等级,分别为1～50、51～100、〉100个·片-1。【结果】2009年春梢叶片受害率最高的为海沧区（95.46%）,但与思明区（94.00%）、同安区（80.09%）没有显著差异,集美（22.50%）被害率显著低于其他区域;2009年秋梢海沧区叶片受害率达到97.05%,显著高于其他区域,集美受害率最低（18.00%）;2010年春梢叶片受害率较低,均在3%以下,各区域差异不显著。2009～2010年的为害程度主要集中在1～50个·片-1,2009年春各区域的为害率普遍高于2009年秋和2010年春。羽化率比较结果表明,各区域瘿蚊的羽化率相当,2009年春均在80%左右波动,2009年秋为60%～94%,2010年春各区域瘿蚊的羽化率明显低于2009年。【结论与意义】由于厦门市2010年春气温明显低于2009年,造成调查时为害情况较轻。但从总体上看,芒果壮铗普瘿蚊在厦门市的发生情况较为严重。本研究可以为明确该虫的扩散趋势及制定防治措施提供依据。     

拟青霉菌代谢产物对菜粉蝶幼虫的生物活性

淡紫拟青霉(Paecilomyces lilacinus)甲醇萃取物柱层析活性馏分DM6和拟青霉(Paeecilomyces sp.)菌株X1甲醇萃取物柱层析活性馏分X1M5对菜粉蝶Pieris rapae(L.)4龄幼虫具有较强的选择性和非选择性拒食作用,处理后24h选择性AFC50分别为5.8652mg/mL和3.5239mg/mL,非选择性AFC50分别为9.0095mg/mL和14.0234mg/mL。饲喂法、注射法、点滴法测定结果表明,DM6和X1M5对菜粉蝶4龄幼虫具有较强的毒杀活性,其中注射法处理后72h,DM6和X1M5对菜粉蝶4龄幼虫的LD50分别为0.1846μg/头和0.6784μg/头。DM6和X1M5以5.0mg/mL饲喂法处理菜粉蝶3龄幼虫后,试虫生长发育受到强烈的抑制作用,发育抑制率分别为73.34%和63.30%。这些结果对于进一步研究拟青霉菌杀虫活性成分具有重要参考意义。     

产谷胱甘肽昆虫共生酵母菌的筛选、鉴定和培养条件优化

从水黾肠道中分离并筛选到1株产还原型谷胱甘肽(GSH)的酵母菌株SM3,经初步鉴定为Candida carpophila菌。通过正交实验优化菌株产GSH的最佳培养基成分:3%蔗糖为碳源,0.2%(NH4)2SO4为无机氮源,0.8%酵母浸粉为有机氮源,K2SO40.3%,KH2PO40.6%,MgSO40.15%。单因素实验表明其较佳培养条件为:接种量15%,培养时间36 h,摇床转速200 r/min,温度32℃,pH 6.0,装液量为20/250 mL。优化后GSH产量可达159.35 mg/L,较优化前提高了105.27%。     

常染色体显性遗传小眼球病与12个微卫星多态标志的初步连锁分析

本文报道了一个常染色体显性遗传小眼球的大家系,初步排除了此家系致病基因在目前已知位点(CHXl0、MITF、RX、MCOP、NN01、NN02)的可能,并探讨了与11号染色体上的微卫星DNA标志的连锁关系。采用聚合酶链(PCR)扩增微卫星DNA片段,扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,用银染显示结果;用MLINK连锁分析软件计算LOD值。结果显示,本家系小眼球致病基因与6个已知位点及ll号染色体上的微卫星DNA标志之间不存在连锁,提示此家系的致病位点目前尚未被定位。     

东海赤潮高发区春季叶绿素a和初级生产力的分布特征

2002年4-5月对东海海域进行了综合调查,分析了海区叶绿素a和初级生产力的分布特性．结果表明,大面站表层平均叶绿素a浓度为1．086mg·m-3．分级叶绿素a结果显示．春季东海浮游植物以微型和微微型(<20μm)占优势,其对海区叶绿素a的贡献为64％,超微型浮游植物(<5μm)占浮游植物生物量的27％．营养盐分布和浮游动物的摄食压力影响了叶绿素a及其粒级结构的分布．平均初级生产力为10．091mg·m-3·h-1。赤潮跟踪的R-03、RL-01、RG-01站的平均初级生产力为399．984mg·m-3·h-1．光和营养盐成为叶绿素和初级生产力平面分布的主要限制因子．表层叶绿素a和初级生产力均在调查海区的123·E纵断面冲淡区产生高值区．DC-11站浮游植物生物量异常高,表层叶绿素a达到9．082mg·m-3,初级生产力为128．79mg·m-3·h-1．但并未出现水色异常．     

广州市龙头山森林公园总体规划的生态经济问题研究

受广州市及黄埔区绿化委员会和黄埔区庙头村村委会的邀请,广东省生态学会组织近２０名专家对位于广州市国家一级保护文物古迹南海神庙附近的龙头山森林公园进行了３次较为全面的考察。考察内容涉及生态、经济、地形、地貌、地质、土壤、景观、植被、动物、水文、气象等方面。我们负责公园的生态经济方面的发展规划问题研究。１龙头山森林公园的生态经济现状与问题龙头山森林公园位于广州市黄埔区的南岗镇和大沙镇交界区域,有大小山峰十余座,方圆２ｋｍ２。主峰鸡冠山在南岗镇庙头村北面,海拔１９７．３ｍ,是沿广（州）深（圳）大道的最…     

吉林省中部商品粮地区农村生态发展战略动态仿真模型

农村生态系统是一个极其复杂的大系统,涉及到农、林、牧、渔以及乡镇企业等各个产业部门。描述这样一个大系统的内部结构、总体功能以及这些结构和功能的发展趋势,靠一般的数学规划方法(如线性规划、非线性规划、投入产出等)是很难做到的。而系统动力学则能够解决变量多、关系复杂的大系统的调整结构、强化功能的问题。因此,我们采用系统动力学方法,用DYNAMO语言建立了吉林省中部地区农村生态系统动态仿真模型。通过设计不同的方案,对吉林省中部地区的农村生态环境进行了长时间序列的规划、设计、试验和预测,对未来农村生态环境的发展有了比较清醒的认识和积极的、切实可行的对策。