用超常的复性温度改善小麦RA PD分析的效果

用38～66℃不同复性温度处理,比较了18条随机引物的扩增结果.发现复性温度在40～50℃之间均有数量不等的扩增产物,不同引物的最高复性温度不同,有些引物用60℃以上的复性温度仍有扩增产物.一些在35～38℃的复性温度下非特异性产物较多的引物,通过大幅度提高复性温度,能提高扩增产物的特异性,获得清晰的RAPD带型。 Abstract:To decrease nonspecific products and obtain clear RAPD patterns,18 10- mer random primers were tested at different annealing temperatures.The results indicated that all the amplification can be performed when the annealing temperature is in the range of 40~50℃.There were a few primers with which the amplification was still performed when the annealing temperature is above 60℃.By using high annealing temperatures,some primers which produce more nonspecific product at the annealing temperatures of 35~38℃ could generate reproducible and distinct bands.     

小麦品种Triticum spelta album中抗条锈病基因Yr5的RAPD标记

共用520个10碱基随机引物对小麦抗条锈基因Yr5的近等基因系进行了RAPD分析,发现了3个特异性DNA片段S1496、S14181950与Yr5基因连锁,其中S1496761与Yr5基因紧密连锁,遗传距离为2．7cM。经对特异性DNA片段S1496 761进行克隆,测序,设计了PCR扩增用专化引物SC－S1496 761a和SC－S149676b,用该引物可扩增出与原RAPD引物扩增出的相似的特异DNA片段,由于该引物还可扩增出迁移率极为相近的另1条非特异带,在琼脂糖凝胶上难以分辨,需用聚丙烯酰胺凝胶电泳结合银染进行检测,经用F2分离群体及部分相关品种材料检测,已证明该标记的可靠性。     

双加氧酶活力对细菌降解菲的指示作用

在液体培养基中选用两种石油降解细菌进行菲降解实验,研究了菲降解率和双加氧酶活力的变化。结果表明,菲降解率受其浓度的影响,当菲浓度为100mg·L-1时,其降解率为最高。而菲浓度高于100mg·L-1时,其降解率下降。实验发现在菲浓度为50～250mg·L-1条件下,细菌的双加氧酶活力与其菲的降解率存在较好的相关性,对细菌降解菲具有指示作用,可将双加氧酶活力作为菲降解率变化的评价指标。     

利用双SLD光源提高OCT纵向分辨率的理论研究

提高光学相干层析成像(OpticalCoherenceTomography:OCT)系统纵向分辨率的关键是选取合适的光源,本文将双SLD光源代替传统OCT系统中的单个SLD光源,通过理论分析和计算机仿真,表明双SLD光源能有效提高OCT系统纵向分辨率。     

重庆黔江发现尾突角蟾

2022年7月在重庆市黔江区武陵山市级自然保护区采集到1号两栖动物标本,经形态特征比较,与尾突角蟾（Boulenophrys caudoprocta）相似;基于线粒体16Sr RNA和COI基因联合构建布角蟾属（Boulenophrys）部分物种系统发育树,此次采集的角蟾标本与尾突角蟾聚为一支,具有较高的支持率（1/100,贝叶斯法/最大似然超快速引导支持分析值）;基于p-distance估算本次采集的角蟾标本与尾突角蟾湖南模式产地标本间的遗传距离为0%,远小于角蟾属物种间的遗传距离（8.7%～15.9%）。综合形态特征和分子系统发育比较,确定此次采集到的角蟾标本为无尾目（Anura）角蟾科（Megophryidae）布角蟾属的尾突角蟾,系重庆市两栖动物分布新记录种。重庆市尾突角蟾的发现,进一步扩展了该地区的物种名录,拓宽了对尾突角蟾分布范围的认知,为该属区系分类学和系统学提供了新信息,同时为当地生态系统和物种多样性的研究提供了基础信息,对制定更加全面和针对性的保护措施有着积极的促进作用。     

中国半夏属植物亲缘关系的SRAP分析

利用序列相关扩增多态性(SRAP)标记对中国半夏属植物5个种的亲缘关系进行了研究.38个引物组合在半夏属植物的5个种中共扩增出752条清晰的谱带,其中628条谱带具有多态性,多态性比率为83.51％,显示出较高的多态性比率;各物种间的遗传相似系数在0.6513～0.7312之间,聚类分析和主坐标分析结果表明,5种半夏属植物被聚为两大类:掌叶半夏单独聚为一类(Ⅱ),而其它4个种聚为一类(Ⅰ).第Ⅰ类可再分为A和B两个亚类:A亚类包括半夏和石蜘蛛;B亚类包括盾叶半夏和滴水珠.滴水珠和盾叶半夏的亲缘关系最近,其次是半夏和石蜘蛛,而掌叶半夏和其它4个种的亲缘关系都较远,这说明掌叶半夏与半夏属其它种呈姐妹群关系.本研究结果对我国半夏属植物资源的开发利用与保护具有重要意义.     

盐胁迫下朝鲜碱茅的甜菜碱醛脱氢酶活性变化及其基因保守区的克隆

文章探讨了朝鲜碱茅甜菜碱醛脱氢酶活性在盐胁迫下的变化,用简并引物扩增了甜菜碱醛脱氢酶基因保守区序列的结果表明,该保守区段长438 bp,推测编码145个氨基酸,包括醛脱氢酶高度保守序列V[T/S]LELGGKSP和其后29位与酶功能有关的Cys。此序列Genbank登录号为EF095710。     

紫茉莉悬浮细胞培养体系的建立

为建立紫茉莉(Mirabilis jalapa L.)悬浮细胞培养体系,以紫茉莉无菌苗叶片诱导的愈伤组织为材料,筛选紫茉莉悬浮细胞的适宜培养体系。结果表明,紫茉莉愈伤组织在MS+2,4-D 1 mg L-1+KT 0.5 mg L-1的液体培养基中悬浮继代培养3~4次,能得到稳定的悬浮细胞系。培养基的pH值为5.5~5.9,蔗糖浓度为30 g L-1更适合悬浮细胞的生长。紫茉莉悬浮细胞的生长曲线大致呈S型。最佳继代培养时间是10 d,培养液的体积为40 mL时,接种量为7.5 mL,可以较好地保持悬浮细胞系。1 L培养液中可提取分泌蛋白(0.42±0.15) g。这些有助于对悬浮细胞提取分泌蛋白的研究。     

降解性细菌对菲诱导的蛋白及酶活性应答反应

测定了3株以菲为唯一碳源的芽孢杆菌属(Bacillus)菌株(BA11、BA19和BA27)的降解能力、多酚氧化酶和过氧化氢酶的活性及蛋白变化．结果表明,当菲浓度在200mg·L^-1以下时,3株菌多酚氧化酶和过氧化氢酶的活性随菲浓度的提高变化不大,其中BA19和BA27菌株表现出较高的稳定性．当菲浓度为200mg·L^-1时,BA27诱导表达了一条分子量为27000道尔顿的新蛋白条带,同时有些蛋白的合成受到抑制．因此可以认为,诱导产生的新蛋白与其污染条件下的细菌降解能力及稳定性有关．     

金针菇免疫调节蛋白基因fip-fve在毕赤酵母GS115中诱导型和组成型表达

为获得稳定来源并且具有生物学活性的重组金针菇免疫调节蛋白(Fip-fve),将fip-fve基因转至毕赤酵母GS115中进行诱导型和组成型表达。用PCR方法从金针菇子实体基因组DNA中扩增fip-fve基因,连接至pPIC9构建诱导型表达载体pPIC9-FIP-fve,从毕赤酵母基因组DNA中扩增三磷酸甘油醛脱氢酶启动子(pgap),替换pPIC9-FIP-fve上乙醇氧化酶启动子(paox1)构建组成型表达载体pPIC9-PGAP-FIP-fve。将线性化的两种表达载体用PEG法转化毕赤酵母GS115,经组氨酸缺失培养基筛选和酵母菌落PCR鉴定后进行表达。结果表明,重组Fip-fve在以甲醇(1%,V/V)为碳源进行诱导型表达4 d达到最高,粗蛋白表达量为158.2 mg/L,在以葡萄糖(10%)和甘油(1%,V/V)为碳源进行组成型分别在表达第4天和第5天达到最高,粗蛋白分别为46.3 mg/L和29.5 mg/L。SDS-PAGE及Western blotting证明重组Fip-fve已正确表达,血细胞凝集活性检测初步证明重组Fip-fve具有良好生物学活性。