肠炎沙门菌肽脯氨酰顺反异构酶SlyD的基因敲除、表达及酶学特征

【目的】以肠炎沙门菌肽脯氨酰顺反异构酶SlyD为对象,构建基因缺失株及表达纯化该蛋白,为研究其在肠炎沙门菌致病性与应激等方面的作用奠定基础。【方法】参考Gen Bank登录的肠炎沙门菌基因组序列设计用于slyD基因敲除及原核表达的特异引物,运用自杀质粒介导的同源重组技术对肠炎沙门菌C50041 slyD基因进行敲除,构建C50041ΔslyD缺失株;原核表达SlyD蛋白,通过α-糜蛋白酶耦联法对其PPIase活性进行测定;利用生物信息学相关软件,分析SlyD蛋白的氨基酸序列及功能域。【结果】PCR鉴定与测序结果证明成功构建了肠炎沙门菌C50041ΔslyD缺失株,其生长特性与野生株基本一致;SDS-PAGE及PPIase活性分析表明,获得了具有生物活性的可溶性SlyD蛋白;生物信息学分析显示SlyD蛋白由FKBP样肽脯氨酰顺反异构酶结构域、分子伴侣功能域和金属结合区域3个功能区域组成。【结论】成功获得了肠炎沙门菌C50041ΔslyD缺失株和具有PPIase活性的重组SlyD蛋白。     

粘帚霉几丁质酶GcCHI1的结构鉴定及其抑菌作用

【目的】对分离纯化自链孢粘帚霉(Gliocladium catenulatum)HL-1-1菌株的几丁质酶Gc CHI1进行化学结构鉴定,并测定该酶对几种病原真菌的抑菌机制。【方法】几丁质酶Gc CHI1化学结构鉴定采用Nano-ESI-MS/MS技术。该酶对病原真菌菌丝生长、病原菌孢子萌发和病原菌菌核萌发的抑制作用采用牛津杯法等方法。【结果】获得几丁质Gc CHI1胰蛋白酶水解肽段的肽质量指纹谱图,较好的MS/MS图谱,以及3个肽段的氨基酸序列(均15个氨基酸),分别为LYNSNDAIEAFISR、VIGYFTQWGIYGR、LNLGIGYYGR。经Mascot数据库检索认为与来自Stenotrophomonas maltophilials 34S1的几丁质酶A具有高度的相似性。几丁质酶Gc CHI1能明显抑制立枯丝核菌、油菜菌核病菌、番茄灰霉病菌等多种植物病原真菌的菌丝生长、孢子萌发和菌核萌发。【结论】几丁质酶Gc CHI1对多种植物病原菌有抑制作用,因此几丁质酶Gc CHI1是HL-1-1菌株抑菌作用的机制之一。     

斜纹夜蛾酵母双杂交文库的构建及其在蜕皮激素受体互作蛋白筛选中的应用

【目的】蜕皮激素在昆虫变态发育中起着关键的调控作用。蜕皮激素活化为20-羟基蜕皮酮(20-hydroxyecdysone,20E)后与蜕皮激素受体二聚体〔蜕皮激素受体(ecdysone receptor,EcR)和超气门蛋白(ultraspiracle protein,USP)〕结合,启动20E诱导的级联反应。本研究旨在从互作蛋白角度探究EcR/USP自身调控的分子机理。【方法】以重要农业害虫斜纹夜蛾Spodoptera litura为研究对象,通过构建酵母双杂交筛选系统分别筛选了与EcR和USP相互作用的蛋白。【结果】文库转化效率达到3.0×106cfu/μg,文库滴度达到1.3×108cfu/m L,文库插入片段大小在500~2 000 bp之间。4种诱饵质粒(EcRA/p GBKT7,EcRB1/p GBKT7,USP1/p GBKT7和USP2/p GBKT7)对酵母细胞无毒性,并且无自激活性,说明构建的酵母双杂交文库质量可靠。用以上4种诱饵质粒筛选酵母双杂交文库,共得到110个互作蛋白,其中与EcRB1,USP1和USP2互作的蛋白分别有26,52和32个,未筛选到与EcRA互作的蛋白。随后,从中挑选了Dna J-5(Hsp40 homolog 5,一种热激蛋白分子伴侣),MBF2(mediator of Bm FTZ-F1 type 2,一种转录共激活子),polyubiquitin(多聚泛素类蛋白),esr16(ecdysteroid regulated 16k Da protein,一种蜕皮激素调控蛋白)和NEDD8-like(neural precursor cell expressed,developmentally down-regulated protein 8,一种泛素调节相关蛋白)5种蛋白,利用酵母双杂交和Far-Western印迹法进一步验证了蛋白间的互作关系。【结论】分子伴侣和泛素化修饰等在蜕皮激素受体调控中可能起着重要作用。本研究对深入理解昆虫变态发育的分子机理具有重要意义。     

高压氧联合地塞米松治疗突发性耳聋的疗效及对血液流变学的影响

目的:研究高压氧联合地塞米松治疗突发性耳聋的疗效及对血液流变学的影响。方法:选择2012年6月至2015年1月在我院接受治疗的突发性耳聋患者90例(124耳)进行研究。根据数字法随机分成观察组(45例,60耳)及对照组(45例,64耳),两组均给予常规的改善内耳微循环及神经营养类制剂治疗,对照组另给予地塞米松治疗,观察组在对照组基础上另给予高压氧治疗,治疗1个疗程后对比两组疗效,听力改善程度以及血液流变学指标变化。结果:观察组的总有效率是98.33%,显著高于对照组的89.06%,差异有统计学意义(P0.05)。治疗后观察组的听力损失程度显著优于对照组,纯音听阈显著低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。治疗后观察组的高切粘度、中切粘度、低切粘度、红细胞聚集指数均分别显著低于对照组,红细胞变形指数显著高于对照组,差异均有统计学意义(均P0.05)。结论:高压氧联合地塞米松治疗突发性耳聋患者具有更为显著的疗效,且可有效改善患者的血液流变学指标,值得临床推荐。     

后腹腔镜肾脏手术对机体应激的影响

目的:探讨后腹腔镜肾脏手术对机体应激的影响。方法:选取2011年1月~2013年12月本院泌尿外科住院拟行肾脏手术的患者69例,分为后腹腔镜肾脏手术组(39例)与开放性肾脏手术组(30例),分别检测两组患者术前、术后1 h、术后24 h、术后72h术后120 h体内促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质醇(COR)、C反应蛋白(CRP)的含量,进行对比分析。结果:后腹腔镜肾脏手术组、开放性肾脏手术组两组ACTH和COR水平差异均有统计学意义(F_(分组)=107.286,P=0.000;F_(分组)=9.092,P=0.004);各个时间点的ACTH和COR差异也有统计学意义(F_(时间)=221.454,P=0.000;F_(时间)=94.257,P=0.000),术后1 h两组的ACTH和COR均明显增高,术后24 h、术后72 h及术后120 h两组的ACTH和COR均明显降低,后腹腔镜肾脏手术组术后72 h ACTH和COR降至术前水平,开放性肾脏手术组术后120 h ACTH和COR降至术前水平;后腹腔镜肾脏手术组不同时间点ACTH和COR的变化幅度小于开放性肾脏手术组(F_(交互)=36.446,P=0.000;F_(交互)=7.271,P=0.000)。CRP比较,两组差异也有统计学意义(F_(分组)=41.526,P=0.000);各个时间点的CRP差异也有统计学意义(F_(时间)=405.201,P=0.000),术后1 h、术后24 h、术后72 h CRP持续升高,术后120 h CRP明显降低;后腹腔镜肾脏手术组不同时间点COR升高幅度小于开放性肾脏手术组(F_(交互)=14.111,P=0.000)。结论:后腹腔镜肾脏手术对机体应激反应的影响程度小于开放性肾脏手术,能较大程度地维护机体神经系统及内分泌系统的稳定,更有利于机体的恢复。     

饮酒、吸烟与冠状动脉病变程度的相关性研究

目的:探讨饮酒、吸烟与冠状动脉病变程度的相关性。方法:抽取行冠脉造影的男性患者(343例),排除患有高血压病、糖尿病、肝肾功能等异常的患者,根据患者是否吸烟、饮酒将其分为四组,吸烟+饮酒组(86例),吸烟+非饮酒组(135例),饮酒+非吸烟饮酒组(16例),非吸烟+非饮酒组(106例)。通过Gensini积分系统评价和比较各组冠脉病变的情况,分析评估冠心病的风险因素以及饮酒、吸烟与冠心病的关系。结果:吸烟+非饮酒组Gensini评分最高(33.89±31.14)分别与另外三组有统计学意义(P0.05)。饮酒+非吸烟组最低(9.31±10.88),分别与另外三组有统计学意义(P0.05)。单因素分析结果显示年龄、饮酒、TG、HDL-C是发生冠心病的危险因素,logistic回归分析结果显示饮酒是发生冠心病的保护因素,年龄与TG是发生冠心病的危险因素。结论:吸烟为冠状动脉病变高危因素,饮酒是发生冠心病的保护因素。     

FOXP3 在食管癌中表达规律研究

目的:研究FOXP3在食管癌中表达规律。方法:选择2010年1月~2010年10月在我院接受手术治疗的食管鳞癌患者48例,选取所有患者肿瘤组织及正常食管黏膜组织进行免疫组化分析,观察FOXP3在食管癌细胞系Eca-109、正常食管黏膜细胞系Eca-109、人食管癌组织、正常食管黏膜组织的表达,FOXP3在不同年龄、性别、肿瘤分化程度、肿瘤直径、淋巴结转移上的表达。结果:FOXP3在食管癌组织中阳性表达率(85.42%)显著高于正常食管黏膜组织(14.58%),P0.05。FOXP3在正常细胞系表达为阴性,在食管癌细胞系Eca-109中的表达阳性,FOXP3在正常食管黏膜组织中表达阴性,在食管癌组织中表达阳性。在食管癌组织中,FOXP3阳性表达率和食管癌患者的性别、年龄等不同临床病理特征均无关联(P0.05),和T分期、TNM分期、肿瘤直径、淋巴结转移、远处转移等存在关联(P0.05)。结论:食管癌细胞能够表达FOXP3,且其表达水平和食管癌的进展关系密切,可以作为临床诊断及治疗食管癌的重要参考指标。     

稽留流产患者血清和绒毛中HIF-1alpha和VEGF表达水平及其相关性分析

目的：探讨缺氧诱导因子-1alpha（HIF-1alpha）和血管内皮生长因子（VEGF）在稽留流产患者血清和绒毛中的表达水平及其相关性 分析。方法：选择2014 年8 月至2015 年8 月我院妇产科76 例稽留流产患者为观察组及行人工流产的60 例正常早产孕妇为对 照组;根据患者稽留流产时间将稽留流产患者分为稽留时间<2 周组（12 例）,2~4周组（33 例）,>4周组（31 例）;采用酶联免疫吸 附（ELISA）和免疫组化SP 法检测并分析患者血清与绒毛中HIF-1琢与VEGF的表达水平。结果：观察组血清中HIF-1alpha与VEGF 表达水平均显著低于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;观察组和对照组绒毛VEGF 和HIF-1-alpha均表达,其中VEGF 主要表达 于滋养层细胞细胞质和细胞间质,HIF-1琢主要表达于滋养层细胞的细胞核与细胞质,且观察组患者绒毛HIF-1-alpha与VEGF 表达水 平均显著低于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;不同稽留时间患者绒毛HIF--alpha与VEGF表达水平间比较,差异均无统计学意 义（P>0.05）观察组患者血清HIF-1alpha与VEGF的表达水平呈现正相关关系（r=0.601;P<0.05）;且绒毛HIF-1琢与VEGF的表达水平 也呈现正相关关系（r=0.401;P<0.05）。结论：HIF-1琢和VEGF在血清和绒毛中的低表达可能是稽留流产的发生的重要原因,临床 上可以通过检测患者血清和绒毛组织中HIF-1琢和VEGF的水平,有针对性的对患者进行监护和治疗,预防稽留流产的发生。     

第四脑室注射Orexin-A对大鼠饮食摄取条件性位置偏爱的影响

目的:探讨第四脑室注射orexin-A(OXA)对大鼠饮食摄取条件性位置偏爱的影响。方法:将30只大鼠随机分成3组,即对照组,低剂量组和高剂量组,第四脑室分别注射生理盐水(NS)、orexin-A或orexin-A受体拮抗剂SB334867,观察大鼠按压杠杆获取蔗糖的次数和最高频率的变化。再选择30只大鼠,第四脑室注射orexin-A和SB334867,观察大鼠对高脂饮食(HF)食物的摄入量。另选取30只大鼠第四脑室注射orexin-A或SB334867,将大鼠置于条件位置偏爱箱来检测大鼠对HF条件性位置偏爱的变化。结果:与对照组相比,24小时禁食大鼠,第四脑室注射orexin-A,可显著增加大鼠按压杠杆获取蔗糖的次数和最高频率(P0.05)。而SB334867可显著降低大鼠按压杠杆获取蔗糖次数以及最大频率(P0.05)。第四脑室注射orexin-A,可使大鼠HF摄入量显著增加(P0.05),第四脑室注射SB334867,不影响大鼠HF摄入量,但会抑制普通饮食的摄入(P0.05)。第四脑室注射orexin-A能增强对HF饮食位置偏爱性的表达,注射SB334867后会显著抑制大鼠对HF饮食位置偏爱性的表达(P0.05)。结论:第四脑室注射Orexin-A可影响大鼠摄食行为,增加高脂饮食的摄入量,增强对HF饮食位置偏爱性的表达。     

高流量颅外内血管搭桥技术在颅底肿瘤手术中的应用进展

颅底肿瘤尤其是侵及颈内动脉等颅内主供血血管的肿瘤治疗一直是神经外科的难题,由于此类肿瘤与重要血管的关系密切,手术风险极大,导致治愈率底下。而颅外内血管搭桥技术通过重建颅内血运,可以有效提升此类肿瘤的全切率。本文回顾了高流量颅外内血管搭桥技术的历史进展、探讨了颅外内血管搭桥技术辅助切除颅底肿瘤的意义所在,复习文献归纳了该技术应用的适应症、术中注意事项及其疗效与争议,旨在为其临床推广应用提供更多的参考依据。熟练及合理地应用颅外内血管搭桥技术,制定个体化的治疗方案,复杂颅底肿瘤的治愈率将会得到进一步提升。