酵母菌杂交育种V．药用酵母的杂交育种

用显微操作技术对啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)不同品系间进行杂交,从不同杂交组合中选出五株杂种菌株,在甜菜糖蜜培养基中所有杂种的生物量比工业生产藏Y26提高20％以上,其中杂种l{x895可提高生物量达30％o细胞的生物量和残糖测定表明：Hx895在生长速度、糖的利用率皆优于Y26;总蛋白质量和维生素B z含量测定证明Hx895也优于Y20。遗传分析和细胞DNA含量测定证实HX895为四倍体。     

酵母菌属间原生质体融合获得能发酵乳糖生产酒精的融合体

本文报道了用聚乙二醇(PEG)诱导酿酒酵母 （Saccharomyces cerecisiae)和乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)属间原生质体融合。融合体的细胞体积约为两亲株之和;融合体的DNA含量约为亲株的两倍;融合体具有双亲株的遗传标记。融合体不仅能发酵葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、半乳糖、棉子糖和蜜二糖,而且也能发酵乳糖。在以乳糖为碳源的培养基中,融合体的发酵力是亲株乳酸克鲁维酵母的两倍多;在以葡萄糖为碳源的培养基中,融合体与亲株酿酒酵母的发酵力接近。     

优良酿酒酵母(面包酵母)三倍体菌株的选育

通过初筛、单倍体分离、诱变、原生质体融合及杂交等育种技术选育出一株具有高生物量、耐高糖、强絮凝性能的优良酿酒酵母(面包酵母)三倍体菌株ZLFH-121,其生物量分别为原始亲株BL68、BL92、L77的1.22、1.33与1.83倍;絮凝性能明显优于原始亲株BL68、BL92.并对其培养条件进行了优化研究,结果表明三倍体菌株ZLFH-121能够很好地利用糖蜜培养基,并表现出良好的絮凝能力.在优化的培养条件下,生物量提高至93.82g/L(湿重),为初始培养条件下的1.30倍.经遗传稳定性分析,证明三倍体菌株ZLFH-121遗传稳定,是一株具有潜在应用价值的优良酿酒酵母(面包酵母)菌株.     

微生物麦角固醇的研究进展

麦角固醇是真菌细胞膜的重要组成成分,它在确保膜结构的完整性、与膜结合酶的活性、膜的流动性、细胞活力以及物质运输等方面起着重要作用。麦角固醇生物合成途径中的几个关键环节还是抗真菌药物的作用靶位,对其生物合成的研究将为抗真菌药物的筛选及其作用机制的研究提供重要的理论基础川。麦角固醇经UV照射可转化为维生素VDZ,VDZ是一种重要的药品．自从Taret首次从麦角中分离得到麦角固醇以来,随后便开展了对其来源、性质、分离、测定、高产株的选育及其发酵条件等的研究［‘－‘］。近年来一些研究者对麦角固醇生物合成途径进行…     

甾醇酰基转移酶基因高表达对酵母菌麦角甾醇合成的影响

通过PCR扩增克隆到含酵母菌甾醇酰基转移酶基因ARE2编码序列和上游调控序列的DNA片段ARE21及仅含编码序列的DNA片段ARE22。分别以ARE2启动子,乙醇脱氢酶基因ADH1启动子和铜抗性基因CUP1启动子及ADH1终止子为调控元件构建了酵母菌表达质粒pHX2,pHXA2和pHXC2。表达质粒分别转化酿酒酵母单倍体菌株YS58和以前通过细胞杂交构建的麦角甾醇高产菌株YEH56。通过营养缺陷互补和铜抗性筛选到转化子,质粒上的ARE2基因在YS58和YEH56中都实现了活性表达,使细胞内甾醇酯化水平升高,并导致细胞麦角甾醇含量的提高。对转化菌株的培养条件进行了初步研究,在优化条件下,重组转化菌株YEH56(pHX2)、YEH56(pHXA2)和YEH56(pHXC2)的麦角甾醇含量分别是受体菌YEH56 的13、13和14倍。     

高生物量富硒酵母的选育及培养条件初步优化

通过筛选、单倍体分离、诱变和原生质体融合,从融合子中选育了一株高生物量富硒酵母菌株（编号为ZFF-28）,其细胞硒总含量分别是原始亲株ZY-67和ZY-198的2.8倍和2.0倍。通过单因素实验和正交试验设计,确定了优化培养条件：6%糖浓度的蔗糖糖蜜,添加0.5% (NH4)2SO4、0.1% H3PO4、60μg/mL Se,pH60～6.5,装液量50mL/250mL三角瓶,接种量10%,培养时间25h。在优化培养条件下,菌株ZFF_28的生物量可达8.2g/L,细胞中硒的含量达2050μg/g,硒总含量达到了16810μg/L,是培养条件优化前的1.3倍。细胞硒含量的91%为有机硒。     

低乙醇脱氢酶Ⅱ活性的抗老化啤酒酵母工程菌的构建

采用自克隆技术,破坏啤酒酵母工业菌株YSF31的ADH2基因,在ADH2基因位点插入来源于YSF31的编码γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶的GSH1基因和铜抗性筛选标记CUP1基因.通过铜抗性筛选转化子,经PCR和乙醇脱氢酶Ⅱ(ADH Ⅱ)活性测定验证,获得了1株啤酒酵母工程菌.10°P麦芽汁发酵实验显示,自克隆菌株的乙醇脱氢酶Ⅱ活性是受体菌的65%,谷胱甘肽含量比受体菌YSF31的高34%.其他发酵指标并没有发生明显改变.由于DNA操作过程中没有外源基因介入,因此啤酒酵母工程菌为生物安全的自克隆菌株,具有重要的应用价值.     

相同交配型酵母原生质体电融合及融合体的分析

本文报道了用电场诱导相同交配型啤酒酵母单倍体菌株原生质体融合。电场诱导的融合率比聚乙二醇(PEG)诱导的融合率高2—4倍。并对融合体进行了分析,融合体的细胞体积约为亲株细胞体积之和,DNA含量也比亲株高,有的为亲株的两倍,有的为亲株的三倍左右,融合体的生物量也比亲株高,如FD－5的生物量约为亲株的三倍,具有一定的生产应用价值。