絮凝基因(FLOIG)的序列测定及分析

虽然酵母细胞絮凝的确切机制至今尚无定论,但已克隆了多个与絮凝相关的基因,如FLOI、FLO5、FLO11等[1-3].这些基因的表达可以赋予非絮凝酵母细胞以絮凝能力.酵母细胞的絮凝特性在酿造工业、固定化酶、精细化工和物生制药等领域具有广泛的应用价值[4,5].从一株强絮凝酿酒酵母菌株中克隆到一个约4.3kb的NDA片段,酵母转化实验证明该DNA片段能够赋予非絮凝酵母菌株以絮凝能力[6].本文简要报道对该DNA片段进行序列测定和分析的结果.     

高SO2产量啤酒酵母工业菌株的构建

二氧化硫在啤酒中具有抗氧化的重要功能,而在其形成过程中APS激酶(MET14编码)起着非常重要的作用。以二氧化硫产量较高的青岛啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)YSF-5的总DNA为模板,用PCR方法克隆得到MET14基因。为使目的基因在酿酒酵母中表达,以大肠杆菌-酿酒酵母穿梭质粒YEp352为载体,以PGK1强启动子为调控元件,构建了重组表达质粒pPM,并转化酿酒酵母YS58。转化子在YNB添加亮氨酸、组氨酸和色氨酸的选择性培养基上筛选鉴定,盐酸副玫瑰苯胺法测得转化子的SO2产量是受体菌的2倍左右。在重组表达质粒pPM的基础上添加铜抗性标记基因构建了重组表达质粒pCPM,并转化青岛啤酒工业酵母菌株YSF-38,转化子在YEPD 4mmol/L CuSO4的选择性培养基上筛选鉴定,实验室条件下培养后,测得转化子YSF-38(pCPM)的SO2产量是受体菌的3.2倍。用该转化子在青岛啤酒厂进行小型发酵实验,结果表明在发酵结束时,YSF-38(pCPM)转化子的SO2产量是受体菌的1.4倍。因此,MET14基因的有效表达可以提高啤酒工业酵母的SO2产量。     

酵母菌利用糖蜜发酵产麦角甾醇的工艺条件优化

麦角甾醇是由酵母菌产生的具有重要经济价值的代谢产物。为了提高酵母菌利用糖蜜发酵生产麦角甾醇的产量,通过响应面分析法优化了发酵培养基配方,并在5 L发酵罐对发酵过程pH控制和底物流加补料方式进行了优化。结果表明,利用优化后的发酵培养基,即糖蜜总糖40 g/L,KH2PO4 1 g/L,K2HPO4 1.86 g/L,CuSO4·5H2O 17.5 mg/L,FeSO4·7H2O 13.9 mg/L,MgSO4·5H2O 12.3 mg/L,玉米浆10 mL/L,麦角甾醇产量比优化前提高了29.5%;利用恒定pH控制策略,在5 L发酵罐进行分批发酵,使麦角甾醇产量提高了62.1%;进一步采用底物流加补料策略,使麦角甾醇产量达到1 953.85 mg/L,是分批发酵的3.2倍,而且麦角甾醇产率比分批发酵提高了42.7%。为酵母菌发酵糖蜜产麦角甾醇的产业化应用奠定了基础。     

絮凝基因内衔接重复序列与酵母菌絮凝特性多样性及遗传稳定性

存在于酵母菌细胞表面的絮凝蛋白与邻近细胞表面寡聚甘露糖链相互作用,从而使细胞相互聚集形成细胞团的生理过程称为酵母菌絮凝。编码絮凝蛋白的基因中存在大量衔接重复序列,这些重复序列的变化不但使酵母菌呈现出絮凝特性的多样性,而且由重复序列驱动的基因内或基因间重组使酵母菌的絮凝特性具有非常明显的遗传不稳定性。文中综述了基因内重复序列对酵母菌絮凝特性和遗传稳定性的影响,将为基于序列调控策略改进酵母菌絮凝特性及遗传稳定性奠定理论基础,为絮凝特性在发酵工业或环境修复过程中的可控应用提供新的解决策略。     

酵母超氧物歧化酶高产菌的选育

采用常规筛选方法从300多株不同种属的酵母菌中筛选到两株细胞生物量和超氧物歧化酶(SOD)含量都较高的菌株(酿酒酵母,编号为Y-8和Y一111)作为实验出发菌.经单倍体分离、N-甲基-N-亚硝基-N’-硝基胍(MNNG)诱变和群体杂交等手段,从中选育出一株细胞生物量略高于实验出发菌、超氧物歧化酶高达1350U/g湿菌体的SOD高产菌株(编号为ZDF-48),它的SOD产量分别为实验出发菌株Y-8和Y-111的2.2 倍和2.4倍.经分离纯化后蛋白含量及超氧物歧化酶活性测定等研究,证明我们选育出的ZDF-48是一株生产超氧物歧化酶的优良品系.     

酵母菌杂交育种——Ⅲ.酵母菌新麦芽糖互补基因的鉴定

用显微操作技术对不同自然酵母菌株:小椭圆酵母(2.699-2-3)、球形酵母(2.1161.6,2.1153)、薛氏酵母(2.213-4C)以及少孢酵母(2.520)进行种间杂交。通过四分体分析发现一些杂种有两种互补基因系。这两种基因系是基因间互补,其中一组基因系带有互补基因MAL_(m-1)和一个非等位互补基因MAL_(g-1),而另一组基因系带有前一基因系中的MAL_(m-1)基因和MAL_(g-2)基因,后一个基因是MAL_(g-1)的非等位基因。用四分体分析测定麦芽糖互补基因,从酵母菌共分离出3个麦芽糖互补基因。本文首次证明小椭圆酵母中存在着MAL_(m-1)基因,其它两个基因是从球形酵母中分离出的。基因MAL_(m-1)在所有杂交组合中起着关键性的作用。 根据遗传分析,发现这三个基因间无连锁关系,基因MAL_(m-1)和MAL_(g-1)位于靠近其各自的着丝点,它们不同于以往所发现的麦芽糖互补基因,因而定为新麦芽糖互补基因,第三个基因MAL_(g-1)则远离其着丝点。     

不同微生物的α-乙酰乳酸脱羧酶的生理生化特性的研究*

分析测定了不同微生物的α－乙酰乳酸脱羧酶（ＡＬＤＣ）酶活力,结果表明不同来源的ＡＬＤＣ酶活力有较大差异,酶反应速度曲线存在明显差异;酶反应体系的ｐＨ对ＡＬＤＣ酶活力有明显的影响,如乳酸乳球菌的ＡＬＤＣ酶反应最适ｐＨ为６．６,而产气气杆菌的ＡＬＤＣ酶反应的最适ｐＨ为５．８;酶反应体系中加入不同浓度的亮氨酸、缬氨酸和异亮氨酸对不同来源的ＡＬＤＣ酶活性有较明显的影响。     

“分化因子”引起动物白血病细胞的排斥

在Miami医学院(Miami,FL)实施的几个体外和体内实验表明,“分化凶子”(DF)是培养鼠细胞的一种未鉴定的产物,它致使白血病细胞分化成正常细胞。虽然Miami的研究者们还没有证实在老鼠中有“分化因子”的存在,但已知它的粒性白细胞集落刺激因子有相似的效应。然而,他们的研究认为,不足量的DF可能担负着动物异常白血病细胞的继续生长。     

酿酒酵母原生质体的融合

原生质体融合技术开始于动植物细胞,特别是Willin等报道了PEG有助于高等植物细胞原生质体融合以后,这一技术广泛地应用于植物、微生物原生质体的融合和动物细胞的融合。原生质体的制备、培养、融合和发育为研究细胞分化、膜结构与功能、定向育种等生物学     

酵母菌质粒遗传研究进展

酵母菌做为真核微生物的代表已被广泛应用于分子遗传学研究。酵母菌除具备真核生物所共有的生物学特性外,它又是单核单细胞生物。因此凡是细菌分子遗传学研究中所使用的技术。基本上都适用于酵母菌的分子遗传研究。酵母菌质粒的分子遗传学在最近