转基因植物中T-DNA整合的分子特征及表达

植物中不同转基因方法转化外源基因的T-DNA整合特征既具有共性,又具有特性,使得转基因的遗传在各独立转化体间呈现多样性,另外多种遗传因子和限制因素使受体植物中外源基因的表达存在下降,甚至出现基因沉默等复杂现象。本文主要对农杆菌介导及裸露DNA直接转化转基因植物中T-DNA的分子特征和转基因表达的影响因子进行了介绍和概述。转化体中转基因的遗传稳定性和表达主要取决于转基因在植物基因组中的整合位置、拷贝数及组成结构。因而,通过对具有表达水平各异的转化体进行深入的遗传分析和分子生物学研究以及转化体之间进行的比较研究,将对转基因技术自身的完善、定点整合以及更有效的利用转基因技术都具有十分重要的意义。     

2011～2012年度中国B型流感病毒病原学特征分析

为了解本监测年度我国B型流感病毒的流行特点,明确流行株与国际疫苗株和国内代表株的匹配情况,本文对2011年4月至2012年3月流感监测年度中国大陆流感监测网络分离的B型流感毒株进行了抗原性和基因特性研究。结果表明2011年4月至2012年3月我国大陆B型流感病毒主要以Victoria系流感病毒为主,Victoria系病毒主要位于分支1,并且存在着HA1与NA基因分支间的重配,但不同分支间抗原性无显著差异,72.8%的病毒与本年度使用的疫苗株B/Brisbane/60/2008疫苗株抗原性类似。本监测年度疫苗组分中不含有Yamagata系组分,大部分Yamagata系流感病毒中与国内代表株B/湖北伍家岗/158/2009(97.8%)和B/四川安岳/139/2011(85.2%)抗原性类似;基因特性分析显示绝大部分流行的B型Yamagata系流感病毒均与B/湖北伍家岗/158/2009和B/四川安岳/139/2011在同一分支,且没有发现HA1与NA基因分支间重配的病毒。上述监测结果表明本年度所使用的疫苗株与我国流行的病毒匹配,我们所筛选的国内代表株能够代表我国各地流行株的病原学特征。     

奥司他韦对我国A(H3N2)亚型流感病毒红细胞凝集和抑制试验的影响

比较加入神经氨酸酶抑制剂奥司他韦(Oseltamivir)对我国A(H3N2)亚型流感病毒红细胞凝集(Hemagglutination,HA)和凝集抑制(Hemagglutinin inhibition,HI)试验结果的影响,以期获得病毒更真实的HA和抗原性变异分析结果。选择2014年10月-2015年5月在中国大陆分离的395株A(H3N2)亚型流感病毒,在HA及HI试验中加入神经氨酸酶抑制剂Oseltamivir,对实验结果进行比较分析,根据HA试验,挑选其中部分毒株进行基因组测序,比较NA氨基酸位点变异情况。在HA试验中加入神经氨酸酶抑制剂Oseltamivir后,44.8%的毒株HA滴度未改变;43.8%的毒株HA滴度下降,仅有11.4%的毒株HA滴度升高。加入Oseltamivir后,与A/TX/50/2012鸡胚株抗原性类似的毒株的比例高于未加入Oseltamivir时,与A/SZ/9715293/13细胞株抗原性类似的毒株的比例低于未加入Oseltamivir时类似株的比例,统计学分析有显著性差异。以A/TX/50/2012细胞分离株和A/SZ/9715293/133鸡胚分离株作为参考病毒,Oseltamivir对实验结果的影响无显著性差异。挑选19株A(H3N2)亚型流感毒株进行基因组测序,进行NA蛋白氨基酸位点分析,与A/TX/50/2012鸡胚分离株相比加入20nM Oseltamivir后,滴度降低超过4倍的5株毒株,没有共同氨基酸位点变异,但A/山东莱城/119/2015流感毒株有D151G氨基酸位点突变;A/吉林铁西/1194/2015流感毒株有V412I和T434A氨基酸位点变异。加入20nM Oseltamivir后,滴度降低为2~4倍的毒株,具有I26T、G93S、V149I、N234D、T267K、S416G等位点突变。在对我国近年流行的A(H3N2)亚型流感病毒进行血凝滴度和抗原性分析中,加入Oseltamivir可获得更为真实的HA和HI结果,分析病毒的变异情况,评价疫苗的匹配性。     

新甲型H1N1流感病毒小鼠致死模型的建立

建立新甲型H1N1流感病毒小鼠致死模型,为研究致病性、宿主适应性以及疫苗保护性提供动物模型,并寻找病毒在适应宿主过程中影响毒力和适应性的关键位点。将新甲型H1N1流感病毒A/四川/SWL1/2009 H1N1在小鼠中连续传15代,各代次毒株均在MDCK细胞上增殖后进行测序,根据序列分析结果选择6个传代毒株感染小鼠,连续监测14 d体重和死亡情况;并对第14代和15代病毒在噬斑实验纯化后克隆和测序分析。原代病毒不致死BABL/C小鼠,经动物体内连续传代适应宿主动物后,其毒力增强,具体表现为所选的6个传代毒株中第7、11、15代毒株可以100%致死试验小鼠;分析这6个传代毒株的全基因组表明这些毒株的部分氨基酸位点发生突变。新甲型H1N1流感病毒经小鼠体内连续传代后,建立了小鼠致死模型,病毒毒力增强可能与某些氨基酸位点的改变有关。     

白喉菌株主要抗原基因遗传稳定性及相应抗原蛋白结构确证的研究

对白喉棒状杆菌(Corynebacterium diphtheria)主要保护性抗原基因序列的遗传稳定性进行研究,对相应的抗原蛋白结构进行确证,并进一步验证此前一代测序的结果,为疫苗的安全性和有效性提供依据.采用二代测序技术(next generation sequencing,NGS)对白喉棒状杆菌主代代次(P3)、...     

高等医学教育中临床实习工作的几点思考

临床实习是医学院校学生走向临床工作不可逾越的阶段,是高等医学教育的重要组成部分,是医学生成长为合格的临床医生的必经之路。然而,目前临床实习过程中存在着带教教员任务繁重,缺乏教学热情;实习学生面临就业、考研等多重压力以及临床教学模式单一、临床实习考核流于形式等问题。针对这些问题所导致的医学生临床实习质量下降的现象,探讨提高实习质量的方法,以保证高等医学人才培养的质量。     

鹰嘴豆蛋白降解产物的抗氧化作用

旨在分析鹰嘴豆分离蛋白(CPI)及其不同分子量短肽的抗氧化活性。用碱性蛋白酶(Alcalase)处理CPI,得到其降解产物,该降解产物经超滤离心,得到分子量分别为3 k D、3-5 k D、5-10 k D及10 k D的短肽。结果表明,与其它大分子肽段相比,3 k D的短肽具有较强的自由基清除活性;与谷胱甘肽(GSH)相比,CPI及其不同分子量短肽具有显著的金属离子螯合活性;CPI及其肽段具有一定的三价铁离子还原能力。上述结果表明,CPI及其肽段的显著抗氧化活性,使得其具有制备抗氧化功能食品和保健品的应用前景。     

化学药物导致的与Friedreich共济失调相关的GAA重复序列不稳定性的研究

Friedreich共济失调是由位于FRDA基因上的GAA重复序列动态突变扩增所引起的,目前其不稳定性机制还不清楚。为了探索化学药物对GAA重复序列的作用,本实验构建了含有(GAA)42的重组质粒,转入大肠杆菌中,分别经过丝裂霉素C和甲基磺酸乙酯连续多次处理后,检测其长度变化发现,两种化学药物在不同程度上都可以促使(GAA)42发生删除,且删除后长度多数处于体内的正常范围。试验结果表明,化学药物可以促进与Friedreich共济失调相关的GAA重复序列发生删除。本工作为研究Friedreich共济失调的致病机理及治疗方案奠定了一定的基础。     

星虫胶原蛋白的生物学特性研究

本文研究了胶原蛋白的生物学特性.结果显示,胶原蛋白溶液的粘度随浓度的增大而增大,随着温度的升高而下降;酸性条件下,粘度总体呈下降趋势,碱性时粘度变化不大;外加中低浓度的电解质与非电解质对胶原蛋白溶液粘度的影响不显著,溶液的流变学特性相对稳定.星虫胶原蛋白对小鼠皮肤无致敏反应,对创面愈合有明显的促进作用,该胶原蛋白不仅可以应用于食品与化妆品行业,还可以进一步应用于生物医学材料等领域.     

森林资源可持续状况评价方法

为了准确、快速地评估森林经营单位的森林资源可持续状况,提出了森林资源可持续状况的评价指标、评价方法和评价结果分级。森林资源可持续状况评价指标包括森林资源质量状况、森林资源利用状况和森林受干扰状况3个方面共28个评价指标。通过参照技术规定、查阅专业用表和使用经验数值等3种方法确定评价指标的基准值;根据基准值把评价指标测定值分级为"好"、"中"、"差"3个等级,并分别赋值1.0、0.62和0.38。利用专家咨询法或层次分析法,根据森林经营单位的主要经营目标和森林主导功能,确定森林资源质量状况评价指标的权重。根据评价指标的实测值、赋值和权重,计算森林资源质量状况指数、森林资源利用状况指数和森林受干扰状况指数,进而计算森林资源可持续状况指数。根据森林资源可持续状况指数值的大小,将森林经营单位的森林资源可持续状况划分为优、良、中和差四个等级。