口蹄疫病毒持续感染细胞系的快速选择及其特性研究

采用NH4Cl弱碱法处理感染口蹄疫病毒的叙利亚仓鼠肾细胞系(BHK-21), 存活细胞经过单克隆和选择,获得32株阳性克隆细胞株.随机选取一株(BHK-ROp),常规传代并采用RT-PCR,透射电子显微镜,流式细胞仪进行持续感染特性分析,结果表明,BHK-ROp第4,16,36代细胞中病毒持续存在,但不影响细胞的生长特性,表现出病毒持续感染的基本特征.可见,NH4Cl弱碱法用于建立病毒持续感染细胞系是十分有效的.     

黑色素抑制流感病毒诱导宿主细胞凋亡

报道了流感病毒体外诱导狗肾细胞系（ＭＤＣＫ）细胞凋亡的检测结果,对黑色素选择性抑制流感病毒诱导细胞凋亡的可能性进行了探讨,同时与临床上常用的抗病毒药物病毒唑的效果进行比较。结果显示：病毒感染６ｈ后,即可观测到宿主细胞核固缩现象、ＤＮＡ凝胶电泳出现特征性的梯状图谱,感染１２ｈ后,细胞核可见明显的裂解;并且流感病毒株Ａ１／京防８６１诱导细胞凋亡能力强于Ｂ沪防／９３－１;在２０～１２５μｇ／ｍＬ浓度范围内,黑色素可有效抑制６４个血凝单位（ＨＵ）的流感病毒感染诱导的细胞凋亡而无细胞毒性作用,其抑制效率类似病毒唑。初步研究结果表明：黑色素抗流感病毒诱导细胞凋亡机理与其阻断病毒吸附侵入宿主细胞有关     

口蹄疫病毒3D基因的克隆表达及功能分析

利用RT-PCR技术扩增了口蹄疫病毒(FMDV)编码RNA依赖的RNA聚合酶的3D基因,并将其克隆到原核表达质粒载体pET-28a( )中。3D基因经测序确认后在大肠杆菌BL-21中表达,表达产物纯化的目的蛋白进行Western-blotting检测,获得分子量约55KDa的单一3D基因表达产物。利用RNA体外复制体系和荧光定量PCR技术,证明纯化的3D基因表达产物RNA依赖的RNA聚合酶具有较高的酶活性,可以在体外从头合成FMDVRNA,且主要以引物依赖的方式合成病毒基因组。     

口蹄疫病毒感染BHK—21细胞的代谢热谱研究

本文应用高灵敏度的LKB2277生物活性检测仪测定FMDV感染BHK-21细胞的代谢热谱,并与传统方法测定的一步生长曲线进行比较,二者具有显著的相似性。结果表明,微量热法通过对细胞及其受病毒感染的细胞体系代谢热的测定,能有效地监测病毒在宿主细胞内增殖的过程。该方法还提供了一种动态连续分析病毒感染增殖的新手段。     

口蹄疫病毒诱导宿主细胞凋亡的研究

本文报道了口蹄疫病毒（Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV）在体外诱导PK－15细胞凋亡的研究结果,采用Hoechst33258荧光探针、DNA凝胶电泳、脱氧核糖核酸转移酶介导的制品末端标记（TUNEL）技术均检测到了典型的细胞凋亡,结果显示：使用感染性滴度为4.8lgTCID50/mL的口蹄疫病毒感染PK－15细胞,在培养32h后,荧光探针检测呈现典型的凋亡细胞核固缩和梅花状碎裂核,并伴随有凋亡小体出现,调亡率约为20％;DNA凝胶电泳显示ladder梯带;末端标记检测到强绿色荧光标记物结合于凋亡细胞核上。研究结果提示：口蹄疫病毒可以在体外诱导宿主细胞凋亡,细胞凋亡是其致细胞病变死亡的重要途径之一。     

口蹄疫病毒诱导宿主细胞凋亡的研究

本文报道了口蹄疫病毒（Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV）在体外诱导PK-15细胞凋亡的研究结果。采用Hoechst33258荧光探针、DNA凝胶电泳、脱氧核糖核酸转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）技术均检测到了典型的细胞凋亡。结果显示使用感染性滴度为4.8lgTCID50/mL的口蹄疫病毒感染PK-15细胞,在培养32?h后荧光探针检测呈现典型的凋亡细胞核固缩和梅花状碎裂核,并伴随有凋亡小体出现,凋亡率约为20%;DNA凝胶电泳显示ladder梯带;末端标记检测到强绿色荧光标记物结合于凋亡细胞核上。研究结果提示口蹄疫病毒可以在体外诱导宿主细胞凋亡,细胞凋亡是其致细胞病变死亡的重要途径之一。     

SARS病毒的形态结构及其在体外培养细胞中的感染装配

Morphological characterization of purified SARS-associated virus(SARS-CoV) from Hubei patient was carried out by negative stain and ultrathin section electronmicroscopy. The spike of isolated SARS-CoV virus is shorter and smaller than Human coronavirus. A large quantity of SARS-CoV particles could be observed in the infected Vero cells. The process of infection, assembly and morphogenesis was observed.     

流感病毒感染诱导MDCK细胞凋亡的研究

用荧光染色、DNA凝胶电泳等方法检测了A型流感病毒株A1／京防86－1和B型流感病毒株B/沪防93－1诱导狗肾体代细胞(MDCKcells)的凋亡情况,并采用MTT法和流式细胞仪比较了这2株病毒对MMCK细胞的毒力和凋亡诱导能力水平。结果显示：病毒感染6h后,细胞DNA发生断裂,病毒感染12h后,可见明显的染色质凝聚;在一定范围内,细胞凋亡强度表现出明显的时间和剂量依赖关系;并且,A型流感病毒株的毒力和调亡诱导能力均强于B型流感病毒株。实验结果表明：流感病毒感染引起的细胞死亡主要是通过调亡实现的,毒力不同的流感病毒株诱导细胞调亡的能力不同。     

重视每个建设环节铸造微生物学国家精品课程

国家精品课程建设是提高高校教育质量的重要举措,是涉及教师、学生、教材、教学技术手段、教育思想和教学过程管理的系统工程。介绍了我们在微生物学国家级精品课程建设过程中在师资队伍建设,教学内容和课程体系改革,注重使用先进的教学方法和手段,重视教材建设,理论教学与实践教学并重等各个课程建设环节的做法与体会。     

猪瘟病毒野毒株持续感染细胞模型的稳定性研究

以本实验室建立的CSFV39-PK15持续感染细胞模型为实验材料,综合运用免疫荧光、RT-PCR、流式细胞仪,对其稳定性进行研究.实验结果均表明,该细胞模型有着良好的稳定性.即使在连续传至128代的CSFV39-PK15传代细胞中,CSFV仍持续存在呈免疫荧光抗体反应阳性和RT-PCR检测阳性.同时,该细胞与正常的PK-15细胞相比,细胞周期无显著差异.通过同段序列的同源性比较,发现CSFV39与CSFV石门株的同源性最高,达99.02%.