rhSCF在大肠埃希菌中的高效表达及纯化

干细胞因子（SCF）是一种重要的造血生长因子,它在自体造血干细胞动员、肿瘤放疗化疗的辅助治疗以及其它血液病的治疗上具有良好的应用前景。为了制备高纯度、活性的重组人SCF,将人工合成的SCF的cDNA序列,克隆入原核表达载体pET43．1a中,转化大肠埃希菌BL21（DE3）,获得了高效表达菌株。SCF通过诱导表达形成包涵体,包涵体经洗涤、变性和初步纯化后,进行直接稀释复性,复性液经离子交换层析、分子筛层析等分离除去共价二聚体和异构体,获得纯度大于95％的重组人SCF样品,生物学比活性在7．0×10^5U／mg以上。结果表明：建立了有效的rhSCF制备工艺,且产物具有较高的纯度和生物学活性。     

VEGF重组质粒pcDNA/V的构建及其在大鼠急性心肌缺血模型中的表达

构建人血管内皮细胞生长因子(VEGF165)真核表达载体,并研究其在细胞水平和大鼠急性心肌梗死动物模型中的表达。利用RT-PCR方法,从人扁桃体组织中扩增人VEGF165基因,构建真核表达载体pcDNA/V。应用脂质体介导的基因转移技术,将pcDNA/V转染至人胚肾细胞(293细胞)中,经G418筛选获得稳定表达的重组质粒细胞克隆。ELISA、Westernblot检测证实重组质粒pcDNA/V能在293细胞中高效表达外源VEGF基因,鸡胚绒毛尿囊膜血管生成实验证实表达产物具有促血管生成的活性。进一步的体内表达研究,建立大鼠急性心肌梗死模型,将重组质粒pcDNA/V、空质粒pcDNA3.1( )分三点注射于梗死交界处心肌内,四周后取材。经免疫组化染色检测,pcDNA/V组在梗死交界区有VEGF阳性表达;电镜观察显示,pcDNA/V组在梗死交界处心肌细胞间有大量毛细血管内皮细胞增生。实验结果表明成功克隆了人VEGF165基因,构建了其真核表达载体。体内、外表达研究证实重组质粒的表达产物具有促血管生成的生物学活性,为VEGF基因治疗缺血性心肌病的研究提供实验基础。     

YB-1与EGFR在子宫内膜异位症中表达的研究进展

YB-1,EGFR各自作为冷激蛋白和糖蛋白家族的成员表达于各种生理和环境的损伤之后,保护细胞的生存。近年来发现YB-1和EGFR在多种癌症及内异症中高表达,并且参与肿瘤和子宫内膜异位组织的发生,发展,分化及转移的各个方面。因而YB-1和EGFR的高表达能影响子宫内膜异位症的发生和发展;也说明YB-1和EGFR可以作为子宫内膜异位症患者一个潜在的诊断和治疗靶点。     

过表达bFGF促进大鼠急性缺血心肌的毛细血管生成

研究过表达人碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor, bFGF）在大鼠急性心肌缺血模型中的表达及其对心肌血管 再生的影响. 将含人bFGF质粒pcDNA/b转染人脐带静脉内皮细胞（HUVEC） ,进行MTT检测. pcDNA/b转染人肾细胞293细胞系,进行G418稳定筛选, Western 印迹检测.建立大鼠急性心肌梗死模型,分别将生理盐水、空质粒 pcDNA3.1(+)和pcDNA/b分3点注射于梗死交界处心肌内4周后取材,做常规 HE 染色和Masson 染色,测量各组微血管数量和梗死面积. 经免疫组织化 学染色鉴定和电镜观察,过表达外源bFGF可以促进HUVEC（细胞）生长; pcDNA/b能在293细胞中高效表达外源bFGF基因. pcDNA/b注射组梗死交界处 可见大量新生血管,毛细血管总数明显大于对照组,梗死面积明显小于对 照组. pcDNA/b组在梗死交界区有bFGF阳性表达.电镜观察显示,在梗死交界 处心肌细胞间有毛细血管增生,分化成2个血管腔.本实验证明,过表达bFGF 具有促进大鼠急性缺血心肌的毛细血管生成的作用,为bFGF基因治疗缺血 性心肌病的研究提供实验基础.     

77例不明原因肝功能异常患者的临床与病理特点

目的探讨不明原因肝功能异常患者的临床与病理特点。方法75例不明原因肝功能异常患者行1秒钟肝穿刺,2例外科手术肝活检,标本均送免疫组化双标记及HE染色、Masson染色、网状纤维染色、罗丹宁铜染色、普鲁士蓝染色,进一步分析其临床及病理特点。结果77例病因不明肝功能异常患者除6例无诊断学异常及3例非特异性炎症外,其余68例（88．31％）经肝组织病理检查分别诊断为急慢性肝炎12例、自身免疫性肝病27例、代谢性肝病4例、脂肪性肝病11例、药物性肝损伤10例、先天性肝纤维化及肝小静脉闭塞病各1例。结论肝组织病理检查在不明原因肝功能异常患者诊断价值较高,但由于病理检查存在一定的局限性,如果重视临床资料收集,通过临床及病理特点相结合的方法可进一步提高临床确诊率。     

速度向量成像技术评价心肌梗死患者节段心肌收缩功能

目的:应用速度向量成像技术(VVI)比较静息状态下相同节段的正常心肌、梗死心肌及非梗死心肌纵向和径向的运动特点,评价VVI技术对冠心病心肌梗死患者节段心肌收缩功能的临床应用价值.方法:选取健康志愿者30例和心肌梗死患者30例,分为正常组与心肌梗死组.选取心尖四腔、心尖二腔、心尖左室长轴;二尖瓣水平、乳头肌水平及近心尖部水平左室短轴切面,定量分析左室前间隔、前壁、侧壁、下壁、后壁及后间隔的径向运动,以及纵向的基底段、中间段及心尖段三个分段中梗死节段、非梗死节段及正常节段的心肌速度(Vs),应变(S),应变率(SR).结果:正常人左心室各室壁基底段、中间段和心尖段速度依次递减;应变、应变率差异无统计学意义.左心室各室壁二尖瓣水平切面、乳头肌水平切面、近心尖部水平切面径向速度、应变、应变率差异无统计学意义.心肌梗死组梗死节段VVI测值均降低,与正常组比较差异具有显著性意义.结论:VVI技术可以作为无创的心肌梗死诊断指标,有助于确定或排除冠心病心肌梗死诊断.     

大连市旅顺口区2003年至2006年孕妇尿碘水平调查分析

碘缺乏病是自然环境碘缺乏造成机体碘营养不良所表现的一组有关联疾病的总称。我国目前采用全民食盐加碘的措施进行防治,在国家下调食盐加碘标准后,孕妇这一敏感人群碘营养状况是首先应该掌握的。为了评价与探讨旅顺口区碘缺乏病的防治效果,从中了解掌握该区重点人群孕妇碘营养状况,为今后防治工作提供科学依据,本文选择补碘的孕妇进行碘营养状况监测。现将2003年至2006年开展对孕妇尿碘水平追踪调查结果报告如下。     

栽培小麦Brock中与新抗白粉病基因紧密连锁的AFLP分子标记筛选与分析

本研究用225对引物对农艺性状优良但对白粉菌敏感的栽培小麦京411、抗白粉病栽培小麦Brock以及京411与Brock配制的近等基因系进行AFLP分子标记筛选,结果发现只有2对引物组合Pst GAC/Mse TCT(P1)和Pst AGC/Mse ACC(P2)在上述抗感材料中表现出多态性,分别扩增到2个特异片段,将特异片段克隆并测序发现,P1扩增的特异片段长268bp,P2扩增的特异片段长227bp,命名为AFLP标记P1268和P227.用106个京411×Brock的F2单株进行连锁性分析表明,P1268和P2227与抗白粉病基因的遗传距离分别为3.6和1.9cM,与Brock中的抗白粉病基因呈紧密连锁.该两个AFLP标记对小麦抗白粉病基因的积累和分子标记辅助选择育种有重要意义.     

PEG介导下香菇的转化

表达载体p301-bG1含有香菇（Lentinus edodes (Berk.)Sing)三磷酸甘油醛脱氢酶启动子驱动下的gus基因和除草剂抗性基因。利用PEG法实现了p301－bG1对香菇原生质体的转化。香菇原生质体与经PEG纯化的质粒DNA混合,用PEG处理后培养于含40ug/mL除草剂的CYM再生平板上,得到了抗除草剂和有GUS活性的转化菌株。虽然这种方法转化效率较低,但不需要昂贵的仪器和限制性内切酶,为蘑菇的分子育种研究提供了一种简便经济的转化方法。     

美国白蛾核型多角体病毒增殖和保存的影响因素

【目的】明确美国白蛾核型多角体病毒（Hyphantria cunea nudeopolyhedroviurs,HcNPV）的最佳增殖方法和最适保存条件,为HcNPV标准化生产提供理论依据和技术支撑。【方法】利用活体增殖法,探究不同饲毒虫龄-病毒浓度组合、持续饲毒时间、幼虫饲毒温度和密度对HcNPV增殖量的影响,筛选最佳的HcNPV活体增殖方法;并利用生物活性测定法,研究不同病毒保存处理方式、保存时间、保存温度和保存剂对HcNPV活性的影响,明确最佳的保存条件。采用喂食法处理美国白蛾幼虫,利用血球计数板统计HcNPV增殖数量,以半数致死时间（LT50）为指标评价病毒的杀虫活性。【结果】当饲毒浓度为1×106 OB·mL﹣1、虫龄为5龄时病毒的增殖量为1.16×1010 OB/头,显著高于其他供试浓度和龄期;以3龄幼虫作为供试虫龄,饲毒浓度为1×106 OB·mL﹣1时,研究发现最佳饲毒温度为20℃,病毒增殖量达5.06×109 OB/头;随着持续饲毒时间的延长,病毒增殖量显著降低,从3.42×109 OB/头降低至0.97×109 OB/头;幼虫饲毒密度为100头/箱（0.05头/cm2...