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211.
2DE中IPG胶条转移到SDS-PAGE中的技术改进 总被引:3,自引:0,他引:3
2-维凝胶电泳(Two—dimensional gel electrophoresis,2DE)因其高通量、高分辨率等特点,被广泛用于蛋白质组的分离.然而,在蛋白质从第一向一固相(Immobilized pH gradients,IPG)胶条转移到第二向一十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶(Sodium dodecyl sulfate,SDS;Polyacrylamide gel electrophoresis.PAGE)时,常会引起蛋白质的损失.尤其是当将IPG胶条放入浓缩胶上时,在胶面不平、技术不熟练等情况下,常会在IPG胶条下引入气泡,导致蛋白质更多的损失.现将IPG胶条转移过程进行改进:先在第二向的十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶上加上薄薄的一层(约1~2mm厚)琼脂糖溶液,然后将IPG胶条转移上去,最后再封住胶条的上面.这样的转移不会引起气泡,可以大大提高实验的成功率及重复性,有利于蛋白质的转移(尤其是相对分子质量大于40kDa的蛋白质).提高质谱鉴定的准确性.此法操作简便,可以减少因操作不熟练而带来的麻烦. 相似文献
212.
2-DE技术中疏水性和碱性蛋白质的研究进展 总被引:4,自引:0,他引:4
双向凝胶电泳(2-DE)具有高分辨率、高通量等特点,已被广泛地用于蛋白质组的分离.但是它在分离疏水性蛋白质和碱性蛋白质时却遇到了极大的挑战.然而,疏水性与碱性蛋白质在全蛋白质中占相当大的比例,且具有很重要的生物学意义.因而,近年来,越来越多的研究者将目标瞄准这些蛋白质,并且取得了一些令人鼓舞的进展:用亚细胞预分离技术,顺序提取法等方法来富集疏水性蛋白质,用一些新的有效的增溶剂如硫脲,ASB一14等来改善疏水性蛋白质的溶解,应用这些技术2一DE可分辨出总平均疏水值达O.80的蛋白质;在碱性蛋白质分离方面,通过等电聚焦预处理,使用窄pH梯度胶条等大大地改善了碱性蛋白质在2-DE中的分离,能分辨出等电点达11.7的蛋白质.现对2-DE技术中疏水性和碱性蛋白质分离的研究进展进行综述. 相似文献
213.
细胞质膜是细胞中重要的细胞器, 在肝功能的发挥中具有非常重要的作用. 使用蔗糖密度梯度离心纯化细胞质膜, 通过电子显微镜观察和免疫印迹法检验膜的纯度. 结果显示, 与组织匀浆成分相比, 质膜富集了20倍, 线粒体的污染减少了约50%. 提取的蛋白质用二/一维凝胶电泳(2DE/1DE)分离、胰酶酶解、电喷雾四极杆飞行时间质谱(ESI-Q-TOF)和基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-TOF)鉴定, 或者提取的蛋白质直接进行溶液内酶解、液相色谱串联电喷雾离子阱质谱(LC-LTQ)(鸟枪法)鉴定. 一共鉴定了547个非冗余蛋白质, 其中34%为质膜或质膜相关蛋白质. 优化和评估了质膜蛋白质组研究的方法, 且对鼠肝质膜蛋白质组进行了系统的分析. 相似文献
214.
此稿编辑期间,惊悉邹承鲁先生逝世,一时悲痛无言。邹先生一生为科学事业备斗,成就斐然。为指导科学传播、提高全民科学素养,先生欣然应邀担任《生命世界》杂志的第一届顾问成员。今先生已然西去,我们会秉承先生遗志,在科学传播这争道路上继续前进。谨以此文悼念先生。 相似文献
215.
化学合成ω-芋螺毒素MⅦA的复性与质谱分析 总被引:4,自引:0,他引:4
为了探讨质谱分析在合成多肽氧化复性和分离纯化研究中的应用,用固相多肽合成方法合成ω-芋螺毒素MⅦA,在含谷胱甘肽的缓冲体系中进行氧化复性后,经离子交换和RP-HPLC分离纯化。利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和电喷雾串联质谱(ESI-MS/MS)分析ω-芋螺毒素MⅦA氧化复性和分离纯化的效果,最后用电生理学实验测定复性ω-芋螺毒素MⅦA的生理活性。其结果表明,获得的ω-芋螺毒纱MⅦA纯化复性样品具有与天然ω-芋螺毒素MⅦ完全相同的空间构象和生理活性。 相似文献
216.
海南捕鸟蛛毒素 IV(HNTX IV)是从中国捕鸟蛛Seleconosmiahainana粗毒中分离得到的一种肽类神经毒素 ,在成年大鼠背根神经节 (DRG)细胞上观察了该毒素对电压门控钠通道的影响。在全细胞膜片钳条件下 ,HNTX IV能明显抑制哺乳动物神经性河豚毒敏感型 (TTX S)钠电流 ,但不影响河豚毒不敏感型 (TTX R)钠电流。HNTX IV对DRG细胞TTX S钠电流的抑制作用具有浓度依从性 ,其有效半抑制浓度 (IC50 )为 44 .6nmol/L。该毒素不影响DRG钠电流的激活与失活时间特征 ,但能导致钠通道的半数稳态失活电压向超极化方向漂移约 10 .1mV。结果表明HNTX IV是一种新型的蜘蛛毒素 ,其影响电压门控钠通道的机制可能有别于那些结合于通道位点 3来延缓钠电流失活时间特征的蜘蛛毒素如δ 澳洲漏斗网蛛毒素、μ 美洲漏斗网蛛毒素I VI等。 相似文献
217.
从假定在光合作用的一系列反应中总速度由一步光反应和一步暗反应所限制出发,导出了每閃产量与閃光时間关系的方程。这一关系式,基本上和文献中所記載的实驗結果符合。在一定条件下,可以将此关系式簡化,从而求得光反应和暗反应的一級反应速度常数以及所謂光合单位的相对浓度。 相似文献
218.
219.
碘乙酸修饰兔肌甘油醛-3-磷酸脱氨酶蛋白过程中,以NAD~ 类似物代替NAD~ 测定它们对酶蛋白失活速度的影响。在被测的五个NAD~ 类似物中CPAD~ ,FPAD~ 对酶有保护作用,降低了酶因修饰而失活的速度。其它三个类似物NGD~ ,APAD~ 和TPAD~ 在不同程度上加速碘乙酸引起的失活。这些类似物在对碘乙酸修饰速度造成影响方面表现的能力与它们作为氢受体能力相一致。以NAD~ 类似物代替NAD~ 测定它们对酶促乙酰磷酸水解作用的影响。与碘乙酸修饰时有些不同,CPAD~ ,TPAD~ 对这一水解过程无促进作用,而FPAD~ ,NGD~ 和APAD~ 有促进作用。各类似物的行为与羧甲基酶光照形成新萤光团过程中各类似物的行为相一致。 相似文献