用顺磁共振及自旋标记研究活性氧对铜锌超氧化物歧化酶结构的影响

用抗坏血酸－Ｆｅ（Ⅲ）或过氧化氢为活性氧体系分别作用于牛红细胞铜锌超氧化物歧化酶（ＣｕＺｎ－ＳＯＤ）,发现酶活性降低的同时,其活性中心中Ｃｕ（Ⅱ）被还原成Ｃｕ（Ⅰ）。进一步用抗坏血酸－Ｆｅ（Ⅲ）或过氧化氢作用于马来酰亚胺标记ＣｕＺｎ－ＳＯＤ,用ＥＳＲ测定的结果表明酶分子亚基的缔合受到影响。结果提示酶的失活与活性中心中Ｃｕ（Ⅱ）的还原及酶构象的变化有关。     

毛竹扩张对杉木林土壤微生物残体碳积累的影响

亚热带毛竹扩张对杉木林土壤微生物残体碳积累的影响及机制尚不清楚。以毛竹向杉木林扩张带(包括杉木林、杉木-毛竹混交林和毛竹林)的凋落物(O层)和不同发生层土壤(A层、B层和BC层)为研究对象,通过分析凋落物和土壤样品中的氨基糖含量来表征微生物残体碳累积效应,并进一步评价微生物在土壤有机碳(SOC)形成过程中的作用。结果表明：毛竹扩张使杉木林凋落物数量和碳含量显著降低,但是凋落物中真菌残体碳(MRC-f)、细菌残体碳(MRC-b)和微生物残体碳(MRC)含量均显著增加;毛竹扩张显著提高了杉木林SOC、MRC-f、MRC-b和MRC含量,而且在毛竹扩张初期(杉木林演替为杉木-毛竹混交林)MRC-f、MRC-b和MRC在SOC中的比例也显著增加,说明毛竹扩张增强杉木林土壤MRC累积效应的同时,也提高了微生物对有机碳的贡献。而毛竹扩张后期MRC-f、MRC-b和MRC占SOC比例并没有显著变化,意味着毛竹扩张后期MRC和植物源残体碳对SOC含量的提升均有贡献,且两者贡献的相对比例保持不变。土壤MRC含量随着剖面深度的加深逐渐下降,而MRC占SOC比值却随着土壤深度的增加而逐渐升高,说明深层土壤中...     

抗坏血酸－Fe~（3＋）对牛红细胞铜锌超氧化物歧化酶氧化修饰作用

用抗坏血酸－Ｆｅ３＋作用于牛红细胞铜锌超氧化物歧化酶,发现酶分子中有羰基和二酪氨酸生成,天冬氨酸、谷氨酸和甘氨酸含量相对增加,而丝氨酸、赖氨酸、组氨酸、精氨酸和脯氨酸的含量相对减少,酶的部分亚基被降解成肽段,且肽链断裂与肽键水解无关,等电点下降。进一步研究发现金属辅基铜和锌丢失,酶的紫外吸收表现为增色效应,内源性荧光减弱,酶分子中β折叠含量有相对减少和无规则卷曲有相对增加趋势。以上结果提示抗坏血酸－Ｆｅ３＋使酶分子中部分氨基酸残基发生转化,肽链完整性破坏,酶的空间构象改变,最终导致酶催化功能下降．     

心肌细胞特异性miR-30b转基因小鼠的建立及其功能研究

MicroRNAs(miRNAs)基因芯片结果显示,携带有MYH7基因突变的家族性肥厚性心肌病病人的心脏组织以及小鼠心力衰竭模型中miR-30b表达下调,提示miR-30b可能在心脏疾病发生发展过程中发挥了重要功能.为研究miR-30b在心脏组织中的功能,本实验室首先建立了在心肌细胞特异性启动子琢肌球蛋白重链(琢-MHC,5.5 kb)控制下过表达miR-30b的转基因小鼠.通过qRT-PCR方法,证实miR-30b表达水平在转基因小鼠心脏组织中明显升高(P0.05).miR-30b转基因小鼠心重/体重比和左心室/体重比无明显变化,心肌组织结构未见异常.目前,关于miR-30b在心肌梗死中的功能及相关机制未见报道.本文通过冠状动脉左前降支结扎法建立心肌缺血再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)模型,以假手术组作为对照组.生化检测结果及TTC-Evans blue双染结果显示,I/R损伤后,与野生型小鼠相比,转基因小鼠LDH、CK-MB和cTn玉浓度显著减小(P0.05),并且心肌梗死面积明显减少(P0.05).超声心动图检测结果显示,转基因小鼠心功能显著改善.由此得出结论:miR-30b对缺血再灌注损伤的心肌具有保护作用,该研究成果可能为预防和治疗心肌梗死提供新策略.     

荷花花粉的类黄酮组成

利用超高效液相色谱质谱联用(I-Class UPLC/Xevo TQ MS)技术, 对50个品种荷花干燥花粉中的类黄酮代谢产物进行了分离及结构鉴定。结果表明, 在荷花(Nelumbo nucifera)花粉中检测到了13种黄酮醇和2种黄酮, 这15种类黄酮化合物均为首次从荷花花粉中检出, 其中槲皮素3-O-葡萄糖醛酸苷(quercetin 3-O-glucuronide)、槲皮素3-O-新橙皮糖苷(quercetin 3-O-rhamnopyranosyl-(1→2)-glucopyranoside)以及槲皮素3-O-阿拉伯糖-(1→2)-半乳糖苷(quercetin 3-O-arabinopy- ranosyl-(1→2)- galactopyranoside)含量较高, 且在所有品种中均有检出。不同品种花粉中检测到的类黄酮总含量(TF)差异较大, 绯云千叶类黄酮总含量最高, 为281.08 mg∙100 g^-1; 仙女散花最低, 仅为82.64 mg∙100 g^-1。通过聚类分析, 将50个品种聚为4组, B组类黄酮化合物种类最多, 而且该组总类黄酮含量最高, 其中绯云千叶、伯里小姐和蜀红莲的干燥花粉中总类黄酮含量均超过200 mg∙100 g^-1, 可推荐为采集荷花花粉用的优良品种。     

miRNA-125a在脑卒中的作用及其机制研究

摘要 目的：探究miR-125a在脑卒中的作用及其分子机制,为miR-125a在脑缺血治疗中的应用提供理论基础。方法：收集正常和脑卒中患者的血浆,Realtime PCR检测miR-125a的表达水平,ROC曲线分析敏感性和特异性。Person相关性分析miR-125a表达水平与患者NIHSS评分和脑梗死体积的相关性。Realtime PCR检测MCAO模型大鼠脑皮质和血浆中miR-125a表达水平,并进行相关性分析。9.4T磁共振测量MCAO模型大鼠脑梗死体积。Realtime PCR和Western Blot法检测AQP4 mRNA和蛋白的表达水平。结果：研究一共收集到70例正常和50例缺血性脑卒中患者的血浆样本,两组在性别（χ² = 1.469,P = 0.225）和年龄（Z = -0.208,P = 0.835）上无差异。缺血性脑卒中患者血浆中miR-125a表达水平高于正常组（Z = -7.01,P = 0.000）。预后良好患者血浆中miR-125a表达水平低于预后不良患者（Z = -2.183,P = 0.029）。血浆中miR-125a表达水平在区分正常者和缺血性脑卒中患者的敏感性和特异性较好（ROC = 0.876,P = 0.000）。血浆中miR-125a表达水平与患者NIHSS评分正相关（r = 0.303,P = 0.032）,和脑梗死体积正相关性（r = 0.399,P = 0.004）。MCAO大鼠脑皮质中miR-125a表达水平升高（t = 8.918,P = 0.000）,血浆中miR-125a表达水平升高（t = 4.928,P = 0.000）,脑皮质与血浆中miR-125a表达水平呈正相关（r = 0.823,P = 0.044）。第3天时,sh-miR-125a组脑梗死体积小于NC组。sh-miR-125a组AQP4 mRNA和蛋白表达水平小于NC组。结论：血浆中miR-125a表达水平在区分正常和脑卒中患者具有较好的敏感性和特异性,抑制miR-125a表达会通过降低AQP4的表达,减少脑梗死体积,为miR-125a在诊断和治疗脑缺血中的应用提供了理论基础。     

乳腺癌新辅助化疗疗效评价体系

目前新辅助化疗已广泛应用于乳腺癌的治疗,可降低肿瘤分期,提高手术切除率和增加保乳手术的机会。恰当的新辅助化疗疗效评价不仅可以指导患者治疗方案和预测预后,还可对不同药物的疗效提供可靠的评估。目前新辅助化疗评估主要采用临床检查如触诊、超声、钼靶X线、计算机断层显像、磁共振成像及病理学检查确定肿瘤体积变化,可分为临床评估和病理学评估。两者均有多种体系标准,未形成统一公认的标准。临床试验中采用较多的标准有WHO和RECIST等临床评价标准以及MP标准和JBCS标准等病理学评价标准。本文就乳腺癌新辅助化疗疗效评估体系进行总结。     

活性氧所致超氧化物歧化酶肽链断裂的观察

探究活性氧所致铜锌超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）肽链断裂的情况。将过氧化氢或抗坏血酸－Ｆｅ（Ⅲ）分别作用于马来酰亚胺标记的ＳＯＤ,然后用高效液相反相色谱（ＲＰＨＰＬＣ）分析,经１ｍｍｏｌ／ＬＨ２Ｏ２处理后ＳＯＤ用ＲＰ－ＨＰＬＣ分离出二个肽段,用顺磁共振检测显示只有一个肽段具有马来酰亚胺信号,经５ｍｍｏｌ／ＬＨ２Ｏ２处理后ＳＯＤ有四个肽段生成,其中有一个肽段具有马来酰亚胺信号,用５ｍｍｏｌ／Ｌ抗坏血酸和０．０１ｍｍｏｌ／ＬＦｅＣｌ３处理后ＳＯＤ有三个肽段生成,用５０ｍｍｏｌ／Ｌ抗坏血酸及１．０ｍｍｏｌ／ＬＦｅＣｌ３处理后ＳＯＤ也产生相同的三个肽段,只是肽段的量多．结果提示Ｈ２Ｏ２所致ＳＯＤ肽链断裂无“定点”现象,而抗坏血酸－Ｆｅ（Ⅲ）所致ＳＯＤ肽链断裂呈“定点”断裂。