蛋白激酶的生化活性检测方法研究进展

蛋白激酶在真核细胞信号转导中起重要作用,影响了生长、发育、迁移以及凋亡等各个细胞过程。其表达水平或活性异常时,就有可能导致癌症、心血管疾病以及其他各种疾病,因此蛋白激酶是治疗这些疾病很好的分子靶点。迄今为止,美国食品药品监督管理局已经批准了28个蛋白激酶的抑制剂作为上市药物,用于相应的临床治疗。目前存在着各种检测激酶活性的方法,激酶生化检测方法尤为众多,比较经典的有放射性同位素的方法,也有一些非均相非放射性同位素的方法,诸如酶联免疫法、反相高效液相色谱法、核磁共振分析法等等。而各种均相非放射性同位素的检测方法,由于其污染小、操作便捷,逐渐成为激酶抑制剂筛选的首选。本文综述了各种激酶生化检测方法及其发展历史,并介绍了一些新的趋势,如激酶酶谱筛选。     

重组姊妹系中14+15和5+10亚基聚合对小麦品质的影响

采用常规杂交和生化鉴定方法将小麦品系 94 34的高分子量麦谷蛋白亚基 14 +15与 92 5 7的 5 +10优质亚基聚合 ,获得 8个重组姊妹系 .高分子量麦谷蛋白组成为 1、14 +15、2 +12与亚基组成为 1、14 +15、5 +10的姊妹系相比较 :硬度、Zeleny沉降值、干面筋和湿面筋没有差别 P>0 .1 ,出粉率略有差别但不显著 P>0 .0 5 ,蛋白质含量低 3.5 %～ 11.6 % P<0 .0 1 ;粉质仪各参数指标有显著差异或极显著差异 ,吸水率低 1.2 %～ 3.2 % P<0 .0 5 ,形成时间平均差 1m in P<0 .0 5 ,稳定时间相差 0 .5～ 1.5 min P<0 .0 1 ;弱化度高 5 0～ 5 FU P<0 .0 5 ,评价值平均低 7.6左右 P<0 .0 5 ,FQN值低 3～ 15 P<0 .0 5 .高分子量麦谷蛋白组成为 1、7+8、5 +10与亚基组成为1、14 +15、5 +10的姊妹系的单样本平均数测验表明 :后者在湿面筋、出粉率和形成时间显著高于前者 ,其他指标无显著差异     

与杨树木材密度、纤维性状相关的SSR分子标记

通过对美洲黑杨 (Populusdeltoides)×青杨 (P .cathayana)的 68个F2 、双亲及其 4个F1无性系田间随机区组设计 ,5次重复 ,分析了与木材材性有关的木材密度、纤维长、纤维宽以及微纤丝角等性状。结果表明 :纤维长有明显的杂种优势 ,控制该性状表现的基因之间具有正效应的互作 ;控制木材基本密度的基因之间具有负效应的互作。结合SSR分子标记结果 ,采用单因素方差分析法进行标记与性状的相关分析 ,共找到与木材密度、纤维长、纤维宽以及微纤丝角相关联的标记分别为 5、7、4、2个 ;青杨在这 4个材性性状方面也具有对性状起贡献的标记 ,如与木材密度相关的PMGC2 873 1(贡献率 4 88% )标记 ,与纤维长相关的PMGC456 3 (贡献率 2 2 96% )、PMGC2 70 2 2 (贡献率9 17% )标记 ,与纤维宽相关的PMGC2 40 8 1(贡献率 7 18% )标记 ,与微纤丝角相关PMGC2 52 5 1(贡献率 16 59% )标记 ,在育种中如果能正确加以利用 ,也可起到一定的材性改良作用     

利用RNAi抑制曼地亚红豆杉细胞紫杉烷14β-羟基化酶基因的表达

目的：利用RNA干扰技术抑制紫杉烷14β-羟基化酶(简称14OH)基因的表达。方法：以曼地亚红豆杉(Taxus×media)为材料,通过农杆菌介导的双元载体转化系统将针对14OH基因构建的RNA干扰载体导入该植物细胞中。应用PCR-Southern技术对转基因细胞进行了鉴定。另外,利用RT-PCR技术检测14OH基因mRNA表达水平,并采用HPLC技术对转基因细胞系中三种C-14氧取代的紫杉烷成分进行测定。结果：Southern检测证实转基因实验获得成功,RT-PCR结果表明转基因细胞系中14OH基因mRNA表达水平与对照组相比显著下降,HPLC分析显示C-14氧取代的紫杉烷含量也有明显降低。结论：该RNA干扰技术有效地抑制了曼地亚红豆杉细胞内14OH基因的表达,有望为提高紫杉醇的生物合成产量提供一条新途径。     

一种改良型的免疫印迹法

目的:蛋白免疫印迹法是现代生物实验过程中运用最为广泛的实验技术,常规的免疫印迹法在应用过程中存在很多弊端,如浪费抗体等,因此非常有必要探索出一种新型的免疫印迹法,本文旨在探索一种能够节约抗体的免疫印迹实验方法。方法:将8只SD大鼠随机分常规组和改进组两组,每组4只,活取视网膜组织,进行组织匀浆、蛋白定量,取不同蛋白总量的匀浆变性液进行β-Tubulin的免疫印迹实验,比较两组之间β-Tubulin的蛋白表达量之间是否存在显著性差异,实验需重复三次。结果:不同总量蛋白的免疫印迹显示两组之间β-Tubulin的表达量并无显著性差异。但是,相比常规方法,改进法使用的抗体量更少,条带更容易检测得到。结论:改进后的免疫印迹法能有效的节约抗体,操作方便,实用性强。     

抗虫双价基因表达载体的构建及微束激光转化植物研究

将苏云金芽孢杆菌伴孢晶体(Bacillus thuringiensis,Bt)蛋白的基因与反枝苋菜凝集素(Amaranthus retrojflexus agglutinin,ARA)基因构建成双价基因的表达载体,编码一种既能抗鳞翅目害虫,又能抗同翅目蚜虫的杀虫蛋白.把双价基因(Bt-BA)连接到原核表达载体pET28a和植物表达载体pBI121上,经过限制性酶切分析和PCR鉴定,结果表明:含有双价基因的原核和真核重组表达质粒均已构建成功.将该双价基因转入油菜,获得抗性小植株.     

中国鄂温克、鄂伦春、达斡尔族永生细胞系的建立与保存

本文采用EBV（Epstein?Barr Virus）上清液转化B淋巴细胞,并加入环胞霉素A（Cyclosporine A）抑制T淋巴细胞,成功地对中国东北地区鄂温克族、鄂伦春族及达斡尔族的部分个体建立了永生细胞系,其中鄂温克族49株,鄂伦春族40株,达斡尔族51株,总计140株。永久保存我国特有民族的基因组,为分析其遗传学差异奠定了基础。 Abstract：The immortal lymphoblastoid cell lines were established by EBV transformation of B cells and addition of cyclosporin A to inhabit the activity of T cells.In the present study ,140 immortal cell lines of the Ewenki,the Oroqen and the Daur ethnic groups in the Northeast China were established .This is an important part of the research of human genome diversity for the exploration of the origin and progression of different ethnic groups ,and also provide enough research materials for further studies.     

贵州小型香猪和广西巴马小型猪微卫星位点的遗传学分析

利用35个微卫星位点对贵州小型香猪,广西巴马小型猪的封闭群进行了遗传检测,计算出两个小型猪品系个体样本微卫星位点的平均杂合度,多态信息含量（PIC）、有效等效基因数及品系间的遗传距离。结果表明两个品系的小型猪平均杂合度和PIC均较低,有效等效基因数与实测等位基因数较接近,也表明两品系均有稳定的遗传;两者的遗传距离表明贵州小型香猪和广西巴马小型猪亲缘关系较近,同时表明两者已分别成为两个猛增的封闭群动物。     

环青海湖地区草地生境的蝗虫潜在发生可能性评价

环青海湖地区是青海省草地蝗虫最集中的区域,主要有10种,它们对草地造成了很大危害,草地蝗虫的发生与由植被、地形、土壤等组成的生境类型存在密切的关系。论述了草地蝗虫生境类型划分的原因,并提出了生境分类方案,在此基础上,提出了各类生境针对草地蝗虫潜在发生可能性的评价原理,方法和评价指标体系,并据其对野外实地调查样点进行了评价,结果表明,草地蝗虫潜在发生可能性指数与草地蝗虫密度间的相关系数高达0．90,研究区受草地蝗虫严重危害或较严重危害的生境类型是芨芨草草原,克氏针茅草原及紫花针草原,高寒草甸属一般危害,高寒灌丛草甸则不发生危害。     

GnRH在文昌鱼脑和哈氏窝的分布

用免疫细胞化学方法和抗哺乳动物ＧｎＲＨ抗体研究了ＧｎＲＨ免疫活性细胞在文昌鱼脑和哈氏窝的分布。ＡＰＡ免疫染色法证明了哺乳动物ＧｎＲＨ免疫活性结构分布在文昌鱼端脑前端和靠近中脑的背部,中脑中部,神经管和哈氏窝中。ＧｎＲＨ－ｉｒ胞体有多种类型,一种是大脑胞体,可见在端脑和中脑,另一种为中等和小型胞体,这些胞体聚集在中脑中部（相当于鱼类下丘脑）以及端脑。长的念珠状ＧｎＲＨ－ｉｒ神经纤维从端脑腹外侧面延伸