生物素标记GFV－cDNA探针的制备及在检测葡萄扇叶病毒上的应用

以整合到质粒中的ＧＦＶ－ｃＤＮＡ为模板经ＰＣＲ合成了生物素标记的ＧＦＶ单、双链探针。用合成的探针对提纯的ｃＦＶ－ＲＮＡ＿２、感染ＣＦＶ的昆诺藜叶及１８株而萄进行ＤＮＡ－ＲＮＡ杂交检测表明：检测提纯病毒ＲＮＡ＿２的灵敏度为１．５ｐｇ／斑点,感染ＧＦＶ的昆诺藜提取液最高稀释度可达４０９６０倍;１１株显示典型扇叶症状的样品杂交结果均为阳性,且汁液稀释４００～８００倍仍能测出,７株不显示典型扇叶症状的葡萄中３株受到ＧＦＶ的侵染。单、双链探针最适使用浓度分别为１／２００及１／１００。     

烟草花叶病毒(普通株中国分离物)及其弱毒疫苗N14(番茄株)基因组侵染性cDNA核苷酸全序列测定与分析

用双脱氧末端终止法对侵染性烟草花叶病毒普通株中国分离物(TMV-vulgar,Chinese Isolate,TMVCv)和番茄株弱毒疫苗TM-N14(Attenuated TMV vaccine strain)基因组cDNAs的核苷酸全序列进行了测定,并分析和比较了其基因组的结构和特征。结果表明：普通株基因组(Genbank接收号：AF165190)为6395个核苷酸;4个功能性开放阅读框架(ORF),分别编码126kD/183kD的复制酶、30kD运动蛋白和17.6kD外壳蛋白。弱毒疫苗TMV-N14基因组(Genbank接收号：AF155507)为6384个核苷酸;5个功能性ORF分别编码985kD/126kD/183kD的复制酶、27kD运动蛋白和17.6kD外壳蛋白。与参比序列核苷酸和氨基酸序列比较：普通株核苷酸序列同源率为99.4%;推断的复制酶与运动蛋白分别有5个和2个氨基酸残基不同。TMV-N14核苷酸序列同源率为99.7%;核苷酸位置2670～2672和5632～5634分别发生乳石(Opal)突变(UGA)和赭石(Ochre)突变(UAA);推断复制酶有13个氨基酸残基发生了变异。     

水稻白叶枯病菌的母株与单细胞系的遗传与致病性差异的分析

由水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryxae pv.oryxae)引发的稻白叶枯病是水稻生产上的重要病害.水稻白叶枯菌自然群体是由包括基本无毒性的弱毒菌在内的不同致病型组成的混合群体,代表自然群体的原始菌株的致病力与其毒力结构紧密相关.     

乙醇脱氢酶Ⅱ活性低谷胱甘肽含量高的啤酒酵母工程菌

微生物代谢工程是当前国内外研究的热点.在食品、能源、环境等领域,通过遗传修饰改变微生物的物质和能量代谢流向以获得期望产物的研究已广泛地开展.乙醛是啤酒中重要的风味物质之一,过高的乙醛含量已成为国内啤酒风味改良的瓶颈,一直难有突破.     

抗草甘膦胶红酵母ZM-1 (Rhodotorula mucilaginosa ZM-1)

农药残留的传统处理方法主要采取化学法或焚烧、掩埋的方法.这些方法的缺点很明显,即副作用大、容易造成二次污染、成本较高、作用很慢等.生物修复主要是利用微生物及其产品来降解污染物,它具有无毒、无残留、成本较低等优点.迄今所分离的草甘膦降解菌株主要是一些细菌[1-5],但在同等数量情况下,耕作土壤中的真菌拥有比细菌更高的生物量,应用真菌于草甘膦等除草剂的生物修复已成为一个新的研究方向.     

玉米内生细菌

<正>拮抗内生细菌对寄主植物具有促生、防病、杀虫及固氮等多方面的生物学作用,是植物病害防治的天然资源菌,并且能够作为外源基因载体,为杀虫、防病、固氮等外源植物基因导入植物体内提供了一种很好的     

三氯化铝沉淀法浓缩水体中的病毒

近年来, 水源性病毒疾病的爆发在世界范围内被大量报道, 大量研究证实^[1], 外环境水体及淤泥是病毒存活循环的主要场所, 并因此频频引发传染病的流行。但在生活环境的各种水体中, 除生活污水外, 其所含有的病毒浓度往往很低, 以目前现有的检测方法, 仍然达不到不经浓缩而直接从水中检测病毒的目的。同时,食源性病毒的感染剂量非常低, 10?100 个病毒粒子即可引发感染。病毒在离体条件下存活力很强, 对各种理化因子有较强的抵抗力, 耐乙醚和弱酸, 用氯仿、反复冻融、超声波处理都不能使其失活。因此, 水环境中微量存在的病毒仍然对人类的健康带来很大的威胁。在我国, 虽然已经建立起了以PCR 为主导的病毒快速检测方法, 但是对于水样本的前处理技术至今没有找到十分理想的病毒浓缩方法, 无法有效去除样本中的抑制物, 这些因素都严重制约了针对水中食源性病毒的检测和预防。要掌握各种水体中病毒污染的基本状况, 样品中病毒的浓缩是能否得以成功检测的关键。另外, 目前世界上绝大多数国家所执行的标准中, 对病毒的检测标准及其指示生物都没有做出明确说明,归根结底的原因是由于至今没有建立起有效的方法。有鉴于此, 针对水中病毒研究的热点和存在问题, 本刊2009 年第1 期发表了寇晓霞、吴清平等^[2]针对自来水和污水两种不同水体中病毒的浓缩方法。在现有的检测和浓缩方法的基础上, 通过不断创新, 解决现有方法中存在的主要问题, 摸索制约水体中病毒浓缩方法的关键点, 评价不同方法的优劣和实用性。三氯化铝沉淀法最大的优点是可适用于绝大多数具有不同水质特性的水样, 特别是可以克服膜过滤法因易堵塞而对水体悬浮物浓度有严格限制的缺陷。另外, 就检测条件而言, 该方法无需过滤装置等, 也省去进口的阳电滤膜, 从应用推广的角度更为方便, 费用成本低, 对于系统研究我国水中常见食源性病毒检测和监测有一定的应用价值。目前, 该课题组对水体中病毒浓缩方法进行了多方面的应用。对广州河涌水的病毒污染情况进行了调研,初步了解和掌握了病毒的污染状况。广州市河涌水中食源性病毒污染的总阳性率为37.8％。其中有7 个点呈诺如病毒阳性, 8 个点呈轮状病毒阳性。文献[3?4]报道此类病毒的流行月份、季节性与环境水中调查的病毒污染情况基本吻合, 说明了临床发病与环境中此类病毒的污染有一定的相关性。另外还有些点呈甲肝病毒阳性和星状病毒阳性。调研结果表明三氯化铝沉淀法浓缩水体中病毒的方法具有实用性。