PCR检定OSM cDNA转染细胞中基因组整合与转录

用PCR和RT-PCR方法对人OSM cDNA转染的小鼠黑色素瘤细胞进行基因组整合和mRNA转录的检定.基因组整合检定时,采用与调控序列和cDNA序列相对应的上、下游引物,以连续的转录单位进行扩增,能够更准确地反映整合与表达的关系;mRNA检定时,采用与cDNA序列和质粒克隆位点与加polyA信号之间序列相对应的上、下游引物,可以区分宿主细胞中内源性与外源性基因的转录.     

肺炎链球菌糖疫苗的研究进展

肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)是引起多种疾病的主要病原体,包括侵袭性感染(如败血症和脑膜炎菌血症),以及更常见的粘膜部位感染(如肺炎、中耳炎和鼻窦炎).根据肺炎链球菌表面荚膜多糖结构的不同可以分成不同的血清型,至今已经鉴定出98种,其中有20种具有高毒力.为了预防肺炎链球菌感染,已研制出...     

白洋淀轮虫群落结构特征

选取白洋淀8个采样点于2005年9月—2006年12月对轮虫群落进行定性定量分析,共检出轮虫110种,采蒲台种类数最多,其次是枣林庄,南刘庄最少;从季节来看,春、秋轮虫种类数量最多,夏季其次,冬季最少;根据优势种比较,臂尾轮虫科、迈氏三肢轮虫、针簇多肢轮虫、龟甲轮虫属等甲型-中污性和乙型-中污性水体种类分布在污染较严重的南刘庄,而单趾轮属、腔轮属、鬼轮属等清洁种类则分布在采蒲台、枣林庄、烧车淀等淀区。除端村外,各采样点轮虫密度和生物量于2006年4月出现最大值。根据Q(B/T)指数评价白洋淀各采样点水质,南刘庄属富营养,圈头属寡营养,其它样点属中营养水质。白洋淀轮虫的Shannon-Wiener指数以及均匀度指数则在夏秋季较高,春季较低,而物种多样性指数并不能完全反映白洋淀各采样点的水质。     

产琥珀酸放线杆菌的原生质体制备与再生

基因组重组技术是一项重要的菌种改造技术,原生质体制备和再生是进行基因组重组的前提和基础。目前少有关于产琥珀酸放线杆菌(Actinobacillus succinogenes)CGMCC2650原生质体研究的报道。为了优化该菌的原生质体制备和再生条件,及利用基因组重组技术构建优良菌种提供参考,研究了甘氨酸预处理,菌龄,酶浓度,作用时间,温度对产琥珀酸放线杆菌原生质体制备和再生的影响,并考察了不同渗透压稳定剂对其再生的影响。结果表明,菌体在添加了0.6mg/ml甘氨酸的TSB培养基中培养5h后收集,用SMM稀释到OD660=1.0,用0.025mg/ml溶菌酶在37℃下酶解45min制备原生质体,将原生质体涂布于含0.3mol/L蔗糖的再生培养基中,再生率最大,达到40.9%。确定了产琥珀酸放线杆菌原生质体制备和再生的最佳条件,所用的原生质体制备的方法对琥珀酸的产生没有影响,这为进一步开展该菌的原生质体诱变及基因组重组等研究奠定了基础。     

中国人端粒酶催化亚基(hTERT)基因第六内含子VNTR多态性研究

端粒酶的激活在肿瘤发生、衰老以及细胞永生化过程中起重要作用,端粒酶催化亚基(hTERT)的表达是诱导端粒酶活性的限制性步骤,hTERT的表达受到复杂的调控。hTERT基因组全长40kh,包含16个外显子及15个内含子,其中,在第2和第6内含子中各存在2个可变数目串联重复(VNTR)多态性序列(VNTR2—1st、VNTR2—2nd以及VNTR6—1st和VNTR6—2nd),在第12内含子存在另一个单态性串联重复序列。通过对北京地区210例汉族健康人群hTERT基因第6内含子中36-bpVNTR6—1st的多态性进行调查研究．结果在调查人群中观察到18、20、21、22、23、26和35次重复共7种等位基因型以及14种基因型。基因型频率分布符合Hardy—Weinberg平衡。与韩国浦山地区调查人群类似,20、22及35次重复为最常见的等位基因型,这3种等位基因型频率占调查人群总数的94．76％。除了35次重复等位基因型频率与浦山地区人群存在差异外,其他基因型频率差异不显著。此外,除了在部分重复22次的等位基因型中VNTR5′端与浦山地区人群相同外,其他等位基因型中,北京地区汉族人VNTR6—1st5′端均存在53bD插入片段,显示出不同人种vNTR6—1st周边序列的差异性。北京地区汉族正常人群hTERT VNTR基因多态性资料为研究多态性与肿瘤或衰老的相关性提供了资料。     

非酒精性脂肪性肝合并2型糖尿病患者血清chemerin水平变化及其相关性分析

目的:探讨非酒精性脂肪性肝(NAFLD)合并2型糖尿病患者血清chemerin水平变化及其相关性,为其临床诊治提供参考。方法:选择河北医科大学附属秦皇岛市第一医院收治的NAFLD和2型糖尿病患者作为研究对象,其中NAFLD合并2型糖尿病患者100例(A组),单纯NAFLD患者100例(B组),单纯2型糖尿病患者100例(C组),并选取同期来该院检查的100例健康人作为对照组。比较各组患者的血清chemerin、空腹血糖、胰岛素水平、肝功能、炎症因子、应激反应指标以及胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)差异,分析血清chemerin水平与各项指标的相关性。结果:按照A组、B组、C组以及对照组的顺序,患者血清chemerin、谷氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)、丙二醛(MDA)、空腹血糖、胰岛素及HOMA-IR水平逐渐降低,而血清超氧化物歧化酶(SOD)以及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)水平逐渐升高,组间比较差异具有统计学意义(P0.05)。经Pearson相关性分析,血清chemerin水平与血清ALT、AST、MDA、CRP、TNF-α、空腹血糖、胰岛素水平及HOMA-IR水平呈现正相关,与SOD、GSH水平呈现负相关(P0.05)。结论:血清chemerin水平可通过对胰岛素抵抗、应激反应以及炎症反应等机制进行调节,参与NAFLD合并2型糖尿病的发生以及发展,并具有较好的相关性,可为NAFLD合并2型糖尿病患者的临床治疗提供新的突破点。     

不同生境条件与管理方式对茶园蜘蛛群落结构及多样性的影响

蜘蛛在茶园的生态控制和生物防治中起到重要的作用,为了解不同生境条件和管理方式的茶园蜘蛛群落结构差异和多样性变化,于2011年3月份—2011年10月份,运用振落承接和过筛法对3种不同类型茶园的蜘蛛群落组成与多样性进行了调查。结果表明:(1)3种类型茶园蜘蛛群落组成:3种类型茶园蜘蛛群落在科、属、种的组成及个体数量上,均表现为有机茶园高,无公害茶园次之,普通茶园低,且在物种数和个体数存在显著差异。管巢蛛科和狼蛛科是3种类型茶园的优势类群,球蛛科、跳蛛科、狼蛛科、皿蛛科的物种优势度大于10%。(2)蜘蛛群落物种多样性的多重分析结果表明,有机茶园蜘蛛群落的个体数、物种数、物种多样性指数、物种丰富度指数和均匀度指数均高于无公害茶园和普通茶园,普通茶园最低,且达到显著水平(P0.05)。(3)多元数据分析结果表明,有机茶园蜘蛛群落组成与普通茶园差异较大,无公害茶园与普通茶园蜘蛛群落组成差异较小;3种类型茶园的茶丛蜘蛛群落个体数、物种数及物种多样性指数、丰富度指数和均匀度指数均高于地表,且表现为机茶园多,无公害茶园次之,普通茶园最少。蜘蛛的功能群采集发现,在3种茶园中结网蜘蛛少,而主要是游猎蜘蛛。(4)不使用化学农药的茶园,因其周边生境结构复杂(竹林、小灌木及杂草),植被丰富,形成植被缓冲带,改善了茶园小气候环境,增加了茶园土表覆盖度,可明显提高茶丛和地表游猎蜘蛛的物种数和个体数量。综合研究结果表明,在生态条件好、干扰少的有机茶园中的蜘蛛物种数量、群落多样性明显高于受损生态系统和人为干扰强的普通茶园。     

Tw近交系小鼠的遗传鉴定和罕见基因分析

目的通过等位基因酶的生化多态性可以发现小鼠DNA的序列多态性,为人类疾病基因鉴定和动物实验的研究提供丰富的动物基因库,为科研工作提供宝贵资源。方法应用国产生化标记检测试剂盒,采用遗传生化检测方法,对天津市卫生防病中心自主培育的近交系小鼠进行Akp-1(碱性磷酸酶-1)等二十五个生化位点标记基因检测。结果经检测发现TW(Tianjin wild)小鼠在Amy1(淀粉酶-1),Es2(酯酶-2),Es3(酯酶-3),Es10(酯酶-10),Gpd1(葡萄糖磷酸脱氢酶-1),Hbb(血红蛋白β链),Np1(核苷酸磷酸化酶-1),Pgm2(磷酸葡萄糖变位酶-2)共八个生化位点发现罕见基因。结论检测国内新品系的遗传生化基因位点,发现罕见基因型。     

基于AFM的活体状态外泌体纳米结构及机械特性研究(英文)

外泌体在细胞生理病理活动过程中起着重要的调控作用,研究外泌体的行为特性对于揭示生命活动及疾病发生发展的内在机理具有重要的基础意义.然而由于缺乏合适的观测手段及方法,目前对于活体状态下外泌体结构及特性的认知仍然很不足.原子力显微镜(AFM)的发明为研究溶液环境下天然状态生物样本提供了强大的技术工具,已成为生物学重要研究手段.本文利用AFM对单个活体状态外泌体的纳米结构及机械特性进行了研究.通过多聚赖氨酸静电吸附作用将从淋巴瘤患者骨髓中分离的外泌体吸附至基底,在溶液环境下实现了对单个活体状态外泌体的高质量AFM形貌成像并通过与空气中成像结果进行对比揭示了空气干燥处理对外泌体形貌的影响.在此基础上,分别利用AFM压痕试验和多参数成像技术实现了对单个活体状态外泌体机械特性的定量测量和可视化表征.最后基于所建立的方法技术揭示了化学处理后外泌体结构和机械特性的动态变化.研究结果为研究纳米尺度下活体状态外泌体的结构及特性,以更好理解天然状态外泌体的生理行为提供了新的方法和思路,对于外泌体研究具有潜在积极的意义.