双分子荧光互补技术在神经系统变性疾病蛋白质寡聚化研究中的应用

神经系统变性疾病(ND)的病理特征是蛋白质聚集在细胞内或细胞外形成异常的堆积体而导致神经毒性。双分子荧光互补技术(Bi FC)是研究ND相关蛋白质寡聚化分子机制的重要工具。与其他技术不同的是,Bi FC不但可以在生理环境中对蛋白质-蛋白质之间的相互作用进行可视化检测,而且能够提供详细的亚细胞定位信息。本文通过综述Bi FC技术的原理、优缺点及其在ND研究领域中的应用进展,探讨该技术对揭示寡聚体和包涵体形成原因方面的潜力,为神经系统疾病开发新的治疗策略提供重要参考。     

GL-7ACA酰化酶基因工程菌(Escherichia coli MMR204/pZC1)批式补糖发酵条件优化

戊二酰-7-氨基头孢烷酸(GL-7-ACA)酰化酶(3．1．5．11)可有效催化GL-7ACA分子中戊二酰基侧链水解,形成7-氨基头孢烷酸(7-ACA)而成为两步酶法生产7-ACA的重要工业用酶之一。在已构建的GL-7ACA酰化酶基因(acy)重组质粒pZC1基础上,进一步对酰化酶基因工程菌Escherichia coli MMR204／pZC1的产酶发酵条件进行了考察。研究表明,工程菌的最佳发酵温度为33℃,pH7．5～8．5的微碱条件有利于酶的生成。LB培养基补加适量葡萄糖(1～5g／L),可提高发酵生物量和产酶水平,但葡萄糖的过量补加(6g／L以上),则导致发酵液偏酸(低至pH4．0)而完全抑制酰化酶生成,并证明工程菌生长和产酶对乙酸的抑制效应较为敏感。同时通过5L自控发酵罐的批式补糖试验,对恒速流加、pH反馈控制和指数流加等三种补糖模式的发酵产酶进程进行了比较。结果发现,三种方式的补糖条件下,acy基因在tac启动子控制下,呈组成型表达,细胞生长与产酶同步,无需诱导;其中,以指数流加方式得到的生物量和产酶水平最高。而从acy基因的表达效率,即比酶活看,pH反馈的补料方法略高于恒速或指数流加模式。     

桔梗多糖提取、分离纯化以及生物活性研究

本研究以桔梗为原料,研究了桔梗多糖的分离、纯化和体内抗氧化性,采用水提醇沉、脱蛋白脱色、Sephadex G-25和Sephadex G-100分离纯化桔梗多糖,以抗坏血酸作为阳性对照,采用邻二氮菲法、ABTS+自由基清除、铁还原性、·OH自由基清除法和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)研究粗多糖和纯化后的多糖的体外抗氧化性。结果表明:纯多糖和粗多糖都具有较好的抗氧化效果,纯多糖在ABTS+、·OH和DPPH自由基清除性能上要优于粗多糖,还原性和铁离子螯合活性略低于粗多糖,样品的抗氧化能力与样品的浓度呈正相关。本研究表明桔梗纯多糖是天然的抗氧化剂的潜在资源,为桔梗多糖功能性食品的开发提供了理论依据。     

基于涡度相关法和树干液流法评价杨树人工林 生态系统蒸发散及其环境响应

 运用涡度相关(Eddy covariance)开路系统、树干液流(Sap flow)、土壤水分以及微气象观测系统, 于2006年生长季(5~10月)对北京大兴区永定河沿河沙地杨树(Populus euramericana)人工林生态系统的水量和能量平衡进行了连续测定; 分析了该系统能量平衡闭合水平及其组分分配特征, 不同水分条件下蒸发散及其各组分变化过程和分配特征, 以及影响蒸发散的主要环境因子; 并对组分求和法、土壤水分平衡法与涡度相关法测得该生态系统生长季蒸发散总量的结果进行了对比。结果表明: 生长季内该生态系统的能量闭合水平较高, 能量平衡各组分在不同土壤水分环境条件下所占比例变化较大; 在水分充足的条件下, 潜热通量在可利用能量分配过程中占优势, 显热通量在水分胁迫条件下占可提供能量的比例比潜热通量大。雨季到来之前, 土壤蒸发与植被蒸腾强度相差较小; 进入雨季后, 土壤深层水分得到补偿, 植被蒸腾显著增强而土壤蒸发强度减弱。涡度相关法所得的总蒸发散量与基于树干液流法等组分求和法得到的蒸发散结果较接近, 分别为513和492 mm。土壤水分平衡法的观测结果略高于前二者的观测结果, 雨季研究界面以下的土体也有水分交换是该方法高估蒸发散的主要原因。与环境因子的响应关系表明, 蒸发散以及蒸腾的变化过程对净辐射的响应程度比对饱和水汽压差高; 水分条件较好情况下, 蒸发散以及蒸腾的变化过程与水汽压差关系不明显, 说明水分充足时, 水汽压差不是蒸散强弱的限制因子。     

腹腔镜和开腹手术治疗结石性胆囊炎疗效探讨

目的：观察腹腔镜和开腹手术治疗结石性胆囊炎的临床疗效,探讨术后并发症的发生率、患者的康复情况并评价手术的安全性。方法：选取2012年2月．2013年4月我院肝胆外科住院治疗的急性结石性胆囊炎患者100倒,随机分为观察组和对照组,每组50例。观察组采用腹腔镜手术治疗;对照组采用传统开腹手术治疗。观察并比较两组的手术时间、术中出血量、愈合时间、术后并发症及患者恢复情况等。结果：观察组手术治疗的有效率为96％,对照组为80％,差异具有统计学意义（P〈0．05）;观察组术后出现胆心反射3例,腹腔出血l例,感染2例;对照组术后出现胆心反射3例,腹腔出血4例,感染5例,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：腹腔镜治疗结石性胆囊炎较传统开腹手术治疗术式疗效显著,术中出血较少,并发症少,术后恢复快,患者术后痛苦少,值得临床推广。     

3种藓类植物水分含量与光合作用、呼吸作用和水势的关系

对湿地匍灯藓〔Plagiomniumacutum(Lindb.)T.Kop.〕、大羽藓〔Thuidiumcymbifolium(Dozy&Molk.)Dozy&Molk.〕和垂藓〔Chrysocladiunretrorsum(Mitt.)Fleisch.〕的水分含量与光合作用、呼吸作用和水势的关系进行了初步研究（1999年5月20日到6月10日）。在这3种藓类植物中,其水分含量与光合作用速率（Pn）的关系可以分为2种类型一种类型如大羽藓和垂藓,在藓体水分含量20%～70%时,Pn随着水分含量增加而增加,但是在80%～95%时,Pn随水分含量增加而下降,光合最适水分含量约70%～80%;另一种出现在湿地匍灯藓,水分含量20%～80%时,Pn随着水分含量增加而增加,在80%～95%时,Pn维持一个较高的水平,光合最适水分含量为80%～90%。在一个大的水分含量范围内（60%～95%）,暗呼吸（Rd）保持相对稳定,但是在水分含量较低时（20%～70%）,Rd随着水分含量的下降而下降。在藓体水分含量与水势之间的关系方面,3种藓类植物相似,水分含量与水势对数之间的回归曲线为S形曲线。     

结核分枝杆菌Rv1168c蛋白的基因表达、纯化及结构分析

【目的】应用原核表达体系对结核分枝杆菌PPE蛋白家族Rv1168c进行高效表达,进一步进行蛋白纯化和结构分析。【方法】以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,扩增Rv1168c基因,构建pET32a-Rv1168c重组质粒;转化重组质粒到大肠杆菌DH5α并在BL21(DE3)诱导表达,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺电泳(SDS-PAGE)鉴定Rv1168c在大肠杆菌中的表达情况;Ni-NTAHis﹡Bind Resin纯化重组蛋白Rv1168c;SDS-PAGE和质谱分析测定相对分子量后,用圆二色光谱(CD)和同源模建方法分析和检测重组蛋白Rv1168c的二级和三级结构。【结果】成功克隆了971bp的目的基因Rv1168c,并获得了高纯度的重组蛋白Rv1168c。重组蛋白的分子量为51.5kDa(含载体蛋白)。25℃时重组蛋白Rv1168c的二级结构包括34.4%α螺旋,33.7%β转角,31.9%无规则卷曲,它的三维模型显示为(β/α)5结构。【结论】成功得到高纯度的重组目的Rv1168c蛋白,并初步进行了结构分析,为进一步对Rv1168c结构和功能研究奠定了基础。     

饲料营养对饲血蚊传播HBV动物实验的影响

以含乙型肝炎病毒的人血饲喂三属蚊叮咬树，复制人类乙型肝炎病毒感染动物模型１～２个月后，由于饲料营养配比不当，树的出现消瘦、被毛蓬松、死亡率较高。经调整饲料有效营养配比，制成均衡营养颗粒饲料。提高了树乙型肝炎病毒感染模型的存活率，取得了较好的效果。