蟾蜍细胞溶素的纯化及其生化特性研究

利用阴离子交换和凝胶过滤柱层析等方法对蟾蜍卵黄外被细胞溶素进行了分离纯化,获得了高纯度的样品．该酶的质量为３２ｋＤ,其特异性ＭＣＡ－人工合成底物为Ｂｏｃ－Ｇｌｎ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－ＭＣＡ,能被ＤＦＰ、ＳＢＴＩ、ｌｅｕｐｅｐｔｉｎ和ｐ－ＡＭＰＳＦ等蛋白酶抑制剂所强烈抑制,但不受ｃｈｙｍｏｓｔａｔｉｎ、ｂｅｓｔａｔｉｎ、Ｅ－６４和ＥＤＴＡ等的影响,表明该酶是一种丝氨酸类型的蛋白酶     

组蛋白乙酰化与基因活化

组蛋白乙酰化与基因活化李芳芳明镇寰（杭州大学生命科学学院,杭州３１００１２）关键词基因活化乙酰基转移酶（乙酰化酶）去乙酰化酶基因活化是基因进行转录的前提。组蛋白的乙酰化,特别是Ｈ３和Ｈ４的乙酰化,被认为是基因活化的重要特征之一。但过去由于找不到乙酰化...     

棉花漆酶基因在转基因新疆杨中的表达及其对木质素合成的影响

以新疆杨叶柄为外植体,利用农杆菌法将棉花漆酶基因GaLAC1导入新疆杨.PCR,Soutllern杂交证明外源基因已经整合到杨树基因组中.漆酶活性分析表明转基因植株中漆酶活性较非转基因对照显著提高.与对照植株相比,转基因新疆杨茎段中总木质素的含量有不同程度的增加,最高达21.5%.木质素的组织化学染色进一步证实了GaLAC1的过量表达能够导致转基因植株中总木质素含量的增加.实验结果表明GaLAC1参与了植物体内木质素的合成,这是首次成功利用转基因植物证实植物漆酶基因参与木质素合成的报道.     

Rb蛋白干涉增强人胃癌细胞SGC-7901对化疗药物顺铂敏感性的研究

目的:研究通过RNAi技术特异性降低人胃癌细胞SGC-7901中的细胞周期调节蛋白Rb表达量,观察对化疗药物顺铂(eisplatin,CDDP)敏感性的变化,并探讨其潜在机制.方法:化学合成针对Rb的干涉序列和对照序列,转染SGC-7901细胞.采用Western blot和RT-PCR的方法检测干涉效率.通过流式细胞术检测干涉Rb对细胞周期的影响.干涉组和对照组细胞分别在10%和无血清的1640培养基中培养,并给予20μM顺铂或对照处理不同时间,采用Western blot检测Caspase-3的活化,通过MTT检测细胞的存活率.结果:设计的干涉序列可以高效抑制Rb的表达,从而促进细胞进入G1期,当细胞在10%的培养基条件下培养时,与对照组相比,Rb干涉的细胞凋亡率明显增加;而当细胞在无血清条件下培养时,干涉和对照组细胞凋亡率无明显差别.结论:干涉Rb可能通过促进细胞进入G1期而增强肿瘤细胞对化疗药物顺铂的敏感性.     

新疆维吾尔族人寻常型银屑病与HLA-Cw*0602等位基因的关联研究

目的:寻找新疆维吾尔族人银屑病与HLA-Cw*0602等位基因的相关性.方法:运用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)法,检测新疆维吾尔族人200例寻常型银屑病患者和200例健康对照的HLA-Cw*0602等位基因频率,分析携带该基因的银屑病患者与其家族史的相互关系.结果:①病例组HLA-Cw*0602等位基因频率较对照组显著升高(73%vs24%,X2＝108.551,OR=10.171,95%可信区间6.410～16.140,P＝0.000),且无性别差异;②携带HLA-Cw*0602等位基因的银屑病患者发病年龄早于不具有该等位基因的患者(80.2%vs28.6%,X2=10.256,OR=0.950,95%可信区间0.920～0.981,P=0.001);③有银屑病家族史患者携带HLA-Cw*0602等位基因的频率与无银屑病家族史的患者无显著意义(X2=0.000,OR=0.986,95%可信区间0.252～3.860,P=1.000).结论:新疆维吾尔族银屑病患者与HLA-Cw*0602等位基因高度关联,且携带该等位基因的银屑病患者易发生早发型(发病年龄≤40岁)银屑病,但不能确定有家族倾向性.     

MTA1蛋白在食管鳞癌中的表达和临床意义

目的:探讨肿瘤转移相关基因1(MTA1)蛋白表达与食管鳞癌临床病理参数之间的关系.方法:应用免疫组化SP法和Western blotting方法检测50例食管鳞癌组织中MTA1蛋白的表达.结果:50例食管鳞癌组织中42例MTA1蛋白阳性表达,阳性率为84%.而癌旁组织中10例MTA1蛋白阳性表达,阳性率为20%,差异有显著性(P＜0.05);MTA1高表达与组织分化程度和淋巴结转移有关(P＜0.05),与年龄、性别、肿瘤大小无关(P＞0.05).结论:MTA1在食管鳞癌中高表达,与食管鳞癌的疾病进展密切相关,并有望成为基因治疗的新靶点.     

7种寄主和非寄主植物气味对茶尺蠖成虫行为的调控效应

为探讨茶园生态系中植物气味对茶尺蠖成虫行为的影响,遂以茶园群落中7种常见植物新鲜嫩梢为味源,设1.5、5.0、7.5、10.0、15.0、20.0g和30.0g剂量,洁净空气为CK1,用Y型嗅觉仪对茶尺蠖成虫进行的剂量反应结果为:①剂量为1.5g时寄主薄荷诱得的成虫数与CK1的差异显著;随着剂量增加,其诱得成虫数呈抛物线式递减;剂量为30.0g时其诱得成虫数显著小于CK1。②随着剂量的加大,寄主迷迭香、茶叶和吸毒草诱得成虫数呈抛物线式递增,剂量分别为7.5、10.0g和15.0g、以及10.0g时,3种寄主分别与CK1引诱成虫数的差异显著;当剂量再加大,3种寄主皆表现驱避效应,当剂量为30.0g时迷迭香诱得成虫数显著小于CK1。③当剂量为1.5g时,寄主万寿菊呈微弱引诱效应,当剂量再增加时则呈微弱驱避效应且驱避效应增强,当剂量为30.0g时其诱得成虫数显著小于CK1。④当剂量为5.0g时,寄主碰碰香无引诱或驱避效应;剂量为7.5g时,碰碰香呈微弱引诱效应;当剂量再增加时则呈微弱驱避效应。⑤当剂量为5.0、7.5、10.0g,非寄主薰衣草未呈现引诱或驱避;当剂量再增加时则呈驱避效应;当剂量为30.0g时其诱得成虫数显著小于CK1。再以正己烷为溶剂,取新鲜薄荷、万寿菊、茶叶嫩梢榨汁,汁液浸泡橡皮头24h以汲取气味,制成诱芯,气味以当量计算,即1.5g薄荷/诱芯、0.75g薄荷/诱芯、1.5g万寿菊/诱芯、1.5g茶叶/诱芯;以正己烷浸泡橡皮头24h作为CK2。诱芯附于土黄色粘板组成诱捕器,连续7d诱捕第5代成虫,每日更换色板,均有较强诱捕效应;从1.5g薄荷/诱芯、CK2、1.5g万寿菊/诱芯、0.75g薄荷/诱芯至1.5g茶叶/诱芯,诱效显著增加;1.5g薄荷/诱芯的诱效显著弱于CK2。在第5代茶尺蠖幼虫期,取1/6hm2茶园各3个作为诱捕小区,同样大小的3块茶园作为CK3,查虫口基数。第5代发蛾盛期,在每诱捕小区均匀放置5种诱捕器各7只,连续诱捕7日,每日更换色板,第6代幼虫虫口校正下降率30%。由试验结果认为:植物气味有效调节茶尺蠖成虫行为,薄荷诱效稍强于茶叶,熏衣草有驱避效应。     

根癌农杆菌介导的大豆遗传转化

农杆菌介导法是大豆遗传转化的重要方法之一 ,许多实验室应用该方法得到了转基因大豆 ,但目前使用该方法进行转化的效率还比较低 ,尚需深入研究。农杆菌菌株、大豆基因型、组织培养条件、T-DNA的转移效率和转化后的筛选模式都会影响大豆转化的效率。概述了近年来根癌农杆菌介导的大豆遗传转化的一些重要成果 ,以及转化过程中大豆的易感性与农杆菌的转化能力、乙酰丁香酮促进vir基因活化、转化的受体系统和巯基混合物减轻受体材料的褐化、提高T DNA的转移效率等几个重要因素的研究进展 ,并介绍了转化中常用的几个筛选标记基因 (nptⅡ、hpt、bar基因和突变的ahas基因 )及通过共转化法去除标记基因的方法 ,同时对今后研究的重点进行了讨论.     

杜仲次生木质部分化和脱分化过程中酸性磷酸酶的超微细胞化学定位

杜仲（EucommiaulmoidesOliv．）次生木质部分化过程中,在形成层刚衍生的木薄壁细胞中,酸性磷酸酶（APase）主要分布于核膜边缘和高尔基体;在分化程度较高的木薄壁细胞中,APase散布于整个核中,进而,在各种细胞器残体上聚集;在成熟的木薄壁细胞中,APase沿细胞壁内侧分布。在未成熟导管分子中,核、质膜及纹孔上明显存在APase聚集,进而,核解体;在即将分化成熟的导管分子中,APase主要集中于初生壁;在已分化成熟的导管分子中,APase集中于次生壁。脱分化过程中,只在细胞质中可见分散的APase活性,而细胞核和细胞壁上未见此酶的分布;更深层的即将分化成熟和已分化成熟的导管分子,未见有细胞分裂,其上APase的分布与剥皮前相同。通过比较分化和脱分化过程中APase的分布,推测不同的APase同工酶可能分别参与了次生木质部细胞程序性死亡过程中原生质体的解体和次生壁的建成。APase的聚集程度可能是决定细胞能否脱分化的一个重要特征。     

反义c—fos寡脱氧核苷酸对hCG诱导大鼠黄体细胞孕酮和雌二醇生成的 …

采用离体孵育大鼠黄体细胞的方法,观察了反义ｃ－ｆｏｓ寡脱氧核苷酸（反义ｃ－ｆｏｓＯＤＮ）对ｈＣＧ诱导的黄体细胞孕酮（Ｐ）和雌二醇（Ｅ２）产生的影响,同时观察了外源性ｃＡＭＰ和钙离子通道阻断剂维拉帕米对黄体细胞中ｃ－ｆｏｓ蛋白的影响。结果发现,反义ｃ－ｆｏｓＯＤＮ能呈剂量相关方式抑制ｈＣＧ诱导的黄体细胞Ｐ和Ｅ２的产生,同时使ｃ－ｆｏｓ蛋白染色阳性的黄体细胞百分数下降;而无义ｔａｔ ＯＤＮ没有相应的作