适合本科教学的"DNA的粗提与鉴定"实验

对高中生物学实验“DNA的粗提与鉴定”做了一些改进,主要有：1）选用洋葱鳞茎作为实验材料;2）增加了离心机、移液器等基因工程常用实验仪器;3）DNA的鉴定改用琼脂糖凝胶电泳法。探索出一套适合本科生的实验技术体系。     

羊草大、小孢子发生与雌、雄配子体发育的观察

利用常规石蜡制片技术研究了羊草大、小孢子发生及雌、雄配子体发育过程。主要结果是：(1)花药壁由4层结构组成,最外层为表皮,其次为药室内壁,1层中层,最内层绒毡层为分泌型;(2)小孢子母细胞减数分裂过程中的胞质分裂为连续型,四分孢子为左右对称型;(3)成熟花粉粒为3细胞型,具单萌发孔;(4)羊草为单子房、单胚珠,双珠被、薄珠心、倒生型胚珠,大孢子母细胞减数分裂形成线型或T型排列的4个大孢子;合点端大孢子具功能;(5)具有双孢原,双大孢子母细胞、双大孢子四分体和双胚囊的情况;(6)胚囊发育为蓼型,反足细胞经无丝分裂形成4～6个细胞的反足细胞群;(7)同一朵花中,前期雄蕊的发育早于雌蕊的发育,后期当花粉成熟时,雌配子体也达到成熟,雌雄蕊发育趋于同步。     

番木瓜β-Gal基因RNAi双T-DNA植物表达载体的构建及其遗传转化的初步研究

克隆了番木瓜(Carica papaya L.)果肉的细胞壁水解关键酶β-半乳糖苷酶(β-GAL)基因保守区,将其反向重复插入载体pKANNIBAL,构建RNAi中间表达载体pKAN/RG,将其上的发夹结构取代经改造的载体pCAMBIA 1300上hpt II基因,构建中间表达载体p1300~-/MFRG,分离单T-DNA区段,与载体pCAMBIA 2301构建RNAi双T-DNA植物表达载体p2301/TTRG.酶切分析和PCR检测表明,p2301/TTRG已被成功导入农杆菌EHA 105.通过遗传转化,初步获得了GUS染色呈阳性且具Kan抗性的番木瓜胚性愈伤组织.     

家榆胚胎学研究

采用常规石蜡切片法,借助光学显微镜对家榆胚胎发育进行研究,研究结果表明：（1）家榆的花药具4个药室;小孢子母细胞减数分裂过程中的胞质分裂为同时型;小孢子四分体排列为四面体型和左右对称型;成熟花粉为2-细胞型;（2）花药壁发育类型为双子叶型,腺质绒毡层;（3）家榆子房两心皮1室,侧膜胎座,1枚倒生胚珠,双珠被,厚珠心;四分体呈直线型和T型排列;（4）家榆胚囊类型为单孢子蓼型胚囊;胚的发育类型为茄型;核型胚乳;无胚乳型种子。     

血清TgAb水平在分化型甲状腺癌术后转移复发中的预测价值

目的:探讨完全切除甲状腺组织后血清甲状腺球蛋白(TG)阴性时,血清抗甲状腺球蛋白抗体(Tg Ab)对分化型甲状腺癌(DTC)术后复发/转移的预测价值。方法:选择2013年4月-2015年4月我院收治的57例完全切除甲状腺组织,TG阴性且Tg Ab阳性的DTC患者临床病历资料,并将其分为复发/转移组(20例)和无复发/转移组(37例)。采用放射免疫分析法测定并比较两组患者的血清TG、Tg Ab水平,分析Tg Ab对DTC复发/转移诊断的灵敏度、特异度、阳性预测值以及阴性预测值,采用Logistic回归分析DTC复发/转移的独立危险因素。结果:复发/转移组的血清Tg Ab水平为72~3850 IU/m L,高于无复发/转移组的18~3638 IU/m L,差异有统计学意义(P0.05)。其中Tg Ab对DTC复发/转移诊断的灵敏度为85.71%,特异度为83.33%,阳性预测值为75.00%,阴性预测值为90.91%。经Logistic回归分析发现,Tg Ab水平为100≤Tg Ab204 IU/m L、204≤Tg Ab≤1000IU/m L、1000 IU/m L是DTC复发/转移的独立危险因素(OR=1.267,2.853,6.791,P0.05)。结论:Tg Ab可作为评估完全切除甲状腺组织、TG阴性且Tg Ab阳性的DTC患者复发/转移的重要指标,其值越高,复发/转移发生的可能性越大。     

‘云香’水仙ACC氧化酶基因的克隆表达分析及其遗传转化与鉴定

利用RT-PCR技术,从‘云香’水仙中克隆了1个新的ACO(ACC氧化酶)基因(NtACOY2)。NtACOY2基因全长975bp,开放阅读框(ORF)936bp,编码311个氨基酸残基,蛋白分子量为35.83kD。蛋白结构预测发现,该蛋白含有典型的ACO家族保守的DIOX_N和20G-FeⅡ_Oxy结构域。进化分析表明,NtACOY2编码的氨基酸序列高度保守。实时荧光定量PCR表明,NtACOY2在花瓣和副冠中的表达均随着‘云香’水仙花的衰老而逐渐上升,并且各个时期花瓣中的表达量均高于副冠,在花蕾期的花瓣中表达量达到最高,表明NtACOY2基因可能参与‘云香’水仙花的发育,并且与其花衰老密切相关。通过PCR和酶切反应鉴定,成功构建了NtACOY2基因的正反义植物表达载体,将正义载体经农杆菌介导转化烟草,PCR检测显示共有15株转化植株扩增出了与阳性对照大小相同的片段,进一步用RT-PCR鉴定阳性转化植株,最终获得了12株转基因烟草。随机选取2株转基因植株(Z1、Z2)与野生型(WT)完全相同条件下移栽温室培养,结果 Z1、Z2分别比WT提前8和7d开花,且转基因烟草花朵开放数量均多于野生型,表明NtACOY2在转录水平能够正常表达。实验结果为进一步研究NtACOY2基因的功能奠定了基础。     

图门江流域人口压力对东北虎数量的影响

图门江流域曾是东北虎适宜生存地，有着广泛分布，近百年来由于人口迅速增长，人口压力不断加大，原始森林大面积皆伐，东北虎栖息领地绝大多数被灌丛，荒山，农田及村镇所代替。东北虎主要食物，大型草食动物，也相继大幅度减少。虎与人畜矛盾日益尖锐，东北虎被捕杀的机遇逐年增大，整个流域东北虎数量日趋减少，目前已基本绝迹。     

柳州市野生蛇资源调查分析

目的为了解本市野生蛇种类资源状况。方法进行市场调查、询问、采访蛇农、实地考查相结合。结果共收集蛇标本57条,经鉴定共分5科15属26种。结论本市蛇种资源并不丰富,但捕捉现象严重,应加强宣传,提高保护意识。     

Fmoc-Asn(Trt)-OH与Wang树脂的合成研究

研究了Fmoc-Asn(Trt)-OH与Wang树脂的酯化反应工艺。探讨了反应策略、溶剂体系、投料比、反应时间以及反应温度等条件对手工合成Fmoc-Asn(Trt)-Wang树脂反应的影响。并用微波辅助方法与常规方法进行了对比。实验结果表明了采用HBTU/HOBt/DIEA方法的连接效率最高。对反应的优化结果为:NMP/DCM体积比为1:7,体系、摩尔比为3:1,每次反应时间4 h,温度40℃。微波对本酯化反应影响不大。     

番木瓜单染色体的显微分离与克隆

用玻璃针显微分离出番木瓜(CaricapapayaL.)单染色体,经过LA-PCR扩增得到80-700bp的DNA片段。Southern杂交表明,扩增片段与番木瓜基因组DNA之间有同源性,从而证明番木瓜单染色体DNA已经被成功扩增。将扩增产物克隆到pGEM-T-Easy载体中,约获得1.18×105个克隆,酶切鉴定插入片段大小为100-400bp。