一种高效产生小鼠杂交瘤的电融合方法

近年来,细胞电融合技术(Electrofusion)得到了迅速发展和应用.特别是在单克隆抗体领域,人们希望能以电融合技术的高融合频率来更有效地获得分泌单抗的杂交瘤.现主要有两种较有效的电融合方法来实现这一目的:一是Nova/Hopkins的抗原—抗生物素—生物素桥联(antigen-avidin-biotin bridge)方法,另一种则是Zimmermann电融合法.Nova/Hopkins方法虽然非常有效,但其较适用于中高亲和性的抗原—抗体系统     

用酸敏脂质体将荧光染料导入NIH3T3细胞及人胚肺成纤维细胞

我们制备了由DOPE/CHOL/OA(4:4:3)组成的酸敏脂质体,将荧光染料Calcein装载在脂质体内,并将这种包有荧光染料的脂质体导入NIH3T3细胞和人胚肺成纤维细胞。90％以上的细胞有荧光物质进入,并均匀分布于细胞质。我们还制备了由DOPC/CHOL/OA(4:4:3)组成的非酸敏脂质体,其将荧光物质导入细胞的能力不如前者好。本文使用的冷冻干燥法制备脂质体,方法比较温和、所得到的脂质体有利于携带DNA或其它生物活性物质。     

Na~(+)、Ca~(2+)、Cu~(2+)和Zn~(2+)与HSA相互作用的~(23)(Na)-NMR研究

 本文应用~23Na-NMR波谱技术,研究了Na~(+)、Ca~(2+)、Cu~(2+)和Zn~(2+)与人体血清白蛋白(HSA)的相互作用。在实验基础上,通过引入两位快交换模型,拟合计算获得了Na~(+)与HSA相互作用的结合常数和处于结合状态Na~(+)的相关时间;实验表明Ca~(2+)能与Na~(+)竞争同HSA结合,拟合计算获得了两者与HSA相互作用结合常数的比值,棕榈酸钠能增强Ca~(2+)同Na~(+)竞争与HSA结合的能力;从实验上未能观察到Cu~(2+)、Zn~(2+)能同Na~(+)竞争与HSA相互作用的证据。     

大肠癌中p53基因突变的研究

应用聚合酶链反应(PCR)──单链构型多态性(SSCP)结合银染法对14例大肠癌p53基因的第4、第5─6和第7外显子进行了点突变的研究,结果共检测出6例点突变,而且发现各外显子的突变频率存在差异。另外,利用购自ATCC的两个探针 (p53cDNA探针和pYNZ22探针)对大肠癌中p53基因的杂合性失去进行了研究,在14例大肠癌中共检出6例杂合性丢失。将点突变检测结果同杂合性丢失结果进行比较分析, 并着重探讨了大肠癌中p53基因失活导致肿瘤的作用方式。 Abstract:The exons 4-7 of p53 gene were examined in 14 colorectal Cancer patients by using PCR-SSCP-silver staining method.The results showed 6 cases of point mutation and the mutation frequencies of exons were different from each other.p53 cDNA and pYNZ22 VNTR were used as probes to examine LOH(Loss of heterozygosity)of 14 colorectal cancers.6 cases with LOH were found.The results of present research suggest that mutation and LOH of p53 gene are critical events in the progress and development of Cancer.There were different kinds of inactivation model of p53 gene in the process of development of cancer and transformation of cells.     

不同急性失血量和等容稀释对家兔血压心率微血管的影响

本实验以麻醉家兔总血量的１０％、２０％、３０％、４０％和５０％的动脉放血,并以５０％放血后等量输入生理盐水,使血液稀释．结果发现,随着失血度增加和红细胞压积的降低,动脉血压下降,等容稀释后动脉血压明显回升;心率随失血的增加出现先快后慢,等容稀释后变慢更明显．眼结膜微血管随失血量增加血速度变慢,等容稀释后明显加快．眼结膜微血管口径随失血量增加而变大,等容稀释后仍进一步变大．实验提示,急性失血红细胞压积在２５％左右,这时佐以等容血液稀释,保持正常容量,对机体无害而且是有益的．     

骨骼肌肌丝分化与横纹肌肉瘤分化异常的研究

本工作观察了鸡胚胸肌原代培养物内完成末次分裂的有丝分裂后肌母细胞在初生０时－２２小时内形态分化与肌专一蛋白表达的时、空间特征。肌母细胞的肌分化程序是（１）退出细胞周期,（２）开始合成和集累结蛋白与肌丝蛋白,（３）细胞伸长,肌丝肌节的装配,（４）细胞融合形成多核肌管。横纹肌肉瘤的细胞周期与肌末分化关系异常,肌丝分化阻断。少数瘤细胞形成正常肌丝肌节,表明瘤细胞内仍存在正常肌分化所需的全部遗传信息。肌分     

人重组IL6／IL2融合蛋白的变性、复性及纯化

经超声破碎,分离已表达CH925包涵体,较系统地研究变性剂浓度、融合蛋白浓度对蛋白折叠的影响.在还原型及氧化型谷胱甘肽复性条件下,成功地将融合蛋白CH925折叠成具有IL6及IL2双活性蛋白,IL6的比活为2.3×10⁸U/mg, IL2比活为2.2×10⁶U/mg.经阴离子交换、凝胶过滤层析,获得一定纯度的CH925,配合反相HPLC.洗脱收集蛋白峰,CH925纯度为98%.     

黑龙江河篮蛤生殖期及其与水温关系的初步研究

本文采用性腺活体观察和组织切片法对黑龙江河篮蛤的生殖期进行了初步研究,并探讨了生殖期与水温的关系。结果表明,性腺活体观察R值出现3次高峰,实际上大港自然海区中黑龙江河篮蛤一年有2次产卵高峰,其生殖细胞的排放要求一定的水温(17—22℃)。     

人巨噬细胞集落刺激因子（hM—CSF）基因的合成及表达

按照ｈＭ－ＣＳＦ基因的序列,适当采用大肠杆菌的优选密码子,人工合成了Ｍ－ＣＳＦ的基因。在合成中我们采用了分段克隆和顺次克隆的方法,在次级克隆中我们成功地使用多片段分组连接和多片段一次克隆战略,还尝试了多种单链战术,在表达载体的构建中,充分利用人工合成基因的灵活性,通过对Ｎ端６个氨基酸编码的变换及ＳＤ序列－ＡＴＧ间距离的改变,获得了大肠杆菌中高效表达的重组体,表达的蛋白量的变换及ＳＤ序列－ＡＴＧ间距     

重组人IL6／2融合蛋白对6.5Gy照射小鼠造血功能恢复的影响

观察了ｈＦＰＩＬ６／２对６．５Ｇｙγ线照射ＮＩＨ小鼠第１０天造血功能恢复的影响。结果表明：照射小鼠连续４ｄ给予ｈＦＰＩＬ６／２２５０μｇ·ｋｇ－１·ｄ－１,其脾重、ＣＦＵ－８、骨髓有核细胞数及ＣＭ－ＣＦＵ分别比对照组增加５９．０％、２７８．５％、５７．９％和１３８．２％,统计学处理均有显著差异;对此四项指标的改善也明显优于２５μｇ组。另外,２５０μｇ剂量组小鼠外周血象３０ｄ的动态观察结果表明,ｈＦＰＩＬ６／２不但能明显提高红细胞和血红蛋白的最低值,而且能使血小板的恢复提前。提示ｈＦＰＩＬ６／２在促进血小板生成和促进红系造血方面可能具有良好的应用前景。