核骨架结合元件功能研究的进展

细胞核骨架结合元件（ｎｕｃｌｅａｒｓｃａｆｏｌｄ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｒｅｇｉｏｎ,ＳＡＲ）或称核基质结合元件（ｎｕｃｌｅａｒｍａｔｒｉｘ－ａｔｔａｃｈｍｅｎｔｒｅｇｉｏｎ,ＭＡＲ）,是８０年代发现的一个新的ＤＮＡ元件。到９０年代初,由于发现ＳＡＲ／...     

乙酰肝素酶:一个新的癌症治疗靶分子

癌症每年吞噬约 6 0 0 0万人的生命[1] ,是人类的主要杀手之一。近几十年来 ,尤其是美国在 1 971年提出“对癌症宣战”以来 ,人们已经对癌症发生、发展的机制以及治疗癌症的方法进行了大量研究 ,并且取得了许多成果。现在人们普遍接受的观点认为 :癌症的发生是由于细胞不受控制地增殖所造成的恶性增生 ;癌症的转移是由于癌细胞从癌组织中突破胞外基质的限制 ,转移扩散到别的器官并继续增殖所造成。癌症成为致命的疾病 ,不仅在于癌细胞的生长失去控制 ,更在于其转移能力。可以说 ,正是转移才使癌症如此险恶。癌细胞的转移需要突破胞外基质及…     

蓖麻蚕rDNA5‘—非转录间隔区的DNA序列及结构特征

我们测定了蓖麻蚕ｒＤＮＡ５‘－非转录间隔区ＳａｃⅡ－ＥｃｏＲＩ片段的ＤＮＡ序列,它的长度为１０２５ｂｐ,Ａ＋Ｔ含量大于７０％。本文报道该片段的序列特征,用计算机对其内所具的结构基序进行分析结果说明。其中含有多个与核骨架结合区有关的结构基序和酵母自主复制序列的核心序列。包括９个弯曲ＤＮＡ,１０个Ｔ盒,５个Ａ盒结构基序以及１３个拓扑异构酶的ＩＩ的识别位点的同源序列,３４个反向重复序列,３０多个ＡＴＴＡ     

小鼠一个新基因mLPTS的克隆、表达及亚细胞定位

利用EST拼接技术,RT－PCR及DNA序列测定,首次成功克隆了小鼠新基因mLPTS。获得的mLPTS基因片段长1244bp,编剧了一个由332个氨基酸组成的蛋白质。该蛋白质与人的LPTS蛋白有78％的同源性,LPTS基因是本实验室通过定位候选克隆策略获得的一个新的肝癌相关基因。它在肝癌组织中不表达或低表达,并参与细胞生长的负调控。小鼠mLPTS基因在小鼠的各个组织中都有表达,与人LPTS基因的表达组织分布相同。分析比较了LPTS蛋白在不同物种间的序列同源性,发现LPTS在进化上是高度保守的,是一个具有重要功能的基因。将mLPTS基因与绿色荧光蛋白EGFP融合构建真核表达载体,在中国仓鼠卵CHO细胞中表达,发现mLPTS基因表达产物位于细胞核仁中,为进一步研究该基因的功能及作用途径提供了重要信息。     

蓖麻蚕rRNA基因中SAR对真核基因表达的调控

蓖麻蚕核糖体RNA基因非转录间隔区（NTS）有一长约1kb所核骨架结合区（scaffold-associated region,SAR）。将这一序列克隆到含荧光素酶（luciferase）报告基因的真核表达载体pLu中,在阳离子脂质体的介导下对NIH3T3细胞进行瞬时转染（transient transfection)及稳定转化（stable transformed)株的筛选,然后检测SAR在瞬时转染及稳定整合条件下对荧光毒酶报告基因表达活性的影响。实验结果表明,在稳定转化的细胞中,该SAR对lucicerase基因的有明显的激活作用,增强基因表达活性约15倍;而在瞬时表达的条件下,SAR激活基因表达的作用不明显。说明SAR增强基因的表达可能需要整合在染色体上才能完成,我们用Southwestern印9迹法实验进一步证实了蓖麻蚕rRNA基因的SAR能特异性地与NIH3T3细胞核骨架蛋白结合,因此该SAR的作用具有非组织特异性。     

蓖麻蚕rDNA核骨架结合元件SAR的检测和特征分析

采用二碘水杨酸锂盐 (LIS)制备细胞核骨架 ,Southern杂交法检测与细胞核骨架结合的rDNA片段 ,发现蓖麻蚕rRNA基因 5′非转录间隔区 (NTS)内存在一个很强的核骨架结合元件 .外切核酸酶Ⅲ消化限定表明 ,该SAR位于SacⅡ -EcoRⅠ限制酶片段内 ,长度约 1kb .经DNA顺序分析表明 ,该片段AT碱基富集 ,A +T >70 % ,含有拓扑异构酶Ⅱ保守序列和ATATTT结构花式 ,以及酵母自主复制序列(ARS)的同源序列 ,该SAR内含有 (AT) ₁₈序列已证明是核酸酶S1的超敏感位点 ,这种核酸酶S1的超敏感性可能是SAR元件的信号特征之一 .     

蓖麻蚕rDNA基因核骨架结构区在酵母中的自主复制功能

蓖麻蚕核糖体ＲＮＡ基因（ｒＤＮＡ）５＇－非转录间隔区有长约１ｋｂ的核骨架结合区ＳＡＲ。本文对该ＳＡＲ元件的酵母自主复制功能进一步研究,证明该ＳＡＲ ５＇端６８８ｂｐ含有１２个ＡＣＳ（ＡＲＳ的核心序列）同源序列,但无ＡＲＳ活性,而其３＇端仅３个ＡＣＳ同源序列,但对酵母的转化率比全片段还高４０￣５０倍。体外结合实验证明,蓖麻蚕ｒＲＮＡ基因的ＳＡＲ能专一地同酵母核骨架结合,提示ＡＲＳ的功能体现与核骨架结     

人肝癌组织中的一个Lis1基因的阅读框移码突变

将ＧＳＴ融合蛋白表达与蛋白质截短检测法（ＰＴＴ）法相结合,检测Ｌｉｓ１基因在肝癌组织中的阅读框移码突变。即从肝癌组织中通过ＲＴ－ＰＣＲ扩增的Ｌｉａ１基因克隆人ＧＳＴ融合蛋白表达载体ｐＧＥＸ０１,并于大肠杆菌ＤＨ５α中进行表达。通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳发现肝癌组织中有截短的ＧＳＴ－Ｌｉｓ１融合蛋白,大小为３３ＫＤ,而全长融合蛋白大小应为７１ＫＤ。经测序验证,发现产生截短蛋白的Ｌｉａ１基因在第１６３位     

定位候选克隆

当前,人类基因组研究的重心正在由“结构”向“功能”转移,一个以基因组功能研究为主要内容的所谓“后基因组时代”（ｐｏｓｔ－ｇｅ－ｎｏｍｉｃｓ）,也即功能基因组（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｇｅ－ｎｏｍｉｃｓ）时代,即将到来。如何获取基因的功能信息,即与人类重大...