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乙型肝炎病毒(HBV)能引起急性和慢性的乙型肝炎,慢性HBV感染可能导致肝硬变,最终引发肝细胞癌(HCC)。在世界范围内慢性HBV感染几乎波及三亿人,其中四分之三在亚洲。一些研究结果表明男性遭受慢性HBV感染、肝损伤和肝细胞癌的危险性高于女性。许多临床报告证明,给慢性HBV患者服用可的松类甾类激素可使患者血清中的HBsAg水平上升,同样的激素处理也能使培养细胞中的HBcAg表达水平升高。1988年Tur-Kaspa等用DNaseⅠ足迹法证实HBV基因组含有一个糖皮质激 相似文献
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大鼠再生肝中表达上调基因的筛选与鉴定 总被引:8,自引:0,他引:8
采用新发展的抑制差减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH)在基因组水平筛选再生肝中高表达基因。大鼠肝部分切除后24h的再生杆组织来源的cDNA作为受检者(tester),正常肝组织的cDNA作为驱动者(driver),进行差减杂交,获得一900个克隆的差减杂交库,随后对差减克隆进行了差异筛选,得到50个在再生肝中高表达的强阳性克隆,序列测定和同源比较表明这些克隆代表了37个基因,其中13个与已报道的肝再生相关的基因同源,15个为忆知基因但首次发现与肝再生相关,9个为新的基因(EST)已被GenBank收录。制备了标准化RNA点杂交膜,通过对上述部分基因的RNA点杂交分析,不但确认了这些基因在再生肝中表达水平的升高,同时发现它们在肝再生过程中有不同的表达模式。实验结果提示这些基因在肝再生过程中具有重要功能。 相似文献
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LPTS基因是利用定位候选克隆策略克隆的一个新的肝相关候选肿瘤抑制基因。LPTS基因编码一个全长为328氨基酸的蛋白质(LPTS-L),该蛋白具有抑制细胞端粒酶活性的功能。为了进一步研究LPTS-L蛋白的结构与功能,利用DNA重组技术,将LPTS-L的cDNA克隆到表达载体pET-24a中构建重组克隆pET-24-LPTS,并在大肠杆菌BL-21中进行融合表达,获得可溶形式的LPTS-L融合蛋白。采用Ni Sepharose4B柱亲和层析,可以获得纯度较高的蛋白,但不适合大量制备。通过设计引物去掉了pET-24a载体上的6×His tag将LPTS-L基因进行了非融合表达,然后采用磷酸纤维素P11阳离子交换层析纯化LPTS-L蛋白,纯度可达到55%。再经Sephadex G-100凝胶过滤,LPTS-L蛋白的纯度可达到80%。Western blot实验显示经纯化后的LPTS-L蛋白可与兔抗GST-LPTS-L的多抗发生特异性结合。采用TRAP法测定蛋白质活性,结果显示纯化得到的LPTS-L蛋白可抑制端粒酶的活性,与采用Ni Sepharose4B纯化获得的LPTS-L融合蛋白比较,其抑制效率基本一致。因此,所建立的技术可以有效地制备LPTS-L蛋白。 相似文献
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Scaffoldassociatedregion(SAR)andmatrixattachmentregion(MAR)areknownascisactingDNAelements,whichspecificallybindtonuclearscaffoldornuclearmatrix.SAR/MARareusually300—1000bplong,ATrich,andcontainingtopoisomeraseIIconsensussequenceandotherATrichsequencemotifs[1].… 相似文献
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本文用寡聚核苷酸介导的定点突变改造乙型肝炎病毒(HBV)基因中的糖皮质激素应答元件(glucocorticoid response element,GRE),并将改变前后的GRE相关DNA片段与氯霉素乙酰基转移酶(CAT)基因融合,与多种激素受体的表达质粒共转染肝细胞,分别用不同的激素处理,测定CAT基因的表达活性以确定HBV上GRE相关DNA片段对各种激素的应答。结果表明HBV上GRE相关DNA片段能介导异源基因对糖皮质激素、孕激素和雌激素的应答。不含Enl的GRE相关片段与CAT基因融合后,在不加激素诱导的情况下,CAT基因活性明显降低。 相似文献
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LPTS抗体的制备和活性检测 总被引:4,自引:0,他引:4
LPTS是利用定位候选克隆策略 ,得到的一个新的肝相关候选肿瘤抑制基因 (anovelliver relatedputativetumorsuppressor) ,为了进一步研究其结构与功能 ,利用DNA重组技术 ,将LPTS的cDNA克隆到融合表达载体pET 2 4a中 ,在E .coli中表达 ,以Ni+柱亲和层析 ,获得纯化的 6×His LPTS融合蛋白。以此为抗原免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体 ,ELISA法检测其滴度达 2 0 0 0 0以上 ,经亲和层析纯化 ,Western印迹结果表明 ,该纯化抗体可与真核表达的HA LPTS蛋白和内源性的LPTS蛋白特异性结合 ;免疫荧光分析显示SMMC 772 1细胞内源性表达的LPTS蛋白呈点状分布于细胞核内。以上结果表明获得了效价高 ,活性强的针对LPTS蛋白的多克隆抗体 ,可用于对LPTS的结构和功能研究。 相似文献
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蓖麻蚕核糖体RNA基因(rDNA)5′-非转录间隔区有长约1kb的核骨架结合区SAR(scafold-associat-edregion)[1]。本文对该SAR元件的酵母自主复制功能进一步研究,证明该SAR5′端688bp含有12个ACS(ARS的核心序列)同源序列,但无ARS活性,而其3′端仅3个ACS同源序列,但对酵母的转化率比全片段还高40~50倍。体外结合实验证明,蓖麻蚕rRNA基因的SAR能专一地同酵母核骨架结合,提示ARS的功能体现与核骨架结合紧密相关。rRNA基因SAR与ARS的功能在进化上可能是很保守的。在此基础上可进一步分析SAR中与DNA复制相关的正调及负调元件。 相似文献
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