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目的建立用荧光定量PCR方法检测猪IGF-Ⅰ基因表达量的标准曲线.方法根据自己克隆的猪IGF-Ⅰ(GenBankNo.DQ784687)基因mRNA序列,设计合成引物和探针,采用Taqman探针荧光定量RT-PCR的检测方法,构建检测猪IGF-Ⅰ基因表达量的标准曲线.结果由pMD-18TIGF-Ⅰ所构建的标准曲线线性关系良好(反应体系中含1×102~1×106拷贝猪IGF-Ⅰ基因分子时,扩增反应Ct值与拷贝数的对数呈线性关系)、灵敏度高(可检测出低于10个拷贝/μL的样品)、特异性强、准确可靠.结论成功构建了用荧光定量RT-PCR方法检测猪IGF-Ⅰ基因表达量的标准曲线. 相似文献
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牦牛α-乳清蛋白基因的克隆与序列分析 总被引:13,自引:0,他引:13
根据奶牛α-乳清蛋白基因序列设计引物,用PCR方法扩增并克隆了牦牛(Poephagens grunnieus)α-乳清蛋白基因的全序列。结果表明,在671-2689bp之间,共有4个外显子和3个内含子,牦牛α-乳清蛋白基因共编码142个氨基酸,其中第1-19氨基酸之间的短肽为信号肽序列。牦牛的α-乳清蛋白基因有较高水平的表达可能与基因内非编码序列碱基突变引起的回文结构消失有关。该基因5′侧翼序列在结构上牦牛和牛基本相同,只有MGF因子识别位点稍有差别。且牦牛的该序列更符合Groenen等1994年总结的该因子识别位点的模式序列,因此牦牛的该基因5′调控区可能更适于进行组织特异性表达的转基因动物的制作研究。 相似文献