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快速简便筛选cDNA文库的SSS法 总被引:5,自引:0,他引:5
建立了一种快速简便筛选cDNA文库的方法—SSS法(subsection screening)。该方法用cDNA噬菌体平板划块分组和根据目的基因设计的一对特异性引物,用PCR技术逐级筛选cDNA文库获得目的基因。与其它筛选cDNA文库的方法相比,该方法范围可控,目标明确,易于获得目的基因,而且快速、简捷、省时,一般可在一周内筛选出目的基因。本实验室利用该方法在半个月内筛选出了一个查耳酮异构酶(chalcone isomerase)(CHI)基因,一个黄酮类化合物3′-羟化酶(flavonoid 3′hydroxylase)(F3′H)基因,一个热激蛋白(heat shock protein)(HSP)基因和一个1 484 bp 热激蛋白基因片段。此方法用于同时筛选多个基因,可收到事半功倍的效果,对其它文库筛选也有借鉴意义。
Abstract:A quick and simple method subsection screening (SSS) method for screening cDNA library by PCR was established.With this method,cDNA phage plate was cut into several blocks and a couple of primers was designed according to target gene.And then the target genes were obtained by screening cDNA library.Comparing with other methods,this method has many advantages such as controlled range and clear target,and also quick and simple for obtaining the target genes.It is possible to get a target gene in one week in general by this method.Thus,the CHI gene,F3′H gene,HSP gene and one HSP partial fragment,were obtained respectively in half month in our lab.We can get twice the result with half the effort when we screen several genes in the same time.It is also suitable to screen other libraries. 相似文献
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从水母雪莲Saussurea medusa Maxim. cDNA文库中得到一段查尔酮合酶基因 (SmCHS) 片段,然后通过RT-PCR得到完整的查尔酮合酶基因cDNA。序列分析表明SmCHS全长1 313 bp,其开放阅读框为1 170 bp,编码389个氨基酸,预测表达蛋白的分子量为43 kDa。构建原核表达质粒pET28a(+)-SmCHS,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),获得表达菌株。经IPTG诱导表达后,对表达产物进行SDS-PAGE分析,结果显示,表达的融合蛋白以部分可溶的形式存在。用Ni-NTA预装柱对融合蛋白进行亲和纯化,对纯化蛋白进行酶活检测,结果表明融合蛋白具有查尔酮合酶活性,可催化底物4-香豆酰辅酶A和丙二酰辅酶A缩合生成产物柚皮素查尔酮。 相似文献
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光质,光强和光期对水母雪莲愈伤组织生长和黄酮生物合成的影响 总被引:35,自引:0,他引:35
白光、蓝光、红光和远红光等不同光质照射及不同的白光强度对水母雪莲愈伤组织生长,苯丙氨酸氨基裂解酶(PAL)活性及黄酮合成有不同的影响。红光明显促进愈伤组织的生长,但强烈抑制PAL活性和黄酮的合成。蓝光对愈伤组织生长无明显影响,但显著提高PAL活性和黄酮的合成。白光的作用介于红光和蓝光之间。远红光的作用与蓝光相似,但作用比较弱。每天16h蓝光加8h白光和8h蓝光加16h白光的组合产生最高的黄酮含量和 相似文献
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水母雪莲体细胞胚胎发生及其植株再生 总被引:7,自引:0,他引:7
水母雪莲(Saussurea medusa Maxim.)茎和叶片的切段接种于MS+2mg/L NAA 0.5mmg/L 6-BA的培养基上,20d后产生黄褐色的愈伤组织,经过几个月的继代培养,愈伤组织仍保持旺盛的增殖能力,但部分由黄褐色逐渐变为红色,将红色愈伤组织转到MS+0.1mg/L NAA+0.2mg/L 6-BA 5mg/L GA3的培养基上,30d后可分化出大量的体细胞胚,体细胞胚成熟后转到1/2MS+0.2mg/L IAA 0.5%活性炭的培养基上,30d后可长出2-4cm的根,带根的小苗经锻炼后移栽到土壤中,成活率达76%,细胞组织学观察表明,发育成熟的体细胞胚具有胚根,胚轴和胚芽的完整结构,具有独立的维管系统。 相似文献
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植物细胞培养生产黄酮类化合物研究进展 总被引:2,自引:0,他引:2
黄酮类化合物是中药的一种主要有效成分,本文综述了利用植物细胞培养方法合成黄酮类化合物的研究状况和各种环境条件对植物细胞生长和黄酮类化合物合成的影响。 相似文献
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水母雪莲的细胞培养和高产黄酮细胞系的筛选 总被引:14,自引:0,他引:14
用水母雪莲(SausureamedusaMaxim.)的茎和叶片作外植体,在MS附加0.5mg/LBA、2mg/LNAA的培养基上诱导愈伤组织,并研究了不同培养基、植物激素、培养温度以及苯丙氨酸对固体培养细胞生长和黄酮形成的影响。结果表明:MS培养基附加2mg/LNAA,在25℃利于细胞生长;苯丙氨酸对细胞生长未见有促进作用,但有利于细胞中黄酮的形成。用目视法直接挑选两种不同次生代谢能力的细胞系:浅黄色系(A系)和红色系(B系)。用快速灵敏的紫外分光光度和高效液相法,测得离体培养细胞A系中总黄酮的含量为1.9%,jaceosidin的含量为0.42%,分别是B系中的2.3倍和3.9倍,是原愈伤组织中的2.6倍和4.2倍。 相似文献
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