沈阳市人类免疫缺陷病毒的基因序列分析

从10份沈阳地区人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)血浆标本中提取核糖核酸(RNA),经逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和套式聚合酶链反应(nest-PCR)扩增HIV-1的p17与p24交界部分的基因片断并进行测序。将所测序列与各亚型国际参考株及亚洲流行参考序列进行比对,确定被检标本的亚型,并进行基因序列分析。同时将所得亚型结果与经过亚型特异性引物的复合套氏PCR鉴定基因亚型的方法所获结果进行比较。结果表明,10份HIV-1病毒株分属B′、CRF07-BC和CRF01-AE3种基因亚型。本文所研究样本的p17区段的ks/ka值小于1,而p24区段的ks/ka值大于1;p24部分的基因同源性高于p17部分,即我国HIV-1B′、CRF07-BC和CRF01-AE3种亚型毒株的p17区段的基因变异较大,而p24区段相对较为保守。提示上述3种亚型HIV-1病毒株的p24区段更适合于HIV-1疫苗的研制。     

重组人载脂蛋白AI米兰突变体在大肠杆菌中的可溶性表达

载脂蛋白AI米兰突变体(apoliproteinA-I-Milano ,AIM)是载脂蛋白AI的天然突变体,具有比载脂蛋白AI更强的抗动脉粥样硬化症的作用。将AIM基因N_末端的氨基酸密码子优化后,克隆至表达载体pET2 2b ,重组质粒转化BL2 1(DE3)宿主菌,用IPTG诱导表达。AIM以可溶形式表达,约占菌体总蛋白的38%。表达产物经ButylSepharose 4F .F疏水层析和QSepharoseH .P .阴离子交换层析后,再用Vivaspin2 0 (30 0 0 0MW)进行超滤,AIM单体的纯度达95 %以上。AIM单体与脂结合活性表明,AIM单体结合脂的速度比apoA_I慢,但结合脂的量比apoA_I高。这项研究为AIM的结构和功能,特别是临床应用研究奠定了基础。     

斑马鱼食源性肠炎模型及其免疫细胞成像分析方法的建立

为了研究豆粕替代鱼粉对鱼类肠黏膜免疫的影响和建立缓解肠炎药物的筛选及功能性饲料添加剂的平台,研究采用固有免疫或适应性免疫细胞荧光标记的斑马鱼品系,通过50％的豆粕添加量替代鱼粉作为蛋白源,共设计了两组饲料,分别在幼鱼固有免疫或适应性免疫的发育阶段中饲喂荧光标记的斑马鱼,构建了斑马鱼豆粕诱导的肠炎模型,对构建的食源性肠炎...     

猪GH基因部分突变位点对生产性能的影响

本试验利用PCR-RFLPs技术,用MspⅠ,ApaⅠ两种限制酶,检测了猪生长激素基因+206～+711位共506bp片段中的[+295～+300、+563～+566]2处突变位点,分析了各多态位点在姜曲海猪中的分布及其与生产性能的关系.发现:姜曲海猪中,MspⅠ酶切突变位点中的G1G2基因型和G2G2基因型个体的生产性能没有差异,不同日龄体重在两组间变化没有规律.ApaⅠ酶切突变位点G4G4基因型个体的20日龄体重、45日龄体重高于G3G3/G3G4基因型个体,但差异不显著,G4G4基因型个体的70日龄体重极显著高于G3G3/G3G4基因型个体(P<0.01).G4G4基因型个体的0～70日龄日增重也极显著高于G3G3/G3G4基因型个体(P<0.01).这些结果显示GH基因有可能作为数量性状基因座的侯选基因。 Abstract:A 506bp segment of the porcine growth hormone gene encompassing base +206 of the first intro through base +711 of the third exon was amplified by PCR [Base numbering followed the designation of Vice & Wells (1987)].Two polymorphic restriction sites forApaI,Msp[ were identified at +295~+300,+563~+566 respectively.DNA was from Jianquhai breeds.The effect of genotype on bodyweight was analysed.The result showed that there was no difference of bodyweight between G1G2 and G2G2 genotype pigs in MspI polymorphic restriction sites.But in Apa I polymorphic restriction sites,the 70-days-bodyweight and average day gain from birth to 70-days of G4G4 genotype pigs was extremely significant(P<0.01) higher than G3G4/G3G3 genotype pigs.Result suggested that GH gene may be a candidate gene for quantitative trait locus in pigs.     

苏姜猪及其杂交后代HSL基因PCR-RFLP分析

以苏姜猪、二元杂交猪（长白猪×苏姜猪、大白猪×苏姜猪）为研究对象,分别为60头,分析了HSL基因外显子Ⅰ区域PCR-RFLP多态性。结果表明,苏姜猪及其杂交后代群体中HSL基因外显子I中存在Bsa H I酶切片段长度多态性,均检测到AA、AB和BB基因型。苏姜猪群体中A等位基因占优势,频率为73.34%;杂交猪中B等位基因占优势,频率分别为56.66%和65.00%。研究结果丰富了苏姜猪的分子生物学研究,为苏姜猪的合理开发利用提供了依据。     

全细胞催化生产苯乙酰-7-氨基-3-脱乙酰氧基头孢烷酸的条件优化

头孢类抗生素由于广谱性和低毒性被广泛用于细菌感染的治疗。7-氨基-3-脱乙酰氧基头孢烷酸(7-aminodeacetoxycephalosporanic acid,7-ADCA)作为半合成头孢类抗生素的重要中间体,需求量逐渐增加,而7-ADCA主要由G-7-ADCA(苯乙酰-7ADCA)脱酰基得到。工业上多以化学法合成G-7-ADCA,成本高,污染严重。迫切需要对环境友好且经济高效的合成方法。在前期研究中,构建了一株可以将青霉素G转化为G-7-ADCA的代谢工程菌(E.coli H7/PG15)。本研究通过单因素试验对E.coli H7/PG15的G-7-ADCA合成过程进行优化,包括底物组成及其最适浓度,转化条件(菌体浓度、p H、青霉素浓度、MOPS浓度、葡萄糖浓度,铁离子浓度和时间等)。优化后,建立了全细胞催化法生产G-7-ADCA的工艺流程,使G-7-ADCA的产量稳定在15 mmol/L左右,转化率达到30%,具有操作简便、高效和经济的优势。     

溶微囊藻细菌的富集筛选及其菌群结构特征

利用铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)作为溶藻对象富集、筛选, 获得一个稳定的溶藻菌群。采用叶绿素、PCR和变性梯度凝胶电泳(DGGE)方法研究溶藻过程及其细菌种群结构的变化。结果显示, 富集的溶藻菌经1×10-5稀释后仍有显著溶藻效果。Rubritepida菌C1、假单胞菌C2和鞘氨醇单胞菌C3是存在于铜绿微囊藻中的3种伴生细菌。加入富集的溶藻菌群后, 菌群结构发生明显的变化, Rubritepida菌C1、假单胞菌C2消失, 混合菌群包含未培养黄杆菌A2、鞘氨醇单胞菌C3和噬氢     

利用PCR技术克隆乳链菌肽前体基因

乳链菌肽(Nisin)是由核糖体合成,经翻译后修饰、加工而含有稀有氨基酸的一种小肽分子。它对许多革兰氏阳性菌,包括利斯特氏菌属、梭菌属和芽孢杆菌属这些腐败苗和病原菌有强烈抑制作用。 已被50多个国家和地区广泛应用于乳制品、罐头食品、高蛋白食品及乙醇饮料的防腐保鲜,是越来越 受到人们重视的一种无毒的天然食品防腐剂⑴。对乳链菌肽分子结构与功能及生物合成遗传控制的研 究不仅有应用价值,而且有其理论意义。本实验室以产乳链菌肽的乳酸乳酸球菌ATCC 11454总DNA 为模板,利用PCR技术成功地扩增了乳链菌肽前体基因,并对其核苷酸序列进行了测定。     

蛋白质预算：合成生物学的成本标尺

合成生物学以创建人工生命体系为目的.实践中人们希望人工生命体系具有更强的生产能力、转化能力、环境适应与监测能力,从而获得更优质的生产方式.生命体系的优化涉及到多层次的调控网络,而根本上还是对细胞中蛋白质的含量、定位、活性的控制.在蛋白质表达水平上进行控制是合成生物学元件设计、模块组装以及适配性研究最核心的手段.类似于工厂中的成本计算,合成生物学创建的人工生命体系(人工细胞工厂)以蛋白质预算为依据.优化蛋白质预算的研究策略已经成功应用于合成生物学研究实践中.     

载脂蛋白A-I抗动脉粥样硬化的研究进展

载脂蛋白A—I是HDL最主要的结构成分,是卵磷脂胆固醇酰基转移酶的主要激活剂。它决定了HDL的代谢和在血浆中的浓度。实验已经证明,载脂蛋白A—I具有抗动脉粥样硬化症的功能。在这里阐述了载脂蛋白A—I的结构和制备;载脂蛋白A—I和HDL的关系以及它在抗动脉粥样硬化方面的作用和可能的机理：胆固醇的逆向转运、抗氧化作用和调节炎症反应。