苏云金杆菌辅助蛋白P20对杀虫晶体蛋白Cry1Ab表达的影响

苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis, 简称Bt)杀虫晶体蛋白Cry1Ab因其C半端缺少了一段含4个半胱氨酸的氨基酸序列而导致蛋白的不稳定,报道苏云金杆菌辅助蛋白P20帮助Cry1Ab蛋白的表达及晶体的形成。利用穿梭载体pHT3101构建3个表达质粒,即pT1B、pP1B和pDP1B,3个质粒都含有cry1Ab基因,不同在于pT1B没有p20基因,pP1B含有p20全基因,而pDP1B不仅含有p20全基因,且在p20基因前插入cry1A?启动子。分别将这3个表达质粒经电转化到苏云金杆菌晶体缺陷型菌株CryB中,获得转化菌株T1B、P1B和DP1B。Western blot表明cry1Ab基因在这3株菌中均表达了130 kD的蛋白,部分降解为大约60 kD的蛋白。蛋白定量分析显示,3株菌130 kD蛋白量的比为1∶1.4∶1.5,降解后的60 kD蛋白量的 比为1∶1.1∶1.6,Cry1Ab蛋白总量的比为1∶1∶2∶1.6。镜检发现,Cry1Ab在3株菌中都形成典型的菱形晶体,其晶体大小为T1B Helicoverpa armigera）均具有明显的杀虫活性,三者的LC₅₀差异不显著。研究表明,P20对cry1Ab基因的表达和晶体形成均有帮助,P20表达量的多少可能是导致Cry1Ab蛋白最终产量有所不同的因素。     

HPLC法测定国产葡萄酒中白藜芦醇的含量

采用HPLC法测定国产葡萄酒中白藜芦醇的含量。色谱条件为 :Shim packCLC ODS柱 (15 0mm× 6 0mm) ,流动相 :0 2mol/LH3 PO4 CH3 CN(2 0∶80pH 3 0～ 3 5 ) ,在 30 6nm测定。测得 15种国产葡萄酒中通化干红葡萄酒的白藜芦醇含量最高为 5 6 0mg/L。该方法灵敏 ,重现性好     

苏云金芽孢杆菌分子伴侣串联基因p19-p29的克隆和表达载体的构建

根据已知序列设计一对PCR引物(ORF5S,ORF3N),可从cry2Aa或cry2Ac操纵子中扩增出包含串联分子伴侣基因p19p29的DNA片段,预期大小分别为16kb和20kb。对150株苏云金芽孢杆菌菌株进行PCR检测,从26株中获得了大小为16kb的扩增片段,但未获得20kb的片段。这表明cry2Aa型操纵子p19p29基因存在较广泛,而cry2Ac型较罕见。将来自Y2菌株的16kb片段回收,通过一系列亚克隆,最终构建成一个含有p19p29串联基因的Bt表达载体,为进一步研究p19p29串联基因的功能奠定了基础。     

苏云金杆菌Cyt类杀虫晶体蛋白及其特征

本文综述了国内外有关苏云金杆菌Cyt类杀虫晶体蛋白的分类、杀虫特性、作用机理;具有分子伴侣功能的20kDa蛋白对cyt基因在大肠杆菌和苏云金杆菌中的表达的影响;以及利用Cyt类蛋白控制害虫对苏云金杆菌抗性的意义。     

右美托咪定经鼻滴注对脊柱手术患者围术期血流动力学变化及镇静作用的临床研究

目的:观察右美托咪定经鼻滴注对脊柱手术患者围术期的镇静作用及对血流动力学变化的影响。方法:将90名ASAⅠ~Ⅲ级、18~65岁、拟在全身麻醉下行脊柱手术、且术后须拔除气管导管的患者,随机分为三组:对照组(C组)、右美托咪定1μg/kg组(D1组)和右美托咪定1.5μg/kg组(D2组),n=30。分别记录给药前(T0)、诱导前(T1)、插管前1 min(T2)、插管后1 min(T3)、手术开始即刻(T4)、术毕停全麻药时(T5)、拔管前1 min(T6)、拔管后3 min(T7)和入PACU(T8)时患者的心率(HR)、平均动脉压(MAP)、氧饱和度(SPO_2),术毕停全麻药至拔除气管导管的时间、患者在术后恢复室停留时间、Ramsay镇静评分。结果:T0时3组患者HR、MAP、SPO_2、Ramsay镇静评分无统计学差异(P≥0.05);与C组相比,D1组和D2组各时间点HR、MAP明显降低,Ramsay镇静评分提高(P≤0.05),SPO_2无明显变化(P≥0.05);与D1组相比,D2组各时间点HR、MAP明显降低、Ramsay镇静评分提高(P≤0.05),SPO_2无明显变化(P≥0.05);D1组各时间点HR、MAP、SPO_2、Ramsay镇静评分无明显差异(P≥0.05);D2组HR、MAP、SPO_2、Ramsay镇静评分明显无差异(P≥0.05)。C组T3、T4、T5、T6、T7、T8各时间点HR、MAP均较T1、T2升高,Ramsay镇静评分均明显提高(P≤0.05),SPO_2无明显变化(P≥0.05)。结论:麻醉诱导前40 min右美托咪定经鼻滴注可有效抑制插管和拔管期反应、使血流动力学变化更加稳定,并显著降低降低患者术后躁动的发生率。     

VEGF, MVD 在胃癌预后及上消化道出血风险的研究进展

胃癌是危害人类健康的常见恶性肿瘤,也是上消化道出血常见的病因之一。其发生发展是多因素、多基因改变参与的长期、协同的病理过程。血管生成(angiogenesis)是这一发展过程中的关键步骤,血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和微血管密度(micro vessel density,MVD)作为调控血管生成的主要因子和微血管的主要评价指标,在胃癌患者预后、临床病理因素中的作用被广泛研究。上消化道出血(upper gastrointestinal hemorrhage)是胃癌患者的常见临床症状威胁和影响患者的生存质量。新近有研究者提出,VEGF及MVD与胃癌患者的上消化道出血风险正相关,本文就相关研究进展进行介绍。     

全反式维甲酸拮抗地塞米松抑制人气道上皮细胞16HBE凋亡

该研究探讨全反式维甲酸(all-trans Retinoic Acid, ATRA)对GCs诱导人气道上皮细胞过度凋亡的拮抗作用。将人支气管上皮细胞16HBE作为研究对象,使用10μmol/L地塞米松(Dex)、1μmol/L ATRA处理细胞,体外培养16HBE细胞,分为Dex组、ATRA组、Dex+ATRA组和Control组。采用TUNEL法检测16HBE细胞凋亡情况, Annexin V/PI双染法检测膜磷脂酰丝氨酸外翻的情况,荧光探针JC-1检测线粒体膜电位变化, Western blot检测细胞的凋亡蛋白Caspase-3和其水解片段Cleaved-caspase-3的水平。相较于Control组, Dex组的TUNEL阳性细胞明显增多, Annexin V阳性蛋白明显上调,线粒体膜电位明显下降, Caspase-3和Cleaved-caspase-3的水平明显增高;联合ATRA则可以显著减轻Dex引起的这个趋势。因此, Dex可以导致人支气管上皮16HBE细胞的过度凋亡,而ATRA可以削弱Dex的这种作用。     

彩色能量多普勒超声阻力指数与宫颈癌患者VEGF、MVD以及临床病理特征的关系

目的:研究彩色能量多普勒超声阻力指数与宫颈癌患者血管内皮生长因子(VEGF)、微血管密度(MVD)以及临床病理特征的关系。方法:以2015年2月-2018年2月我院收治的宫颈癌患者50例为研究对象,记为宫颈癌组。另取同期于我院接受治疗的宫颈上皮内瘤变患者50例记为宫颈上皮内瘤变组,取同期于我院体检的健康志愿者50例记为对照组。采用经阴道彩色能量多普勒超声检测三组受试者阻力指数,采用免疫组织化学法检测三组受试者VEGF表达以及MVD值。分别比较三组受试者阻力指数、VEGF表达及MVD值,并分析宫颈癌患者阻力指数与临床病理特征的关系,同时采用Spearman相关性分析宫颈癌患者阻力指数与VEGF、MVD的相关性。结果:宫颈癌组阻力指数低于宫颈上皮内瘤变组和对照组,且宫颈上皮内瘤变组低于对照组(P0.05);而宫颈癌组VEGF表达与MVD值高于宫颈上皮内瘤变组和对照组,且宫颈上皮内瘤变组高于对照组(P0.05)。病灶直径40 mm、临床分期Ⅰ-Ⅱ期、中高分化、无淋巴结转移宫颈癌患者阻力指数均高于病灶直径≥40 mm、临床分期Ⅲ-Ⅳ期、低分化、有淋巴结转移宫颈癌患者(P0.05),而阻力指数与宫颈前后径、组织学类型无关(P0.05)。经Spearman相关性分析可得:宫颈癌患者阻力指数与VEGF以及MVD均呈负相关(P0.05)。结论:彩色能量多普勒超声可有效反映宫颈病变形态结构特征、血管生成状况以及浸润情况,临床工作中可联合彩色能量多普勒超声与VEGF、MVD的测定,有助于判断宫颈癌患者病情严重程度,为临床治疗方案的制定以及预后评估提供参考依据。     

丹参酮对于阿尔茨海默症大鼠颞叶iNOS,MMP-2表达的影响及机理研究

目的：应用中药丹参酮（tanshinone ⅡA,Tan ⅡA）治疗AD大鼠,观察TanⅡA干预前后,AD大鼠学习记忆、颞叶中诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）、基质金属蛋白酶（MMP-2）表达的变化。方法：采用β-淀粉样蛋白（Aβ）定向注射法建立AD大鼠模型,并使用Tan Ⅱ A干预,通过避暗测试、real-time PCR和Western Blot分别观察大鼠学习记忆能力、大鼠颞叶MMP-2、iNOS两者的mRNA及蛋白表达的变化。应用SPSS13.0进行统计学分析。结果：与假手术组相比,AD组的平均潜伏期缩短（P〈0.01）,平均错误次数增加（P〈0.01）,差异均有统计学意义。颞叶内iNOS、MMP-2 mRNA表达均显著增高（P〈0.01,P〈0.01）;两蛋白的表达均显著增高（P〈0.01,P〈0.01）。与AD组相比,Tan ⅡA组的平均潜伏期延长（P〈0.01）,平均错误次数减少（P〈0.01）,差异均有统计学意义。颞叶内iNOS、MMP-2 mRNA表达均显著下降（P〈0.05,P〈0.05）,两蛋白的表达均显著下降（P〈0.01,P〈0.01）。结论：Tan Ⅱ A干预可显著降低AD大鼠颞叶中iNOS、MMP-2 mRNA及蛋白的表达,显著改善AD大鼠的学习记忆能力。其作用机制可能是通过降低Aβ诱导的iNOS及MMP-2的表达,抑制氧化应激损伤来完成。