一种新型的琼脂糖疏水层析介质开发及其在重组乙肝表面抗原（CHOHBsAg）分离纯化中的应用

以粒径均一的国产高交联度快速流琼脂糖为基质,采用活化、交联等步骤合成了针对分离纯化CHOHBsAg的3C间臂的丁基琼脂糖疏水介质,通过控制丁基配基密度提高分离HBsAg的纯化倍数和回收率,获得了纯化倍数约20、HBsAg回收率约80%的介质。评估了合成介质的理化性质,流速为500cm/h时柱压力小于0.06MPa,表明介质具有较高的机械强度和良好的流动性能,介质经过酸、碱、变性剂等处理后化学性质稳定。将介质合成工艺进一步放大到2L介质/批,应用到HBsAg分离纯化的三步层析整和工艺中,结果表明,批量合成的疏水介质,HBsAg回收率与进口介质相当, HBsAg终产品纯度在95%以上,符合国家药典要求。最后考察了介质合成批次间的配基密度的可控性和单批次合成介质的重复使用性,结果表明,合成工艺和介质的重复性能满足产业化要求,这种成本低的介质有望替代目前工业生产广泛使用的进口疏水介质。     

甜菜碱与植物抗旱/盐性研究进展

系统地讨论了甜菜碱在植物体内的代谢特性与甜菜碱合成酶基因工程、甜菜碱生理功能与植物抗旱／盐生理的关系以及外源甜菜碱调控植物抗旱／盐性研究进展,最终实现通过施用外源甜菜碱和利用基因工程技术将合成甜菜碱的代谢途径引入植物,以抵抗由于干旱／盐胁迫对植物造成的伤害,为其农业利用开辟新途径。     

应用RT-PCR技术检测动物组织中的口蹄疫病毒*

通过对影响RT-PER检出率的条件和试剂进行了筛选,确定了提取FMDV RNA的最佳方法和试剂,优选出RT-PCR反应的试剂和最佳反应条件,建立了检测口蹄疫病毒核酸的RT-PER方法。应用所建立的方法检测送检的鲜牛奶、淋巴结、脊髓、牛鼻咽拭子,结果阳性率分别为41.4％(24/58)、13.33％(2/15)、20％(1/5)、37.5％(12/32);检测4个屠宰场送检的组织样品40份,结果阳性率为.10％-70％;检测送检的奶粉(1份)、水泡皮(1份)、老鼠(2份)、患儿口腔棉拭子(4份),阳性率均为     

SZZ—Harpin融合蛋白在苏云金芽孢杆菌中的表达及活性测定

PCR扩增编码SZZ短肽与植物过敏素(harpin)融合蛋白的1．5kb基因片段,克隆到苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)表达载体pHZB1上,并置于晶体蛋白cry1类基因的启动子下游,从而构建表达质粒pHSZH。将表达载体pHSZH电激转化晶体缺陷型的BG—CDB菌株,获得工程菌Bt-pHSZH。SDS-PAGE蛋白分析和生物测定结果显示,培养48h的Bt-pHSZH明显表达SZZ-Harpin融合蛋白,表达产物具有诱导烟草过敏反应和系统性获得抗性的功能。     

基于ISSR方法的芦笋育种亲本间亲缘关系分析

为了解芦笋(Asparagus officinalis L.)育种亲本间的遗传关系,采用ISSR方法对19份芦笋育种亲本进行亲缘关系和遗传多样性分析。结果表明,18条引物共扩增出187条谱带,多态性比率达93.6%。UPGMA聚类分析表明,亲本的相似系数为0.56~0.80,在相似系数0.62处可将亲本分成3大类群,第Ⅰ类群为美国芦笋品种?绿龙?;第Ⅱ类群由荷兰品种?金林?人工培育的部分亲本和美国品种?格兰德?组成;第Ⅲ类群为其余亲本组成。同一品种不同个体间也可能存在较大的遗传距离,芦笋经倍性育种培育出的个体表现出丰富的遗传多样性。这为芦笋杂交育种中的亲本筛选提供了理论依据。     

改良皮下种植法建立大鼠子宫内膜异位症模型

目的:采用改进的皮下种植法建立大鼠子宫内膜异位症的疾病模型,在保证成模的前提下,使皮下种植法建立大鼠子宫内膜异位症模型更加简单易操作,且成模效果更明显,术后易寻找病灶。方法:取性成熟期雌性SD大鼠10只,体重约250±5 g,术前五日连续给予苯甲酸雌二醇注射0.04 mg/每天,然后采用改良的皮下种植法建立大鼠子宫内膜异位症模型,既将大鼠自体双侧子宫切下,取其中一侧子宫种植至皮下血供较丰富处,术后第十日起连续五日给予苯甲酸雌二醇注射,于术后四周可观察腹部皮下病灶。结果:造模四周后见皮下种植的皮肤处有明显的圆形突起,切开皮肤可见种植的一侧子宫完整成活,与周围界限清晰,病灶明显易见,血运丰富。结论:实验结果证明此种方法较文献提供的皮下种植法更为简单易操作,省去了分离子宫内膜与肌层的步骤,且有病灶明显术后易寻找病灶的优点。     

高粱高亲和硝酸盐转运蛋白NRT2/3基因家族鉴定、表达与DNA变异分析

硝态氮是作物吸收无机氮素的主要形态,硝酸盐转运蛋白2(nitrate transporter 2,NRT2)作为高亲和性的转运蛋白,以硝酸盐作为特异性底物,在可利用的硝酸盐受限时,高亲和性转运系统被激活,在硝酸盐吸收、转运过程中发挥着重要作用。大多数NRT2不能单独转运硝酸盐,需在硝酸盐同化相关蛋白2(nitrate assimilation related protein 2,NAR2)的协助下才能完成硝酸盐的吸收或转运。作物氮利用效率受环境条件影响,品种间存在差异,因此培育高氮素利用效率品种有重大意义。高粱(Sorghum bicolor)具有耐贫瘠特性,对土壤中的氮素吸收和利用效率较高。本研究结合高粱基因组数据库对NRT2/3基因家族成员基因结构、染色体定位、理化性质、二级结构与跨膜结构域、信号肽与亚细胞定位、启动子区顺式作用元件、系统进化、单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)的识别与注释及选择压力进行了全面分析。通过生物信息学分析,筛选出5个NRT2s(命名为SbNRT2-1a、2-1b、SbNRT2-2–4)基因和2个NAR2s(SbNRT3-1–2)基因,较谷子略少。分布在3条染色体上,分为4个亚家族,同一亚族中基因结构高度相似;高粱NRT2/3亲水性平均值均为正值,表明均为疏水性蛋白;α-螺旋和无规则卷曲占二级结构总量的比例大于70%;亚细胞定位均在质膜上,其中NRT2s蛋白不含信号肽,NRT3s蛋白含信号肽;进一步对其跨膜结构域进行分析,发现NRT2s家族成员跨膜结构域个数均大于10个,而NRT3s家族成员跨膜结构域个数为2个;高粱与玉米(Zea mays)NRT2/3s的共线性较好;蛋白结构域显示存在MFS_1和NAR2蛋白结构域,可执行高亲和力硝酸盐转运;系统进化树分析可知,高粱与玉米和谷子的NRT2/3基因亲缘关系更近;基因启动子顺式作用元件分析发现,SbNRT2/3基因的启动子区均具有数个植物激素和逆境应答元件,可以响应高粱生长和环境变化;基因表达热图显示低氮条件下在根诱导表达的是SbNRT2-1a、SbNRT2-1b和SbNRT3-1,推测可在高粱根部表达并调控对硝酸盐的吸收或转运过程。在SbNRT2-4和SbNRT2-1a等发现多个非同义SNP变异;选择压力分析表明,高粱NRT2/3基因家族在进化过程中受纯化选择作用。SbNRT2/3基因表达及蚜虫侵染影响与基因在不同组织中的表达分析结果一致,SbNRT2-1b和SbNRT3-1在感染蚜虫品系5-27sug根部表达显著,高粱蚜虫侵染叶片显著降低了SbNRT2-3、SbNRT2-4和SbNRT3-2的表达水平。本研究初步对高粱全基因组NRT2/3基因家族进行鉴定、表达与DNA变异分析,为高粱氮高效研究提供了基础。     

针叶小爪螨的滞育研究

本文研究针叶小爪螨Oligonychus ununguis(Jacobi)滞育卯出现的规律,分析了光照、温度、寄主营养等环境因素与滞育的关系和滞育卵解除的条件。结果表明,针叶小爪螨以滞育卵在枝条上越冬,其产出盛期在8月上、中旬。光周期感应螨态为幼螨至第二若螨的连续两个螨态;其临界光照时间为13h/d。在相同条件下,低温(20℃)促进滞育。长日照下,螨口密度大,寄主营养恶化,亦能促进滞育的形成。滞育卵在0℃下放置1 20天,5℃-10℃下放置100天后解除滞育。     

肺表面活性物质的防御保护功能

肺表面活性物质（ＰＳ）除能降低表面张力外,还具有抗氧化、抗感染、促进肺内异物颗粒的排出,减轻变态反应性及弹性蛋白酶所致的肺损伤等多方面的防御保护功能。ＰＳ是肺内特有的生理性抗损伤因子。