Inhibition of anti-tuberculosis T-lymphocyte function with tumour necrosis factor antagonists

Reactivation of latent Mycobacterium tuberculosis (Mtb) infection is a major complication of anti-tumour necrosis factor (TNF)-alpha treatment, but its mechanism is not fully understood. We evaluated the effect of the TNF antagonists infliximab (Ifx), adalimumab (Ada) and etanercept (Eta) on anti-mycobacterial immune responses in two conditions: with ex vivo studies from patients treated with TNF antagonists and with the in vitro addition of TNF antagonists to cells stimulated with mycobacterial antigens. In both cases, we analysed the response of CD4+ T lymphocytes to purified protein derivative (PPD) and to culture filtrate protein (CFP)-10, an antigen restricted to Mtb. The tests performed were lymphoproliferation and immediate production of interferon (IFN)-gamma. In the 68 patients with inflammatory diseases (rheumatoid arthritis, spondylarthropathy or Crohn's disease), including 31 patients with a previous or latent tuberculosis (TB), 14 weeks of anti-TNF-alpha treatment had no effect on the proliferation of CD4+ T lymphocytes. In contrast, the number of IFN-gamma-releasing CD4+ T lymphocytes decreased for PPD (p < 0.005) and CFP-10 (p < 0.01) in patients with previous TB and for PPD (p < 0.05) in other patients (all vaccinated with Bacille Calmette-Guérin). Treatments with Ifx and with Eta affected IFN-gamma release to a similar extent. In vitro addition of TNF antagonists to CD4+ T lymphocytes stimulated with mycobacterial antigens inhibited their proliferation and their expression of membrane-bound TNF (mTNF). These effects occurred late in cultures, suggesting a direct effect of TNF antagonists on activated mTNF+ CD4+ T lymphocytes, and Ifx and Ada were more efficient than Eta. Therefore, TNF antagonists have a dual action on anti-mycobacterial CD4+ T lymphocytes. Administered in vivo, they decrease the frequency of the subpopulation of memory CD4+ T lymphocytes rapidly releasing IFN-gamma upon challenge with mycobacterial antigens. Added in vitro, they inhibit the activation of CD4+ T lymphocytes by mycobacterial antigens. Such a dual effect may explain the increased incidence of TB in patients treated with TNF antagonists as well as possible differences between TNF antagonists for the incidence and the clinical presentation of TB reactivation.     

蓟马采集和玻片标本的制作

介绍蓟马标本的采集方法、常规鉴定用的临时性玻片和存档及分类用的永久性玻片标本的制作方法。标本的采集主要是拍打植物花朵、叶片及枯枝,玻片的制作重点介绍了制作存档和分类用的永久性玻片的5个步骤,即浸解脱色、洗涤、脱水、整姿封盖和干燥。     

抗TNF-α单链抗体噬菌体展示文库的建立和鉴定

应用噬菌体展示技术构建抗肿瘤坏死因子α(tumornecrosis factor α,TNF-α)单链抗体(single chain Fv,scFv)文库,从中筛选抗TNF-αscFv并进行鉴定.利用重组人TNF-α(rhTNF-α)免疫小鼠,分别扩增小鼠VH和VL基因,经重叠延伸反应将VH和VL基因拼接成scFv基因,以SfiⅠ/NotⅠ位点定向插入pCANTAB 5E噬菌粒载体,转化E.coli TG1,构建了库容为4.6×108的抗TNF-α单链抗体库.对抗体库进行3轮富集筛选后,ELISA检测阳性克隆的抗原特异性,取1株阳性克隆进行测序分析.结果表明,抗TNF-αscFv基因序列长774bp,编码258个氨基酸.将此阳性克隆转化E.coliHB2151,IPTG诱导可溶性scFv的表达,经SDS-PAGE和Western印迹分析,scFv的分子量约为28kD.经亲和纯化后的scFv可与rhTNF-α结合,并可中和由rhTNF-α引起的L929细胞毒性.本文利用噬菌体抗体库筛选到了高亲和力的抗TNF-αscFv,为研制临床免疫治疗的新型抗体奠定了实验基础.     

采用TEV酶法进行整合膜蛋白拓扑学分析

为了研究膜蛋白的跨膜结构,进行拓扑学分析是十分重要的.有许多分析膜蛋白拓扑结构的方法,本文采用烟草蚀斑病毒（TEV）酶特异性切割测试蛋白中跨膜片段的前段或后端所插入的tev识别序列EXXYXQ(S/G),如果TEV酶能够切割,表明该序列位于目标蛋白的细胞 质外.将Tev识别序列ENLYFQG 分别插入到拟南芥整合膜蛋白的的跨膜区域,然后转化进入酿酒酵母中. 消解酶(zymolyase)酶破除酵母的细胞壁后,TEV酶消化球状体,最后通过Western免疫印迹法来分析结果.有关该方法的注意事项在结果中进行了讨论.     

激活类法尼醇X核内受体（FXR）可下调载脂蛋白M在HepG2细胞中的表达

类法尼醇X核内受体（farnesoid X receptor, FXR）和载脂蛋白M(ApoM)在动脉粥样硬化中发挥重要作用．为研究FXR激动剂鹅脱氧胆酸(chenodexycholic acid, CDCA)和拮抗剂Guggulsterones在人肝癌细胞株HepG2和人胎肝细胞株L02中对载脂蛋白M(apolipoprotein M, ApoM)表达的影响．本研究应用逆转录 聚合酶链反应（RT PCR）法和Western印迹法检测CDCA和CDCA加Guggulsterones处理后HepG2和L02细胞中ApoM的mRNA水平和HepG2细胞中ApoM的蛋白水平．实验结果显示：FXR天然配体CDCA以剂量依赖的方式显著降低HepG2细胞中ApoM分子（mRNA和蛋白水平）的表达,L02细胞中ApoM分子mRNA水平的表达;FXR抑制剂Guggulsterones不仅能明显阻止CDCA对ApoM表达的下调,而且可引起ApoM表达显著增加．本研究提示,FXR抑制剂Guggulsterones在抗动脉粥样硬化过程中可能发挥重要作用．     

丙型肝炎病毒Core与NS3基因的不同融合方式及其表达

丙型肝炎病毒(简称HCV)是危害人类健康的传染性疾病,预防该病的传播主要借助于HCV血清学诊断来筛选献血员和检测临床标本.从国内外已分离到的HCV株得知,HCV核心蛋白(Core)和非结构蛋白NS3含有较强的优势抗原表位,其相应的抗体出现早,阳性率高,已成为目前第二、第三代HCV免疫诊断试剂的重要成份[1,2].通常Core蛋白和NS3蛋白分别用基因工程方法表达,然后作为固定化抗原,检测人体内HCV的抗体.我们对Core和NS3的两种不同组合方式及其表达的研究,对于发展新的HCV诊断试剂很有帮助,现将结果报道如下.     

春小麦早期叶片营养诊断的研究

1.各不同层次叶片都具有其独特的生理机能,并且是穗不同发育阶段之物质来源。叶片内物质消长的动态与产量结构变化有直接关系。2.不同时期功能最强之叶片(上数1—2展开叶)的全氮百分含量和绝对含量与产量和产量结构之间呈正相关。3.叶片对于环境氮素营养的变化很敏感。即随土壤氮素含量提高,各叶片干重,全氮绝对量也相应提高,最终产量和产量构成因素也相应提高。4.根据两年盆栽和田间试验,初步认为,分蘖期功能叶内含氮量只有达到5—6%范围时,才能为小麦植株丰产奠定物质基础。5.根据以上结果,我们认为,利用早期叶片诊断方法预测植株营养是有研究前途的。为此今后需要进一步明确不同品种春小麦不同时期功能叶片的位置,以及与产量有关的这些叶片的“临界营养水平”究竟是怎样的。     

HER

在48只麻醉家兔, 应用记录肾传入神经多单位和单位放电方法, 观察了肾动脉内注射缓激肽(bradykinin, BK, 5.0 g/kg)对肾传入神经活动(ARNA) 的影响。 结果表明 (1)肾动脉内应用BK引起ARNA双相激活。 ARNA 激活的初发相在肾动脉注射 BK 后迅速出现, 延迟相则见于注射后7 min左右, 且延迟相的激活作用大于初发相。 (2)静脉内预先注射前列环素合成阻断剂Indomethacin (Indo, 5.0mg/kg), 可部分阻断BK引起的ARNA延迟相的激活, 对初发相的激活并无影响; (3)静脉内预先注射NO合酶抑制剂 L-NAME (30.0 mg/kg), 可完全阻断BK引起的ARNA延迟相的激活, 而对初发相仅有部分阻断作用。 本实验提示 肾内应用缓激肽所致ARNA初发相的激活, 可归因于BK的直接作用及其所诱发NO的释放, 延迟相的激活主要在于BK引起前列环素和NO释放的结果。