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目的构建大鼠GluR2基因启动子控制的萤火虫荧光素酶表达载体,并检测其在神经元中的表达。方法采用PCR方法获得GluR2基因启动子区目的片段(-298~+283),双酶切后插入到pGL3-Basic载体中构成重组表达载体,使萤火虫荧光素酶报告基因的表达受GluR2启动子控制。将构建的重组表达载体或pGL3-Basic载体分别与内参质粒pRL—CMV(表达海肾荧光素酶)共转染原代培养皮质神经元,24h后用双荧光检测试剂盒测定萤火虫荧光素酶及海肾荧光素酶活性。结果重组表达载体经双酶切及测序鉴定证明构建正确,该重组表达载体在神经元中特异性高表达萤火虫荧光素酶。结论成功构建大鼠GluR2基因启动子控制的萤火虫荧光素酶表达载体,并检测到该载体在神经元中的特异性表达。 相似文献
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发育阶段M-CAT结合因子的组织分布及表达动力学 总被引:2,自引:0,他引:2
采用胶阻滞和DNA-蛋白质印迹技术分析了鸡胚和雏鸡发育不同阶段骨骼肌、心肌、胗、肝和脑组织核抽提物中M-CAT结合因子(MCBF)与含CATTCCT、CATTGCT核心序列的寡核苷酸的相互作用.胶阻滞实验结果表明,被检的五种组织均有MCBF结合活性存在,但结合模样不完全相同;两寡核苷酸探针与同一骨骼肌核抽提物结合模样也不相同.采用两寡核苷酸为探针对五种组织核抽提物进行DNA-蛋白质印迹分析均检出一分子质量约30 ku 核因子,提示30 ku核因子是存在于五种组织中的普遍因子,该因子可直接或以同二/多聚体结合CATTCCT、CATTGCT序列,属MCBF结合活性的基本组成成分.除普遍因子外,胶阻滞分析结果不排除各组织存在的特异因子通过蛋白质-蛋白质相互作用、与30 ku因子形成杂聚体结合DNA的可能性.骨骼肌组织30 ku因子在胚胎发育18天前表达,出生后消失. 相似文献
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真核转录因子TFⅡD研究进展 总被引:1,自引:1,他引:0
结合转录因子 TFⅡD 结构与功能,论述了 RNA 聚合酶Ⅱ是如何从一个特异基因的转录起始点起动转录的.转录因子 TFⅡD 是一种序列特异的 DNA 结合蛋白因子,它首先与含 TATA 的启动子形成前起始复合物,后者指导 RNA 聚合酶Ⅱ和其它基本转录因子最终组装成转录起始复合物.很多转录激活因子均通过与 TFⅡD 相互作用,控制转录起始复合物的组装或影响其稳定性,调节基因转录.因此,TFⅡD是一种极其重要的基本转录因子. 相似文献
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POU蛋白调节中枢神经系统发育 总被引:1,自引:0,他引:1
POU蛋白是一组DNA特异的转录调节因子,属同源异形序列超家族.发育过程中,POU蛋白编码基因在中枢神经系统各部位的时空性表达决定神经细胞的发育与分化. 相似文献
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原代培养鸡胚肌细胞瞬时转染结合氯霉素乙酰基转移酶水平测试表明:鸡AChRγ-亚基基因缺失近起始点一对E盒(CANNTG)的-204/-50片段与含E盒的-204/+36片段一样,均可独立激活tk启动子的转录活性,证明了该片段的增强子样作用,利用鸡胚肌肉核抽提物与-204/-50片段进行胶阻滞分析,检出了明显的迁移位移条带的发生;迁移条带不仅可被未标记的-204/-50片段消除,而且还可被含M-CAT盒(CATTCCT)的23bp寡核苷酸竞争阻断,说明胶阻滞分析中出现的迁移条带系由核内因子特异结合-204/-50片段中的M-CAT序列所致,上述结果证明,M-CAT盒对鸡AChRγ-亚基基因-204/-50片段的转录激活功能起作用。 相似文献
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鸡骨骼肌发育过程生肌素的表达 总被引:1,自引:1,他引:0
MyoD家族生肌因子MyoD、生肌素(myogenin)、myf-5和myf-6/herculin对脊椎动物肌细胞分化和骨骼肌系统的发育成熟具有重要意义,其中生肌素的作用尤为突出,是肌细胞终末分化的关键因素。采用Northern和Western印迹技术检测鸡胚骨骼肌发育过程中生肌素在转录水平的表达动力学,发现在胚胎发育第9d已有鸡肢体骨骼肌生肌素mRNA表达,第13d达到高峰,第15d开始下降,第18d至出生后两周几无可检测的mRNA;而生肌素蛋白则在胚胎发育第13d方可被检测到,第15~18d达到高峰,至出生后两周仍维持在一定水平,表明生肌素的表达存在翻译和翻译后水平的调控。利用鸡生肌素基因上游-223/+40调控片段为探针对发育不同时期的鸡肌肉组织细胞核抽提物进行Southwestern印迹分析。发现一种约35kD的核内蛋白与探针有较强结合,结合活性第9d时出现,至第18d达到峰值,出生后两周时降至难检测水平;另外有一种约11kD的核内蛋白的DNA结合活性恰好在转录活性下降的第15~18d发生,按此情况两种核因子可能对生肌素的转录激活分别起正负调控作用。 相似文献
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鸡胚骨骼肌组织M-CAT结合因子的初步鉴定 总被引:2,自引:0,他引:2
采用偶联CATTGCT寡核苷酸的DNA亲和层析柱从发育13d鸡胚骨骼肌核抽提物中分离到两种核蛋白.SDS-PAGE结果表明,被DNA亲和柱滞留的两种核蛋白分子量分别为30kD和32kD.凝胶阻滞结合竞争分析显示,纯化的核蛋白可与M-CAT共有序列CATTCCT特异结合.Southwestern印迹技术确定仅30kD分子可直接识别、结合CATTCCT元件,但32kD分子却不能.结果提示,30kD分子为依赖DNA的M-CAT结合因子,32kD分子属性有待进一步研究证实 相似文献
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人类基因数超过14万 总被引:2,自引:0,他引:2
最初估计 ,人类基因组约含 6万个基因 ,近几年流行的估计数是 1 0万个左右 ,究竟多少 ?据今年 9月 2 3日出版的《自然》报道[1] ,最新估计逾 1 4万。在 9月 2 0日美国迈阿密举行的年度DNA序列学术会议上 ,生物技术公司─Incyte制药董事长兼首席科学官Ran dallScott提出 :人类基因组含有 1 42 6 34个基因。这一数据与美国政府首席科学顾问NealLane、英国政府首席科学顾问RobertMay受政府委托所透露的消息一致。为什么对人类基因组基因数量的估计会有如此变化 ?Incyte制药公司作出最新数据估计的… 相似文献
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为研究生肌素在染色质重建过程中的作用 ,采用生肌素真核表达载体转染C2C12肌细胞 ,细胞核经微球菌核酸酶消化后 ,提取DNA进行SDS PAGE分析 .生肌素转染的细胞 ,其核小体 (染色质 )在Mg2 + 溶液中的溶解性明显增加 ,提示染色质组蛋白乙酰化程度提高 .组蛋白经TAU SDS(2 D)双相凝胶电泳分析 ,发现在转染生肌素真核表达载体 2 4h后 ,组蛋白H4的乙酰化修饰程度最高 .采用抗乙酰化组蛋白H3和H4抗体进行的Western印迹分析进一步证明了乙酰化的发生 .上述变化与染色质的活跃程度相关 .RT PCR结果显示 ,生肌素的靶基因烟碱样乙酰胆碱受体 (nAChR)α亚基和肌酸激酶 (MCK)基因在转染后表达水平提高 .结果提示 ,强制性表达外源性生肌素可引起肌细胞核染色质重建 ,进而激活靶基因 相似文献
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21号染色体是人类染色体中最小的常染色体,由日本等13个国家的研究单位组成的国际基因组已完成了21号染色体的DNA序列分析,其99.7%的序列已被测定。21号染色体长臂(21q)DNA,由33546361bp组成,其中只剩下3个小的克隆裂隙和7个序列裂隙(约100kb)尚未确定,在21q,q的近着丝粒处有21q远,近区域存在很多重复序列。21号染色体有39个断裂点,原因是由于21号染色体与其他染色体发生相互易位、21号染色体内重排或受到辐射所致。人类21号染色体上的特异基因与小鼠16、17及10号染色体上的某些基因互为同质异构基因,显示了基因组在进化过程中的变异性和保守性,21号染色体基因密度较小,含有127个已知基因,98个预报基因和59个假基因,21号染色体与Down′s综合征,某些单基因遗传紊乱,某些复杂疾病(双相情感障碍、家族性复合高血脂症)、实体瘤及白血病的发生有关。 相似文献