用于重组蛋白药物生产的CHO细胞无血清培养基的研究进展

哺乳动物表达系统因其具有类似于人源化细胞的翻译后修饰方式,已经成为重组蛋白药物生产的主要表达系统.中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary, CHO)细胞是生产重组蛋白的理想哺乳动物细胞宿主,目前近70％批准上市的重组蛋白药物是由CHO细胞生产的.常规细胞培养所用的培养基需要补充血清才能正常生长,但血清...     

转GAFP基因棉花生态适合度及其对棉田昆虫群落的影响

新型转基因棉花生态适合度及其对棉田昆虫群落的影响是转基因棉花环境安全评价的重点内容.本文选用新型转GAFP(Gastrodia anti-fungal protein)基因棉花及其非转基因亲本棉花为试验材料,于2013和2014年在河南安阳研究了田间棉花生态适合度及其对昆虫群落的影响.结果表明: 转基因棉蕾期、花铃期和铃期叶片干物质量与其亲本无显著差异;苗期比叶面积显著低于亲本,蕾期、花铃期和铃期叶面积显著大于亲本;苗期株高显著低于亲本,蕾期、花铃期和铃期株高与亲本无显著差异;棉花生长的4个关键时期(苗期、蕾期、花铃期和铃期),转基因棉单株果枝数、蕾数和脱落数均与亲本无显著差异,而铃期单株大铃数显著低于亲本.棉铃虫发生的3个高峰期,转基因棉对棉铃虫和甜菜夜蛾无明显控制作用,且对棉田昆虫群落、害虫亚群落和天敌亚群落的昆虫个体总数、昆虫群落结构与组成、均匀性指数、多样性指数和优势集中性指数均无显著影响.表明外源基因GAFP导入后,新型转基因棉花营养生长增强,产量构成性状整体无显著变化,未引起棉田昆虫群落变化.研究初步明确了新型转基因棉花生存竞争势态和棉田昆虫群落发生规律与动态,可为新型转基因棉花环境安全评价提供理论依据,同时为转基因棉花环境安全评价积累科学数据.     

伪狂犬病病毒湖北株糖蛋白gD基因的克隆及序列测定

According to the sequence of gD gene of PRV Rice strain, the primers of 22bp were designed.Using PRV genomic DNA of Hubei and Shuangcheng virus strains which infected BHK 21 cell separately as template, the gD gene of PRV was amplified sucessfully by PCR and cloned into pGEM T vector. Restriction enzyme analysis showed that the cloned gD gene at SmaⅠ,SalⅠ,KpnⅠ,PvuⅡ sites was the same as that of PRV Rice strain. The gD gene consisted of 1,263 nucleotides including an open reading frame spanning 1,197 nucleotieds which could encode a protein of 398 amino acids. The ORF didn′t include an amino acid sequence directing N linked glycosylation (NXT or NXS). Comparison of our complete Hubei strain gD gene sequence with the Rice strain gD gene sequence showed that the nucleotide and deduced amino acid homology were about 97% and there was an 12 basepair deletion in 835 846 nucleotide sites that coded Arg Pro Arg Pro. A region of the amino acid sequence and the positions of the cysteine residues of PRV HB gD were homologous to HSV I glycoprotein D. This work laid foundation for PRV gene immunization and studying PRV sub unit vaccine.     

青海发现极北朱顶雀和白腰朱顶雀

<正>2013年9月,在青海省大通县庙沟乡落叶松林内(36°54′N,101°38′E,海拔2 702 m)观察到一群额红色,嘴黄色短尖,翅羽尽黑,胸部粉红色,腰几乎为白色的雀形目鸟类。经鉴定为极北朱顶雀(Carduelis hornemanni)。2014年3月,在青海省海东市平安县沙沟人工小型林场(36°20′N,102°02′E,海拔2 980 m)观察到十几只头顶红色,眉纹黄白色,嘴短尖,胸腹部多黄白相间纵纹,翅上有白色横斑的雀形目鸟类。经鉴定为白腰朱顶     

神经珠蛋白研究进展

神经珠蛋白(Neuroglobin,Ngb)是最近由德国科学家发现的一种新的珠蛋白类型。目前,已从人、小鼠和鱼类的组织中获得了基因序列。研究发现,人神经珠蛋白(hNgb)的mRNA序列全长7727bp,含11个重复序列,4个外显子和3个内含子,编码151个氨基酸。与鼠神经珠蛋白(mNgb)相比核苷酸同源性为94％。鱼的神经珠蛋白(fNgb)编码159个氨基酸,分子量约为16kD。Ngb具有高氧亲和性和可逆性结合氧的功能。并能协助氧气通过血脑屏障,在神经细胞代谢中增加氧的运输、储存和供应。对其进一步研究将为生物医学和生命科学提供新的思路,也将开辟一个全新的市场。     

乙基多杀菌素抗性小菜蛾代谢解毒酶酶活性研究

【目的】阐明小菜蛾Plutella xylostella(L.)对乙基多杀菌素的代谢抗性机理,为延缓小菜蛾对乙基多杀菌素抗药性发展及抗性治理技术提供支持。【方法】通过酶动力学方法测定了小菜蛾对乙基多杀菌素高抗、中抗和敏感种群的谷胱甘肽-S-转移酶、羧酸酯酶、乙酰胆碱酯酶和多功能氧化酶4种代谢解毒酶的比活力。【结果】乙基多杀菌素高抗小菜蛾种群的谷胱甘肽-S-转移酶、羧酸酯酶、乙酰胆碱酯酶的比活力分别为15.38、3.15和7.30 OD·min~(-1)·mg~(-1)pro,显著高于敏感种群;但乙酰胆碱酯酶在中抗种群和敏感种群中比活力差异不显著;多功能氧化酶在高抗、中抗和敏感种群中的比活力分别为4.97、4.08和4.23 OD·min~(-1)·mg~(-1)pro,差异不显著。【结论】谷胱甘肽-S-转移酶、羧酸酯酶和乙酰胆碱酯酶的酶活随着小菜蛾对乙基多杀菌素抗性的增强而增强,而多功能氧化酶的酶活在抗性种群与敏感种群间差异不显著,因此小菜蛾对乙基多杀菌素的代谢抗性机理研究应重点关注这3种酶。     

水环境中病毒吸附及存活规律的研究

我们从自然环境的污泥中检测出了病毒,并发现其含量比覆盖水中的病毒含量高得多。在实验室条件下,我们用Poliovirus Ⅰ模拟自然环境,对病毒在水和淤泥中的分布、存活等进行了研究,结果表明淤泥对水环境中的病毒具有很强的吸附能力。相对水而言,淤泥对病毒具有较好的保护。     

不同临床类型乙型病毒感染者外周血T 细胞亚群与血清HBV DNA 载量 及HBeAg 滴度相关性分析

目的:探讨慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染患者外周血T细胞亚群与血清HBV DNA载量及HbeAg滴度的关系。方法:选取103名HBV感染患者和20名健康者为研究对象。流式细胞术检测外周血T细胞亚群,聚合酶链式反应及酶免疫分析法分别检测血清HBV DNA载量及HbeAg滴度。结果:慢性乙型肝炎患者和慢性HBV携带者外周血CD3+T、CD4+T淋巴细胞亚群百分数低于健康对照组,结果有统计学意义(P<0.05或0.01;而CD8+T细胞亚群则呈现相反趋势,结果亦有统计学意义(P<0.05或0.01)。HBeAg阴性组中,HBVDNA水平与CD8+T细胞亚群百分数呈正相关(r=0.567,P<0.01),与CD4+/CD8+T细胞亚群百分数比值呈负相关(r=-0.601,P<0.01),而与CD3+T、CD4+T细胞亚群百分数无相关性。HBeAg阳性组中,HBV DNA水平及HbeAg滴度与CD3+T、CD4+T、CD8+T细胞百分数及CD4+/CD8+T细胞百分数均无相关性(P>0.05)。结论:不同临床类型的慢性乙型肝炎病毒感染患者外周血T细胞亚群存在不同程度细胞免疫功能降低和细胞免疫调节异常。HbeAg阴性的HBV感染患者,其血清HBV DNA水平与外周血T淋巴细胞免疫存在相关性。     

盐碱土壤转Bt基因棉花外源蛋白表达量时空变化及对抗虫性的影响

盐碱地是潜在的可利用耕地资源,但土壤盐碱化严重制约了农业生产的可持续发展。基于棉花机械化程度低、劳动力成本和生产资料投入剧增、比较效益下降和实施粮食生产安全战略等因素影响,我国长江流域和黄河流域棉花面积锐减,种植区域向内陆盐碱旱地或滨海盐碱地转移,但目前针对盐碱地转Bt基因棉种植可能带来的生态安全性问题研究甚少,正成为国内外研究的焦点和热点。伴随着棉花向盐碱地大面积转移种植趋势,检测盐胁迫是否影响转基因抗虫棉抗虫性,明确其影响程度,直接关系到转基因抗虫棉种植的安全性,也是目前抗虫棉扩大生产中迫切需要解决的问题。以非转基因棉花为对照,分别在低盐、中盐和高盐土壤种植的棉花的苗期、蕾期和花铃期采样,室内测定了转Bt基因棉花叶片对棉铃虫幼虫校正死亡率和外源蛋白表达量。研究结果发现盐分胁迫下转Bt基因棉花苗期叶片对棉铃虫幼虫校正死亡率下降了9.22%—47.46%,蕾期下降了31.61%—45.42%,花铃期下降了3.59%—18.52%;土壤盐分显著降低了转Bt基因棉花叶片中外源蛋白的表达量,苗期功能叶外源蛋白表达量下降了7.66%—29.86%;蕾期下降了3.77%—36.85%;花铃期下降了18.13%—41.02%;相关性分析表明,盐分胁迫条件下转Bt基因棉花叶片中外源蛋白表达量与其对棉铃虫抗性程度存在正相关关系。结果表明,盐碱土壤显著降低了转Bt基因棉花叶片外源杀虫蛋白表达量,从而导致转Bt基因棉花叶片对棉铃虫的抗虫性下降。研究土壤盐分对转Bt基因棉花对棉铃虫的影响及其作用机制,可为建立盐碱地转Bt基因棉花田害虫综合防控技术体系、转Bt基因棉花环境安全评价及转Bt基因棉安全管理提供依据。     

环境条件对南方大斑蝥成虫取食行为的影响

南方大斑蝥的主要药效成分斑蝥素及其衍生物对肝癌、食道癌等20余种癌症有显著疗效,但斑蝥素不能大规模人工合成,仅依赖于产斑蝥素的昆虫。南方大斑蝥是斑蝥素的重要来源,其野生资源已不能满足市场需求,人工养殖是解决南方大斑蝥资源紧缺的必然选择,而取食是人工养殖中影响其生长繁殖的重要因子之一。本研究在恒温培养箱内对南方大斑蝥成虫的最大取食量、觅食规律、光照、最佳觅食的温度和食物含水量等方面进行了研究,明确了南方大斑蝥成虫的取食条件和规律,为南方大斑蝥成虫的人工养殖提供技术参考。结果显示,南方大斑蝥成虫每天连续取食时,日平均取食量为身体重量的0. 797±0. 062倍,而饥饿24 h后的日平均取食量为体重的1. 712±0. 110倍,两者间取食量差异显著(P 0. 05)。根据其取食日变化规律,上午7∶00为南方大斑蝥成虫的取食高峰期,在不需觅食的基础上有无光照对平均取食量无显著的影响(P 0. 05)。当温度为30℃-33℃、食物含水量40%-60%时南方大斑蝥成虫的平均取食量最大,呈显著水平(P 0. 05)。根据研究结果可知,在南方大斑蝥成虫的人工养殖中,应于每天的上午7∶00前投放食物,食物量为成虫重量的0. 8倍左右,食物含水量控制在40%-60%,环境温度30℃-33℃。