蜂毒素自聚集过程中间态的荧光光谱研究

应用荧光光谱及其一阶导数谱对蜂毒素在ＮａＣｌ诱导下的自聚集进行了研究,伴随蜂毒素自聚集的发生其内源荧光发射峰的峰宽在过渡点附近出现展宽并呈现出极大值,用二态转换模型可以对荧光发射谱进行较好的拟合,提示蜂毒由单体向四聚体的转化过程中不存在稳定的中间态。     

脱辅基细胞色素c定向于线粒体的转运特异性研究

用分离纯化的完整线粒体和部分细胞器组分,初步研究了脱辅基细胞色素c在细胞内转运的特异性。完整线粒体用差速离心和密度梯度离心的方法,从幼龄鸡心肌组织中获得,对胞内几种细胞器标志酶比活力的测量表明,纯化的线粒体单胺氧化酶活力提高25.6倍,腺苷酸激酶活力提高3.59倍,细胞色素c氧化酶活力提高5.48倍,外膜完整性达90%以上,呼吸控制率大于20。以上数据表明该纯化的线粒体受胞内其它囊泡成分污染少,外膜完整并具有较高的氧化磷酸化偶联效率;在纯化线粒体的同时,得到另两种细胞器组分-内质网和溶酶体囊泡。体外转录翻译的apo.c与上述几个组分的结合实验表明,完整线粒体与apo.c的结合能力明显高于其它组分。     

Translocation of chicken heart apocytochrome c and its mutants (C17S, H18D) across mitochondrial membrane

Cytochrome c is a component of mitochondrial respiratory chain, located at the outer side of mitochondrial inner membrane. Its precursor, apocytochrome c, is encoded by a nuclear gene, synthesized on cytoplasmic ribosomes, and posttranslationally imported into mitochondria, but apocytochrome c is unique in the translocation compared with most mitochondrial proteins. It does not carry a cleavable amino terminal targeting sequence; no proteinous receptor on the mitochondrial outer membrane is identified for its import and its translocation does not compete with other preproteins for translocation machinery in the outer membrane. Besides, neither ATP nor membrane potential is required for its translocation across mitochonctria.     

Jagged1/notch1在宫腔粘连患者子宫内膜中表达上调

Notch通路是与细胞增殖、分化、凋亡等密切相关的通路,其相关蛋白表达异常参与多种疾病的发生,但其在宫腔粘连中的作用尚不清楚.为探讨jagged1/notch1在宫腔粘连（IUAs）发病中的作用,本实验选择经宫腔镜诊断为宫腔粘连患者40例为IUAs组,非宫腔粘连患者25例为对照组,宫腔镜直视下取子宫内膜组织,采用实时荧光定量PCR法检测jagged1、notch1 mRNA表达,发现IUAs组jagged1、notch1的表达显著高于对照组.免疫荧光染色、免疫组织化学和Western印迹技术检测jagged1、notch1蛋白表达. 结果显示,与对照组相比,IUAs组jagged1、notch1蛋白表达水平均明显升高.以上结果表明, Notch通路相关因子jagged1、notch1的高表达可能与宫腔粘连的发生发展有关.     

镁、钙离子对组装于人工膜上CF_0-CF_1质子传导的影响

在电压籍位下,研究Mg2 、Ca2 对重组于平板脂双层上CF0－CF1质子传导的影响,表明：（1）跨膜质子梯度为0时（△pH=0）,在30～150mV范围内,Ca2 引起的正电流比在无金属离子溶液中有一定幅度的增加。在50mV以上,Mg2 比Ca2 有更大的促进正向电流的作用;（2）当△pH=3时,Mg2 比Ca2 更有显著增加正向膜电流的作用,电压在0mV时就已显示出来;（3）Ca2 不影响Mg2 促进正向电流的作用;（4）当△pH=3时,Ca2 ”溶液中DTT促进正向电流的作用要在30mV以上才能显示,并随电位的增加而增大。而Mg2 溶液中,△pH=3,电压为0mV时DTT促进正向电流的作用就能显示出来,且在0至150mV范围内促进的幅度是恒定的。这就说明Mg2 不仅具有调节CF0－CF1质子传导的作用,而且也有助于膜结合CF0-CF1的变构,引起埋于CF0-CF1内部的γ亚单位二硫键暴露出来,促使二硫键为DTT还原,从而增加质子传导量。当CA2 、Mg2 存时,Ca2 不影响Mg2 的作用效应,它仅因其静电屏蔽效应稳定H ．-ATP酶的构象,从而促进对质子的传导。     

龙葵叶绿体ATP合酶α-亚单位基因的克隆

本研究以菠菜叶绿体DNA 2.45kb的SalI片段(含有ATP合酶α-亚单位基因)为探针,从龙英叶绿体DNA BamHI片段文库中筛选出含龙葵叶绿体atpA基因的克隆。通过Southrcn吸印与探针杂交,证明了重组质粒pSB 132的插入片段含有atpA基因。同时将atpA基因定位在龙葵叶绿体DNA SalI、BglI、XhoI和BamHI 4种酶切图谱的限制性片段上。     

红曲色素β-环糊精包合物稳定性的初步研究

紫红曲霉经液体发酵可获得红曲色素 ,通过离心、过滤、乙醇浸提获得的发酵液中色素浓度为 0 .0 1 7g/mL。但其对光照、pH值、温度等不稳定限制了其用途。将 β 环糊精与所得色素包合 ,通过紫外扫描来初步表征包合物 ;并将包合物与游离色素放置在不同光照、pH值、温度条件下来比较各自的色泽保存率 ;结果表明 ,包合物与红曲色素相比 ,稳定性有一定程度的增强。     

表达β-半乳糖苷酶的gal B16肿瘤模型的建立及其在肿瘤DNA疫苗研究中的应用

本文工作的目的是建立以β-半乳糖苷酶为标志性抗原的小鼠黑色素瘤模型,并进行肿瘤免疫的研究.我们首先在pcDNA3质粒中引入一个β-半乳糖苷酶编码基因从而建立转染质粒p3gal.p3gal转染小鼠黑色素瘤细胞B16后,再通过G418筛选及X-Gal细胞染色得到表达β-半乳糖苷酶的galB16细胞株.接着用该细胞株成功地在C57小鼠上建立了表达β-半乳糖苷酶的galB16肿瘤模型.并在此模型上观察了β-半乳糖苷酶编码基因作为DNA疫苗抑制galB16肿瘤生长的作用.     

绿脓杆菌新血清型菌株

在进行绿脓杆菌血清型的研究中,分离到一株与绿脓杆菌11个分型血清不发生交叉凝集的绿脓杆菌菌株。通过鉴定证明是一株新血清型菌株。现报道如下。     

贵州半夏块茎腐烂病拮抗细菌的筛选与鉴定

【目的】从半夏根际土壤筛选对半夏块茎腐烂病致病菌有拮抗活性的细菌并进行鉴定。【方法】采用稀释分离法和平板对峙法分离拮抗菌,然后根据菌落形态、生理生化特性,结合分子生物学方法进行鉴定。【结果】从半夏根际土壤共分离到228株细菌,其中菌株GZDF2、GZDF3、GZDF4对病原细菌及病原真菌均有拮抗活性,抑菌圈大小达23 mm,并且抑菌谱广。经形态学观察、生理生化特性分析和分子生物学方法,将菌株GZDF2、GZDF3、GZDF4鉴定为短短芽胞杆菌(Brevibacillus brevis)。进一步采用gyr B和rpo B基因对3株短短芽胞杆菌进行聚类分析,结果显示GZDF3菌株与其他2株短短芽胞杆菌存在遗传差异。【结论】半夏根际土壤中分离到的3株短短芽胞杆菌抑菌活性强、抑菌谱广,具有开发成生防剂的潜力。