改善稀有密码子和氨基酸残基限制提高重组人ADAM15去整合素结构域蛋白表达水平

[目的]为提高重组人ADAM(A Disintegrin And Metalloproteinase)15去整合素结构域蛋白(rhADAMl5)的表达水平.[方法]在详尽分析rhADAM15的cDNA和GST(谷胱甘肽-S-转移酶).ADAM15结构的基础上,选择表达宿主菌并对表达质粒进行改造.[结果](1)选择能为大肠杆菌稀有密码子提供额外tRNA的Escherichia coli.Rosetta(DE3)作为宿主菌,将质粒pGEX-ADAM15转化于其中在最佳诱导表达条件下获得298 mg/L融合蛋白GST-ADAM15;(2)采用PCR体外定点突变技术将目标蛋白编码区稀有密码子GGA(Gly<'425)替换为GGC,使融合蛋白表达水平提高9.4%;(3)通过消除凝血酶识别序列附近的Pro-Glu-Phe残基,提高凝血酶酶切效率,使rhADAM15产量提高了35.7%;(4)在GGA替换为GGC基础上切除"Pro-Glu-Phe"残基,使rhADAM15产量提高到68 mg/L,比分别切除"Pro-Glu-Phe"残基、GGA替换为GGC和野生型提高了19.2%、51.1%和61.9%.[结论]这一结果表明,在充分认识目标蛋白特性的基础上定向选择表达宿主并改造表达质粒能实现外源蛋白高水平表达.     

人皮肤菌群分离株与成纤维细胞培养

为研究微生物群(微种群)与宿主的关系,我们在人成纤维细胞的培养物中,定量的加入从皮肤上分离的常住菌和其它菌株的纯培养物进行混合培养,设立不加菌液的对照组,发现加入疮疤丙酸杆菌(A_(14-1)、表皮葡萄球菌(F_(65))等常住菌,以及从皮肤上分离的干酪乳杆菌(ad_3株)、青春双歧杆菌(Bf_1),有促进人成纤维细胞生长,延缓其老化等作用。而加入从临床标本中分离的脆弱美杆菌(A104株)及金黄色葡萄球菌(189株),则出现培养的人成纤维细胞脱核、裂解和死亡等毒害作用。我们的实验表明:皮肤正常菌群对宿主的皮肤有生理性的滋助作用。     

番茄Tm-22基因在烟草中的表达及其对番茄花叶病毒(ToMV)的特异抗性

Tm-2^2基因在烟草上的转化和表达表明,Tm-2^2基因在同科不同属植物体上的功能没有改变。在两种类型的纯合转化体上,Tm-2^2基因编码蛋白能够抗Tobamovirus属5种不同的毒株,并能被ToMV-2a毒株感染而失去抗病性。这个结果表明：移动蛋白上的氨基酸变异能够影响R蛋白对ToMV的应答反应。Tm-2^2基因转化体在不同启动子的调控下,对ToMV-2a毒株感染所表现的症状不同,说明启动子在Tm-2^2基因的抗病反应中具有非常重要的作用。     

茶叶多糖的糖醛酸含量测定及抗氧化活性研究

采用高效液相色谱法对三个产地茶叶多糖的糖醛酸含量进行了测定,该方法具有操作简便、样品无需预处理等特点,稳定性、重现性较好,回收率高,适合于茶叶多糖糖醛酸含量的测定。结果表明不同产地茶叶多糖的糖醛酸含量有明显差异。本文同时研究了不同产地茶叶多糖对超氧自由基和DPPH自由基的清除作用,以评价其抗氧化活性。结果发现不同产地茶叶多糖的抗氧化活性与其糖醛酸含量呈正相关,糖醛酸含量越高,其抗氧化能力越强。     

红嘴山鸦繁殖生物学的研究

红嘴山鸦(Ｃｏｒａｃｉａｐｙｒｒｈｏｃｏｒａｘ)又称红嘴乌鸦,为典型的山地鸟类。有关该鸟繁殖生物学的研究,在国内见有寿振黄(1936)、郑作新(1963)、赵正阶(1985)、刘焕金(1987)等。但资料较零星。1985～1991年的3～12月,在山西省庞泉沟自然保护区对红嘴山鸦的繁殖生物学进行研究,现报道如下。1　工作区概况及方法庞泉沟自然保护区位于山西省吕梁山脉中段,地处交城和方山两县交界,东经111°22′～111°33′,北纬37°45′～37°55′,全区总面积为103×105ｈｍ2,主峰孝文山海拔2830ｍ,其地质、地貌、森林、植被、气候、农作物等见文献[1]。…     

最早传入北京地区的SARS冠状病毒S基因序列分析和克隆

SARS冠状病毒的spike(S)蛋白对病毒的致病力至关重要,也是机体特异性体液和细胞免疫主要针对的靶分子。从北京地区最早发现的SARS患者咽拭子细胞培养上清中提取病毒RNA,用反转录巢式聚合酶链式反应(RTPCR)分6个片段扩增出S基因全序列,用TA载体克隆后进行DNA序列分析,再通过重叠PCR将6个片段连接成一条完整的S基因并克隆测序。DNA测序结果表明病毒S基因序列与报告的BJ01株SARS冠状病毒S基因序列完全一致,用重叠PCR将6个S基因片段连接成了一条完整的S基因,插入到pGEMT载体后读序完全正确。上述结果表明最早传入北京地区的病毒与新近报告的BJ01株SARS冠状病毒在分子流行病学上具有同源特征,重叠PCR技术可以用于有效连接多个基因片段。S区全基因的克隆为进一步研究该基因的功能和DNA疫苗等研究提供了基础。     

西洋参皂苷的HPLC测定及不同提取方法比较

建立西洋参中7种人参皂苷含量测定的分析方法,并以7种人参皂苷的提取率为指标,对西洋参皂苷不同提取溶剂和不同提取方法进行比较。采用梯度洗脱,使用Alltima C18色谱柱,乙腈-0.05%磷酸水溶液为流动相,流速为1.2 mL/min,柱温为35℃,检测波长为203 nm;分别选用不同的提取溶剂和不同的辅助提取方法提取西洋参皂苷。在选定的色谱条件下每种成分在各自的浓度范围内均具有较好的线性相关性,7种人参皂苷的加标回收率为94.1~97.9%。本法操作简便,重现性好,结果准确;各人参皂苷不同提取溶剂和不同提取方法的提取率有一定的差异。     

铜尾矿对小麦生长发育和生理功能的影响

通过盆栽实验,分析了铜陵铜尾矿对小麦生长发育和生理功能的影响。结果表明,小麦种子能在铜尾矿上萌发,但发芽率和发芽速率均小于正常土壤中播种的小麦,高比例尾矿抑制小麦的株高,尾矿降低叶绿素含量,但对叶绿素a/b无影响,与对照组相比,尾矿组根系表现为变短变粗,须根数减少,尾矿能增加小麦根和茎叶部分生物量,且能明显提高根冠比,在尾矿胁迫下,小麦叶片的细胞膜透性和游离脯氨酸含量随尾矿比例增加而增大,可作为鉴定植物相对抗性的指标。     

不同地理种群褐飞虱的致害性变异和为害特征(英文)

本文对采自广西、云南和浙江的不同地理种群的褐飞虱致害性变异和为害特性进行了比较研究。致害性测定结果表明,１９８９年后浙江种群褐飞虱仍表现为生物型２的致害特性;而广西种群在１９９１年后不仅能致害含 ＢＰｈ１基因的ＩＲ２６和 ＭＵｄｇｏ而且还能致害含 ｂｐｈ２基因的ＡＳＤ７,１９９７年广西和云南种群均能致害抗虫品种ＩＲ２６、Ｍｕｄｇｏ、ＡＳＤ７和Ｒ．Ｈ,表明这两个种群产生了不同与生物型１、２和３的致害性更强的新的生物型。自由选择试验结果表明,浙江种群的若虫和成虫对不同抗虫品种的取食选择性有明显的差异,成虫嗜食ＩＲ２６品种而若虫对不同品种的选择性无显著差别。云南种群若虫嗜食ＡＳＤ７,而成虫则嗜食ＴＮ１。室内试验表明,浙江种群的若虫历期最长,而在广西种群中取食ＡＳＤ７的若虫历期明显比取食ＴＮ１的长。取食ＩＲ２６的浙江种群的若虫存活率比取食ＴＮ１和ＡＳＤ７的高,而在抗虫品种ＡＳＤ７和ＩＲ２６上云南种群的若虫存活率明显高于浙江和广西种群。研究表明不同地理种群的褐飞虱的致害性与其为害特性并不完全一致。