北方寒带地区透明颤菌理化特性的研究

目的为了研究透明颤菌在微生物发酵工业生产中的应用,对东北寒带地区透明颤菌的理化特性进行研究。方法透明颤菌的分离采用培养基(PYA)富集培养与形态观察的方法,采用分光光度计、光扫描与CO差示光谱确定透明颤菌的生理生化性质。结果研究分离的透明颤菌在蛋白胨0.4%,酵母0.6%,NaAc 0.02%,pH7.8,34℃,150 r/min时可获得较大生长速率,NaAc浓度为1%,pH7.5-8.0时菌体生长最快。透明颤菌在稳定期血红素含量约为每克湿菌中11 nmol,样品在5000 r/min离心后出现血红蛋白的吸收峰。结论分离培养出寒带地区生长的透明颤菌,并确定了其理化性质,为在发酵工业生产中应用透明颤菌奠定了参考依据。     

甘薯链霉菌中潜在纤维素酶增效蛋白基因克隆、表达及产物活性检测

近些年来发现有些非纤维素酶组分的蛋白能协同纤维素酶系水解纤维素,大大提高纤维素酶的酶解效率,这些蛋白统称为增效蛋白。增效蛋白的发现为木质纤维素的水解提供了新的思路。本研究根据NCBI上甘薯链霉菌中潜在纤维素酶增效蛋白基因(登录号WP_009327266)设计相关引物,从甘薯链霉菌c DNA中扩增出潜在目的基因,命名为Sip1,并构建重组质粒Sip1-p ET-32a(+)转入大肠杆菌,得到重组菌Sip1-p ET32a(+)-E.coli BL21和Sip1-p ET32a(+)-E.coli Rosetta(DE3)。表达的粗蛋白产物具32.3%纤维素酶增效活性。     

C型利钠利尿肽（CNP）——一种新的心血管活性物质

新发现的Ｃ型利钠利尿肽（ＣＮＰ）是心房利钠利尿肽（ＡＮＰ）家族中的一员,由内皮细胞产生,和血管平滑肌细胞ＡＮＰＲ－Ｂ受体结合,使外周静脉扩张和回心血量减少,导致心脏充盈压和心输出量降低,这是降压的主要机理,该肽无利钠利尿作用。ＣＮＰ的作用机制与ｃＧＭＰ（第二信使）没有关系。心衰时,血管对ＣＮＰ的反应性不变。因此,ＣＮＰ在来源、作用部位、作用特点、作用机制及病理状态下的反应性等与熟知的ＡＮＰ均有显著不同。     

心室肌Cl~－通道电流的性质及其意义

近年来,在豚鼠、兔心室肌上发现了一种由β－肾上腺素能激活的Ｃｌ~－电流（Ｉ＿Ｃｌ）。此种Ｉ＿Ｃｌ的主要特点为：外向整流性质,时间不依赖性,对细胞外Ｎａ~＋变化敏感,Ｃｌ~－通道的活动受细胞内ｃＡＭＰ依赖性蛋白激酶Ａ的调节。Ｉ＿（Ｃｌ）的发现不仅证明心肌上有Ｃｌ~－通道,而且近来研究表明,Ｉ＿（Ｃｌ）在调节心肌动作电位时程和静息电位方面起主要作用。研究结果还提示Ｉ＿（Ｃｌ）可能与病理状态下某些心律失常的发生有关。     

选择压法分离鼠伤寒沙门氏菌抗萘啶酮酸突变株（NaA－R）

本实验采用选择压法以不同水平（１０－１２０μｇ／ｍｌ）的萘啶酮酸液体和固体培养基从鼠伤寒沙门氏菌野株中选择出一株抗萘啶酮酸的抗药菌株,并对其应用作了初步尝试。     

研制确定特异性兔单克隆抗体的稳定的兔-鼠杂交瘤

<正> 杂交瘤技术现已达到可制备抗大多数抗原的单克隆抗体的程度。可是,某些免疫原在小鼠体内免疫应答较差,并且通常很难得到具有确定表位特异性的高亲和力鼠单克隆抗体。这些问题通过曾报道的为数不多的分泌抗A群链霉菌(GAS)特异单克隆抗体的鼠杂交瘤而有所反映。     

褐藻胶裂解酶基因的克隆表达与酶学性质

随着大型褐藻生产燃料乙醇以及褐藻寡糖重大药用价值的发现,褐藻胶裂解酶成为国内外多个领域的研究重点。文中对解藻酸弧菌上与褐藻胶降解相关的5个基因分别进行克隆表达,通过SDS-PAGE和酶活性定量测定,发现该基因簇中的4个基因有降解褐藻胶活性。对酶活最高的rAlgV3进行了诱导条件的优化、酶蛋白纯化及酶性质研究,发现优化诱导条件后重组酶rAlgV3的酶活由2.34×10~4 U/L上升为1.68×10~5 U/L,比优化前提高了7.3倍;对酶性质进行表征发现该酶在4–70℃均有活性,最适反应温度为40℃,在4–20℃酶相对稳定;该酶在pH 6.5-9.0环境下均有较高的酶活,最适pH为8.0;pH稳定性好,在pH 4.5–9.5环境下可以稳定存在;适量的NaCl浓度和Fe~(2+)、Fe~(3+)等离子具有促进酶活的作用,SDS和Cu~(2+)离子可明显抑制酶活力。对该酶的底物特性的研究发现,该酶不仅可以降解褐藻胶中的Poly-M片段,也能降解Poly-G片段,具有广泛底物特性;其降解海藻酸钠主要释放二糖和三糖,是一种内切酶。该酶对于第三代燃料乙醇的发展及褐藻寡糖的生产具有重要作用。     

免疫聚合酶链反应技术的建立及其对甲胎蛋白的检测

免疫ＰＣＲ是一种新的具高敏感性的抗原检测技术,它类似传统的ＥＬＩＳＡ法,若与抗体连接的酶用ＤＮＡ片段代替,则该ＤＮＡ片段可用于ＰＣＲ扩增。以链酶亲合素搭桥将生物素标记的抗体与ＤＮＡ相连建立了免疫ＰＣＲ技术,并将其用于检测甲胎蛋白（ＡＦＰ）,其敏感性比ＥＬＩＳＡ法高１０４。因此,免疫ＰＣＲ有可能作为一种具高敏感性的检测手段用于临床早期诊断     

应用蛋白质组学技术筛选胃癌SGC-7901细胞中的let-7a功能相关蛋白

为探讨let-7a表达下调在胃癌发病中的机制,高通量地检测了与let-7a功能相关的蛋白质.首先采用基因克隆技术稳定过表达SGC-7901细胞系的let-7a基因,然后用蛋白质组学技术研究稳定过表达该基因对SGC-7901细胞蛋白质表达谱的影响.通过对SGC-7901/let-7a细胞的蛋白质表达谱改变的研究,并用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析鉴定了10个差异表达蛋白质.这些差异表达蛋白质可能是let-7a功能相关蛋白质,其中抗氧化蛋白2、胰岛素样生长因子结合蛋白2、二硫化蛋白异构酶A2、四氢叶酸合成酶、细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白1、Rho-GTPsae激活蛋白4表达上调,Skp2蛋白、血小板黏附蛋白CD41、纤维连接蛋白、Cks1蛋白表达下调.部分差异表达蛋白质如细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白1、Skp2蛋白和纤维连接蛋白经蛋白质印迹分析进行了验证.在SGC-7901/let-7a中鉴定的10个差异表达蛋白质涉及到细胞周期的调控、分子基因表达调控、细胞黏附、细胞代谢等众多事件,它们可能作为let-7a功能相关蛋白质,为阐明let-7a表达下调在胃癌发病中的机制提供了重要线索.     

冬虫夏草及杜仲磷脂成分的研究

本文对不同产地的冬虫夏草及杜仲磷脂成分进行了分析研究。以钼蓝比色法测定了它们的总磷脂含量,采用薄层色谱扫描和吸光度比例系数校正法测定了其磷脂组成及相对百分含量。冬虫夏草约含8种磷脂组分,主要成分为磷脂酰胆碱、磷脂酰叽醇、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺和磷脂酸。杜仲约含6种磷脂组分,其中以溶血磷脂酰胆碱和磷脂酰胆碱为主。