抗人CD3单抗重、轻链可变区基因的体外扩增、克隆和序列分析

根据免疫球蛋白重链和轻链可变区基因５’端序列和Ｊ区序列,化学合成适合于体外扩增抗体重、轻链可变区基因的二对引物。从体外培养的ＯＫＴ３杂交瘤细胞中提取总ＲＮＡ,反转录生成ｃＤＮＡ,以ｃＤＮＡ为模板,分别加入合成的重、轻链可变区引物进行ＰＣＲ,扩增出抗体重、轻链可变区基因片段。将扩增产物分别插入ｐＵＣ１９质粒,筛选出阳性克隆,用链终止法进行ＤＮＡ序列测定。所测重链可变区基因全长３５７ｂｐ,编码１１９个氨基酸,轻链可变区基因全长３２１ｂｐ,编码１０７个氨基酸。     

布洛芬对曲霉的体外抗真菌活性评价

目的观察布洛芬对曲霉临床分离株的体外抗真菌活性。方法分别用微量液基稀释法和纸片扩散法,测定布洛芬对10株烟曲霉、黄曲霉和土曲霉的抗菌活性。结果微量液基稀释法显示布洛芬对曲霉的最低抑菌浓度（MIC）范围为1000～2000μg/mL,最低杀菌浓度（MFC）范围为2000～8000μg/mL;纸片扩散法也显示布洛芬有体外抗曲霉活性：48h时,1000μg布洛芬对曲霉产生的抑菌圈直径为（20.1±3.89）mm。结论布洛芬有体外抗曲霉活性。     

真菌耐药性产生的新机制：热休克蛋白90的作用

近年来白念珠菌病发病率呈上升趋势。随着抗真菌药物的广泛应用,临床出现的耐药菌株也不断增多。最近对耐药菌株的产生机制的研究有了重大突破,对Hsp90的作用有了更深的了解,即Hsp90可以参与由于快速选择而出现的真菌耐药机制,而且对耐药性的维持也起到一定作用。该文对Hsp90对真菌产生耐药性的机制及其临床应用的研究进展作一综述。     

地塞米松对过氧化氢体外氧化杀伤烟曲霉的影响

目的研究地塞米松对过氧化氢（H2O2）体外杀伤烟曲霉（Aspergillus fumigatus,A.fumigatus）的影响。方法用不同浓度的地塞米松（0 mg/mL,0.02 mg/mL,0.2 mg/mL）处理烟曲霉孢子,按照处理时间不同分为A（0.5 h）,B（2 h）,C（7 h）,D（16 h）4组。用测定H2O2杀伤真菌的标准方法——斑点法分别测定各组烟曲霉孢子对H2O2的氧化杀伤敏感性。结果在H2O2浓度为1.5 mmol/L下,未用地塞米松处理的孢子（阴性对照）氧化杀伤敏感性为5×101（生长良好）。A（0.5 h）组：地塞米松0.02 mg/mL处理后孢子的氧化杀伤敏感性为5×10^3;地塞米松0.2 mg/mL处理后孢子的氧化杀伤敏感性为5×10^4。B（2 h）组：地塞米松0.02 mg/mL和0.2 mg/mL处理后孢子的氧化杀伤敏感性均为5×10^3。C（7 h）和D（16 h）组：不同浓度地塞米松处理后氧化杀伤敏感性与阴性对照没有差别（均为5×10^1）。结论地塞米松使H2O2在体外杀伤烟曲霉的能力增强,这种作用仅发生在地塞米松接触烟曲霉孢子的早期（〈2 h）。     

曲霉生物膜的形成过程与结构特征

目的 研究曲霉生物膜的形成过程和结构特征.方法 我们利用一个曲霉生物膜体外模型研究其形成过程和结构特征.将200 μL浓度为1×10<'5>孢子/mL的受试曲霉(烟曲霉AF293,黄曲霉BMU03940,土曲霉BMU00802,黑曲霉BMU04689)的孢子悬液加到24孔组织培养板中的无菌塑料细胞培养盖玻片上,37℃孵育不同时间(0、2、4、8、10、12、16、18、24、48、72 h),加入25 μmol/L的FUN-1室温避光染色后,用波长488 nm激光激发,通过共聚焦激光扫描显微镜观察曲霉生物膜的形成过程;再用波长为488 am和633 am激光同时激发,将两个波长下的图像叠加后观察曲霉生物膜的活力;利用:XYZ轴成像观察其结构特征.在上述不同的时间点用钙荧光白染色后,用波长为405 nm的紫外光激发,观察曲霉生物膜细胞外基质的产生.结果 烟曲霉AF293在第4 h即开始有散在的孢子黏附于盖玻片上;8 h时孢子开始萌芽,10～12 h菌丝延长形成单细胞层;16～20 h菌丝缠绕形成多层立体结构;24 h形成一个具有复杂的三维立体结构特征的多细胞菌落,菌丝有序排列,细胞外基质弥散的分布在菌丝的周围;48～72 h生物膜逐渐成熟.成熟的烟曲霉生物膜是由细胞外基质包裹的有序排列的菌丝形成的复杂立体结构.黄曲霉BMU03940、土曲霉BMU00802、黑曲霉BMU04689与烟曲霉AF293有类似的生物膜发育阶段,包括黏附、孢子萌芽、菌丝延长、菌丝有序排列形成三维立体结构.结论 烟曲霉、黄曲霉、土曲霉和黑曲霉在体外都能形成典型的生物膜,它的形成过程和结构特征与其他真菌生物膜类似.