功能核酸筛选过程中次级文库的有效制备

通过SELEX技术体外筛选功能核酸元件是其发挥各种功能的必要前提。SELEX程序中，制备高质量的单链次级文库是最基础、最关键的技术之一，很大程度上决定了筛选的成败。全面总结了功能核酸筛选中的单链生成策略，如基于扩增的方法、酶消化技术、基于链霉亲和素包被珠的链分离和基于迁移率变化分离获得次级文库等，详细阐述了各种方法的优缺点与关键细节，以期为进一步开发高效的功能核酸筛选方法奠定基础。     

血浆PLSCR1、PTX3、SALL4与肝细胞癌患者临床病理参数的关系及联合检测的辅助诊断价值研究

摘要 目的：探讨血浆磷脂爬行酶1（PLSCR1）、正五聚蛋白3（PTX3）、spalt样转录因子4（SALL4）与肝细胞癌（HCC）患者临床病理参数的关系及联合检测的辅助诊断价值。方法：纳入2020年1月～2021年12月南京医科大学附属无锡第二医院收治的94例HCC患者（HCC组）、67例肝硬化患者（肝硬化组）、78例慢性乙型肝炎患者（慢性乙型肝炎组），另取同期健康体检者58例为对照组，检测并对比四组血浆PLSCR1、PTX3、SALL4及血清甲胎蛋白（AFP）水平。分析血浆PLSCR1、PTX3、SALL4水平与HCC患者临床病理参数的关系。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析血清AFP联合血浆PLSCR1、PTX3、SALL4对HCC的辅助诊断价值。结果：HCC组血浆PLSCR1、PTX3、SALL4、血清AFP水平高于肝硬化组、慢性乙型肝炎组以及对照组，肝硬化组上述指标水平高于慢性乙型肝炎组和对照组，慢性乙型肝炎组上述指标水平高于对照组（P＜0.05）。不同分化程度、Child-Pugh分级、巴塞罗那临床肝癌（BCLC）分期、淋巴结转移HCC患者血浆PLSCR1、PTX3、SALL4水平比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。ROC曲线分析结果显示，血清AFP、血浆PLSCR1、PTX3、SALL4四项联合检测诊断HCC的曲线下面积（AUC）为0.923，明显高于血浆PLSCR1、PTX3、SALL4三项联合检测以及各指标单独检测（P＜0.05）。结论：HCC患者血浆PLSCR1、PTX3、SALL4水平呈高表达，与分化程度、Child-Pugh分级、BCLC分期和淋巴结转移有关，可作为HCC早期诊断的辅助指标。     

用番茄叶柄评估植株氮素状况

曾有人推荐,以一定生长阶段特定叶柄的NO_3—N含量,来评估幼龄番茄植株的N素状况。但对于采样位置,研究者见解不一,有的研究报告更是使用“新近成熟叶”之类的模糊术语。因此,本研究旨在确定NO_3—N含量随叶位变化的程度。 通常,营养诊断指标主要根据全叶样来确定大量和微量元素的含量范围。全叶的N素诊断指标可用全N,但对许多蔬菜作物来说,NO_3—N更能简捷且理想地反映N素状况。然而,蔬菜作物较为详尽的NO_3—N指标系以叶柄,而非全叶。运用最新知识和最先进技术组成的一套有效的组织分析系统,系采用电位分析测定全叶样的NO_3—N,并     

大肠杆菌血凝反应的研究

本文报告不同来源大肠杆菌对不同红血球的血凝反应。使用Evans法,磷酸盐缓冲液琼脂在4℃环境中操作可获满意的结果。人粪源大肠杆菌与豚鼠红血球的MRHA为27.3％,而尿源菌株仅2.7％。人和猪粪源大肠杆菌对A型红血球的MRHA为0～4％,而人尿源株为41.3％。尿源菌株对P_2~K血球MRHA为41.3％,对血球为12％。尿源菌株对A型与P_2~K型红血球的MRHA相符率达97％,扫描电镜显示具有菌毛的细菌粘附于A型红血球表面,A型红血球可取代罕有的P_2~K血球作血凝试验以诊断尿道致病性大肠杆菌。     

人呼吸道合胞病毒感染性克隆构建及其验证

人呼吸道合胞病毒（Human respiratory syncytial virus, HRSV）是引起全球婴幼儿急性下呼吸道感染的重要病原体。本研究旨在建立HRSV原型株Long毒株的反向遗传操作系统。通过利用细菌人工染色体（Bacterial artificial chromosome,BAC）为载体骨架构建HRSV的Long毒株全长质粒（Long-BAC），以pcDNA3.1为载体构建分别表达HRSV N、P、M2-1和L蛋白（pcDNA3.1-N,pcDNA3.1-P,pcDNA3.1-M2-1和pcDNA3.1-L）的四个辅助质粒，将五个质粒共转染于表达T7 RNA聚合酶的BSR T7/9细胞系进行病毒拯救。采用间接免疫荧光（Immune fluorescence assay,IFA）和测序方法对拯救的病毒进行鉴定，并评价其在细胞和动物水平的生物学特征。本研究首次成功构建以BAC载体为骨架的HRSV原型株Long感染性克隆，拯救的病毒在不同代数测序结果显示无突变，能够稳定传代，病毒滴度为3×106 PFU/mL；与实验室保存野生型Long株（Long-WT）相比具有相似的细胞...     

小分子靶标的核糖开关生物传感器研究进展

小分子化合物种类繁多，在众多生化过程中发挥关键作用，具有重要的检测意义与价值,其快速灵敏可视化检测技术的开发是当前的研究热点。基于核糖开关的生物传感器因具有识别特性高、操作简便、成本低等优势，为小分子检测提供了一条新途径。对核糖开关的来源、构成、调控机制、体内外筛选，特别是对基于小分子靶标的核糖开关生物传感器分类进行了介绍，并从核糖开关的筛选、裁剪、理性设计、核糖开关无细胞传感器的应用等几个方向提出了展望，以期为小分子靶标的核糖开关生物传感器的发展和应用提供理论依据。     

2009-2019年中国大陆柯萨奇病毒A14型基因特征分析

柯萨奇病毒A14型属于肠道病毒A组，可引起手足口病和无菌性脑膜炎等疾病，但目前全球对CVA14的分子流行病学研究较少，尚无对CVA14基于全长VP1区进行明确分型的相关研究。因得到中国手足口病监测网络的技术支持，本研究获得2009-2019年在中国大陆分离到的15株CVA14，应用RT-PCR对其全长VP1区进行扩增、测序和分析，并与GenBank中下载的22条CVA14全长VP1序列共同构建系统发育树。结果显示，2009-2019年中国大陆分离的15株CVA14与原型株G-14的核苷酸与氨基酸相似性分别为81.8%～82.9%与95.6%～96.9%,15株CVA14之间的核苷酸与氨基酸相似性分别为91.7%～99.7%与98.3%～100%。中国大陆所有的22条CVA14序列之间的核苷酸与氨基酸相似性分别为91.7%～100.0%与98.3%～100.0%。中国大陆所有的CVA14与国外8条CVA14序列之间的核苷酸与氨基酸相似性分别为80.7%～86.0%与94.9%～97.9%。基于全长VP1系统发育树，全球CVA14可划分为A-G七个基因型，目前全球范围内流行的CVA14的基...     

金黄色葡萄球菌肠毒素A、B、C、D、E重组载体的构建及表达

金黄色葡萄球菌肠毒素（Staphylococcal enterotoxins，SEs）是一组结构毒力相似、血清型不同的可溶性小分子蛋白质，平均分子质量为26~30 kD，是引起细菌性食物中毒及肠胃炎的主要因素之一。为了制备金黄色葡萄球菌肠毒素的纯品，首先合成了SEA、SEB、SEC、SED和SEE的基因序列，然后构建了5种肠毒素的原核表达载体，分别转入BL21（DE3）细胞中进行诱导表达。通过SDS-PAGE和Western blot验证，5种肠毒素蛋白均被成功表达，并且在较低的诱导温度（16 ℃）获得一定量的可溶性蛋白。成功制备了5种金黄色葡萄球菌肠毒素的可溶性蛋白，为今后更好地解决因SEs引起的食品安全问题奠定了基础。