高速逆流色谱结合半制备液相色谱制备甘青青兰中3种活性成分

采用高速逆流色谱（HSCCC）结合液相色谱法制备甘青青兰（Dracocephalum tanguticum Maxim.）中绿原酸、胡麻甙-6″-乙酯、迷迭香酸,建立快速分离制备甘青青兰中活性成分的方法。采用半制备型高效液相色谱（SP-HPLC）富集甘青青兰乙酸乙酯萃取物中绿原酸、胡麻甙-6″-乙酯、迷迭香酸,再用制备液相（Pre-HPLC）和HSCCC对富集物进行分离纯化,获得54 mg化合物Ⅰ、130 mg化合物Ⅱ和200 mg化合物Ⅲ,纯度分别为96.9%、97.9%和95.1%,经核磁共振碳谱（¹³CNMR）和氢谱（¹HNMR）分别鉴定为绿原酸、胡麻甙-6″-乙酯和迷迭香酸。本实验方法适用于甘青青兰乙酸乙酯萃取物中绿原酸、胡麻甙-6″-乙酯和迷迭香酸的分离制备,并避免了传统分离方法操作繁多、试剂消耗量大、不可回收等弊端,为分离甘青青兰活性成分、制备对照品等研究提供了参考依据。     

慢病毒shRNA表达载体介导人肿瘤细胞基因稳定沉默的影响因素

目的 探讨慢病毒载体介导人肿瘤细胞RNA干扰的影响因素。方法 以乏氧诱导因子-1α（Hypoxia-inducible factor-1α, HIF-1α）和乏氧诱导因子-1β（Hypoxia-inducible factor-1β, HIF-1β）基因为靶基因,采用Invitrogen公司的BLOCK-iT Lentiviral RNAi Expression System生产表达靶基因shRNA的慢病毒载体,转导Hela、SPCA1和A549,采用定量RT-PCR技术检测靶基因mRNA表达水平。结果 用此系统生产慢病毒,每一10cm培养皿可收获6.3×1010个病毒颗粒。浓度为2×1010copies/ml的Lenti6-HIF1α和Lenti6-HIF1β转导SPCA1、A549和Hela细胞的功能滴度分别为：1.8×106TU/ml、1.2×106TU/ml、1.75×106TU/ml和1.76×106TU/ml、1.21×106TU/ml和1.79×106TU/ml。延长病毒的吸附时间可以提高转导效率, 8小时以内转导效率与吸附时间呈正比,12小时开始进入平台期。1/4、1/2、1、2、4、8倍MOI的Lenti6-HIF1α病毒转导SPCA1和Hela细胞48小时后,RNAi效果与病毒量呈正相比。用筛选的转导细胞证实,RNAi长期效果与细胞类型无关,但与shRNA表达结构整合到靶细胞基因组的拷贝数呈正相关。结论 慢病毒载体介导人肿瘤细胞RNA干扰,短期基因抑制效果取决于细胞类型、病毒量和病毒的吸附时间,稳定基因沉默效果与病毒整合到靶细胞基因组的拷贝数密切相关。     

中国步行虫属Carabus的一个新种(鞘翅目,步行虫科)

蒙陈世骧所长的盛情,作者从中国科学院昆虫研究所得到一部分非常有趣的材料以进行鉴定。其中有一个台湾标本,是步行虫属Carabus内未经记载的新种,兹描述如下:     

乙肝病毒X蛋白通过激活NF-κB信号通路上调ABCG2的表达

目的：研究乙肝病毒X蛋白（HBx）通过核因子-κB（NF-κB）信号通路对半转运蛋白（ABCG2）的调节作用。方法：用特异性的NF-κB信号通路阻断剂PDTC阻断NF-κB信号通路,荧光双标激光扫描共聚焦显微镜观察L02细胞系转染HBx基因前后及PDTC加入前后NF-κB信号通路的激活、失活情况,同时用Real-time PCR和Western Blot技术检测转染前后及PDTC加入前后ABCG2在mRNA及蛋白水平的表达变化。结果：以L02细胞为参照,转染HBx基因后的L02-HBx细胞NF-κB信号通路被激活,ABCG2 mRNA和蛋白水平分别增加3.62±0.15和4.61±0.73倍,差异有统计学意义（P〈0.05）;PDTC作用24h后L02/HBx细胞NF-κB信号通路阻断,ABCG2 mRNA和蛋白表达分别为2.15±0.32倍和2.37±0.55倍,与未加入PDTC作用的L02-HBx细胞相比均有统计学意义（P〈0.05）。结论：NF-κB信号通路是HBx上调ABCG2表达的途径之一。     

超胶AcA_(34)柱层析法分离提纯人血清IgD

本文用超胶AcA_(34)柱层析法从IgD型骨髓瘤病人血清中分离提纯人血清IgD。经聚丙烯酰胺凝胶电泳、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳、免疫电泳和免疫双扩散等方法检查其纯度及活性均较满意。这个方法简单方便,时程短,效果好。此外,还用超薄层胶等电聚焦电泳法得到了IgD的等电聚焦图谱,薄层扫描为五条带,等电点在5.4—6.0。     

介绍一套初中植物实验竞赛试题

1986年下半年,河北省玉田县教研室与有关单位合作,在全县范围内举行了一次以显微镜使用为主要内容的初中植物实验竞赛。这次活动不仅起到了检查实验课开设情况的作用,同时也开阔了学生的眼界,丰富了学生的知识,培养了学生的动手能力和学习生物学的兴趣。为了进一步推动这类活动的开展,现把他们在竞赛中使用的试題介绍给大家,以便在工作中参考。     

儿茶素经PI3K-Akt-eNOS信号通路对冠心病大鼠心肌损伤及抗炎作用分析

摘要 目的：探讨儿茶素经PI3K-Akt-eNOS信号通路对冠心病大鼠心肌损伤及抗炎作用分析。方法：健康成年SPF级SD雄性大鼠,经腹腔注射垂体后叶素构建冠心病模型。采用Western blot法检测大鼠PI3K-Akt-eNOS信号通路相关蛋白的表达情况。采用ELISA法检测大鼠炎症因子和氧化应激指标的表达。观察并记录大鼠心肌损伤情况。结果：与空白组相比,模型组、儿茶素小剂量组、儿茶素中剂量组、儿茶素大剂量组的心肌缺血和心肌梗死面积均明显更高（P＜0.05）;儿茶素大剂量组心肌缺血和心肌梗死面积明显小于模型组、儿茶素小剂量组、儿茶素中剂量组（P＜0.05）;与空白组相比,模型组、儿茶素小剂量组、儿茶素中剂量组、儿茶素大剂量组的PI3K、p-Akt /Akt、p-eNOS /eNOS均明显更高（P＜0.05）;儿茶素大剂量组PI3K、p-Akt /Akt、p-eNOS /eNOS明显高于模型组、儿茶素小剂量组、儿茶素中剂量组（P＜0.05）;与空白组相比,模型组、儿茶素小剂量组、儿茶素中剂量组、儿茶素大剂量组的TNF-α、IL-1β、IL-18均明显更高（P＜0.05）;儿茶素大剂量组TNF-α、IL-1β、IL-18明显低于模型组、儿茶素小剂量组、儿茶素中剂量组（P＜0.05）;与空白组相比,模型组、儿茶素小剂量组、儿茶素中剂量组、儿茶素大剂量组的ROS、GSH-Px、MDA均明显更高（P＜0.05）;儿茶素大剂量组TNF-α、IL-1β、IL-18明显低于模型组、儿茶素小剂量组、儿茶素中剂量组（P＜0.05）。结论：儿茶素可通过PI3K-Akt-eNOS信号通路靶向改善冠心病大鼠心肌炎症和氧化应激状况,进而发挥心肌保护作用。     

丹参酮结合有氧运动对高血压大鼠血管功能的影响及作用机制分析

摘要 目的：分析丹参酮ⅡA（TIIA）结合有氧运动（AE）对高血压大鼠血管功能的影响及作用机制。方法：选择30只自发性高血压大鼠（SHR）,随机分为模型组、TⅡA组、TⅡA+AE组,每组10只,另选取10只健康大鼠作为对照组。TⅡA组大鼠给予20 mg/kg的TⅡA,TⅡA+AE组在此基础上进行中等强度的有氧运动,模型组和健康对照组大鼠均灌胃给予等体积的生理盐水溶液。观察各组大鼠收缩压（SBP）和舒张压（DBP）的变化,HE染色观察胸主动脉组织形态学变化,测定血管舒缩功能,检测血清血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、内皮素-1（ET-1）和一氧化氮（NO）的表达水平,测定胸主动脉中腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、核因子E2相关因子（Nrf2）、血红素加氧酶1（HO-1）、醌氧化还原酶1（NQO-1）蛋白的相对表达。结果：TⅡA组和TⅡA+AE组大鼠的SBP和DBP均低于同期的模型组大鼠;TⅡA+AE组大鼠的SBP和DBP在第8周时均低于同期TⅡA组大鼠（P<0.05）;与模型组相比,在1×10^-7、1×10^-6和1×10^-5mol/L的PE浓度下TⅡA组和TⅡA+AE组大鼠胸主动脉血管环的收缩率均降低,且TⅡA+AE组大鼠低于同浓度下的TⅡA组（P<0.05）;在1×10^-8、1×10^-7和1×10^-6的Ach浓度下TⅡA组和TⅡA+AE组大鼠胸主动脉血管环的舒张率高于模型组,且ⅡA+AE组大鼠高于同浓度下的TⅡA组（P<0.05）;TⅡA组和TⅡA+AE组大鼠血清AngⅡ和ET-1的表达水平低于模型组、NO的表达水平高于模型组（P<0.05）;与TⅡA组相比,TⅡA+AE组大鼠血清AngⅡ和ET-1的表达水平较低、NO的表达水平较高（P<0.05）;TⅡA组和TⅡA+AE组大鼠胸主动脉中AMPK、Nrf2、HO-1、和NQO-1蛋白的相对表达显于模型组,且TⅡA+AE组高于TⅡA组（P<0.05）。结论：TⅡA联合有氧运动可降低SHR的血压,改善血管舒缩功能和内皮功能,其机制可能与AMPK/Nrf2信号通路有关。