钠离子通道β4亚基糖基化的初步研究

异常表达的糖蛋白与PD等多种神经退行性疾病有关。糖蛋白组学研究发现,电压门控钠离子通道β4亚基在PD病人脑组织中表达明显增加。为了深入探索β4亚基及其糖链在帕金森发生发展中的作用,采用PD转基因鼠对其表达进行验证,对其潜在的糖基化位点进行定点突变,构建重组表达质粒。结果发现,在新生PD转基因鼠和野生成鼠脑组织中有~38kDa蛋白条带表达,而在新生野生鼠脑组织中不表达;用PNGase F酶处理去除糖链后,~38kDa蛋白条带变成迁移速递更快的较小分子量条带,说明β4亚基是高度糖基化的蛋白,并且其糖基化与生长发育有关。将突变重组质粒转入HEK-293细胞和小鼠神经瘤细胞Neuro2A中表达,结果发现突变型质粒分子量明显低于野生型。为研究β4亚基及其糖链的功能提供了一定的实验数据并打下了基础。     

尿微量白蛋白检测在社区糖尿病患者管理中的临床意义

目的:观察尿微量白蛋白在糖尿病患者中的改变情况,探讨提高社区糖尿病肾病早期诊断检出率的方法。方法:选择社区2型糖尿病患者73例,根据空腹血糖控制情况及糖尿病病程时长分别分组,比较不同组间患者尿微量白蛋白水平及阳性病例检出率,同时进行相关性分析。结果:MAlb在不同血糖控制情况患者中,血糖水平与MAlb数值、阳性检出率具有正相关性(P<0.05);血糖控制良好患者与其他血糖控制情况患者相比,差异具有(高度)统计学意义(P<0.01;P<0.05);MAlb在不同病程患者中,病程时间与MAlb数值、阳性检出率具有正相关性(P<0.05);≤5年组患者与5～10年组和≥10年组相比,差异具有(高度)统计学意义(P<0.01;P<0.05)。结论:尿微量白蛋白(MAlb)可作为早期糖尿病肾病检测的重要指标,能够提示肾脏病变的发展,定期检查能够提高早期糖尿病肾病的检出率。     

猪囊尾蚴磷蛋白在毕赤酵母中的表达及初步应用

将猪囊虫磷蛋白P2基因克隆到毕赤酵母表达系统分泌性表达载体pPIC9K中,构建了重组表达载体pPIC9K-P2。经测序证明基因序列完全正确,从而大量制备重组质粒pPIC9K-P2,并用SalⅠ、BglⅡ 两种内切酶分别线性化,然后分别电转化毕赤酵母菌种GS115,采用G418抗性梯度筛选得到高拷贝重组菌株,利用MM和MD培养基鉴定重组菌株Mut表型,然后用甲醇进行诱导表达;并对表达产物通过SDS-PAGE、Westernblot和ELISA分析,结果表明,重组菌株成功地分泌表达了分子量大小为12.6kD,表达量占分泌总蛋白的33%,且具有免疫反应活性的重组磷蛋白,从而解决了囊虫病诊断抗原来源问题并为研制新型猪囊虫疫苗奠定了基础。     

嗜吡啶红球菌 R04的联苯降解途径的研究

通过GC-MS测定出嗜吡啶红球菌R04菌降解联苯的中间代谢物2,3二氢二羟基联苯、2,3二羟基联苯和苯甲酸,并测定了该菌的2,3二羟基联苯双加氧酶、2羟基6酮基6苯基2,3己二烯酸(HOPDA)水解酶和苯甲酸双加氧酶活性。最终确定了R04菌降解联苯的途径为2,3二羟基联苯双加氧酶途径。     

脑血康胶囊联合巴曲酶对急性脑梗死患者血清 MBP、NSE水平的影响

摘要 目的：研究脑血康胶囊联合巴曲酶对急性脑梗死患者血清髓鞘碱性蛋白(myebin bosic protein,MBP)、神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)水平的影响。方法：选择2018年3月～2019年3月我院收治的161例急性脑梗死患者,将其随机分为两组。对照组静脉滴注巴曲酶,首次给予10 BU,隔日给予5 BU,每两天给药1次;观察组在巴曲酶的基础上联合口服脑血康胶囊,每天3 次,每次3粒。观察和比较两组治疗总有效率、治疗前后血清MBP、NSE、全血黏度(whole blood viscosity,WBV)、红细胞压积(hematocrit,HCT)、血浆黏度(plasma viscosity,PV)和纤维蛋白原(fibrinogen,FIB)水平及NHISS和BI评分的变化。结果：治疗后,观察组的有效率为91.25 %,明显高于对照组(64.2%,P<0.05);两组血清MBP、NSE、WBV、HCT、PV和FIB水平均较治疗前明显降低(P<0.05),且观察组的以上指标明显低于对照组(P<0.05);两组的BI评分明显升高(P<0.05),NHISS评分明显降低(P<0.05),观察组BI评分明显高于对照组,而NHISS评分明显低于对照组(P<0.05)。结论：脑血康胶囊联合巴曲酶对急性脑梗死有显著的疗效,能明显降低患者血清MBP、NSE水平,促进神经功能的恢复。     

中国白兔白介素-10基因的克隆、表达及其抗体的制备

目的克隆并表达中国白兔IL-10基因,制备抗IL-10多克隆抗体。方法运用RT-PCR对从ConA诱导后的中国白兔外周血单核细胞(PMBCr)总RNA中扩增IL-10基因,克隆后进行测序和遗传进化分析,同时将其亚克隆pET28a中,在大肠杆菌中诱导表达,并用纯化的表达产物制备多克隆抗体。结果该基因全长537 bp,编码178个氨基酸。与欧洲兔IL-10基因同源性很高,但与鼠、鸡、河豚和斑马鱼等不同物种IL-10基因差异较大。经IPTG诱导后,重组菌体裂解物经SDS-PAGE电泳可检测到相对分子质量为23.4×103的重组蛋白。Western blot分析表明,中国白兔IL-10基因已经表达。重组表达的蛋白量可占菌体蛋白的15.2%。结论成功实现了中国白兔IL-10的原核表达,制备了小鼠抗兔IL-10的多克隆抗体。     

49例肝硬化患者营养不良的相关因素分析

目的:探讨肝硬化患者营养不良的相关因素。方法:已确诊49例肝硬化住院患者空腹测血常规、血生化、肝纤维化、血凝分析、微量元素测定、尿常规,及人体测量学指标:身高、体重(weight)、上臂围(Mid-upperarmcir cumference,AC)、上臂肌围(Mid-upper arm muscle circumference,AMC)、肱三头肌皮褶厚度(Triceps skin fold thickness,TSF)、髂骨上皮褶厚度(Ilium skin fold thickness,ISF)、腓肠肌围((Gastrocnemius muscle circumference,GC),计算体重指数(Body mass index,BMI)、Pignete指数、比胸围(Ratio of Chest circumference and body Height,C/H)、Rohrer指数、Vervaeck指数等指标110项,采用主观全面营养评价法(Subjective global assessment,SGA)进行营养评估。结果:计量资料应用t检验、计数资料应用X2检验进行单因素分析,筛选出与肝硬化营养不良有关的因素26项,纳入Logistic回归向前逐步选择法(似然比)行多因素分析,GC、AC、ISF、阴离子间隙(AG)4项指标的降低与肝硬化患者营养不良的发生有关系。结论:在采用SGA法评估肝硬化患者营养状况时,应注意GC、AC、ISF及AG的变化。     

荧光定量PCR 法检测肿瘤细胞端粒酶活性的变化

目的：利用荧光定量PCR法检测端粒酶抑制剂作用于人肝癌细胞SMMC-7721后端粒酶活性的变化,探讨其抑制端粒酶活性的可能机制,为端粒酶抑制剂的临床应用提供理论依据。方法：利用荧光染料SYBR—Green I建立一种新的端粒酶活性检测方法：FQ—TRAP法。利用FQ—TRAP法检测端粒酶抑制剂作用后肿瘤细胞端粒酶活性变化。结果：端粒酶抑制剂作用后,肝癌细胞端粒酶活性都有变化,其中以ASODN,EGCG,AZT抑制效果较明显。结论：端粒酶FQ—TRAP法是一种特异性、灵敏度、重复性都较好,可快速、简便及定量检测人端粒酶活性的方法,端粒酶抑制剂作用后癌细胞端粒酶活性的变化,为端粒酶抑制剂的临床应用提供理论依据。     

胆石患者术后胆盐转运子BSEP、MRP2、NTCP的水平变化及意义

目的:探讨腹腔镜联合胆道镜微创手术对胆囊结石患者胆盐转运因子胆盐输出泵(BSEP)、多重耐药蛋白2(MRP2)和牛黄胆酸钠转运蛋白(NTCP)水平的影响。方法:选取我院普外科收治的胆囊结石患者20例排除手术和麻醉禁忌症,予腹腔镜联合胆道镜微创手术治疗。治疗结束后,对比治疗前后患者BSEP、MRP2、NTCP水平变化。结果:1治疗后患者肝脏组织中BSEP、MRP2水平明显比治疗前升高,差异有统计学意义(P0.05);2治疗后患者肝组织中NTCP水平与治疗前水平无明显变化,差异无统计学意义(P0.05)。结论:腹腔镜联合胆道镜微创手术治疗胆囊结石能升高患者胆盐转运因子BSEP、MRP2水平,提高患者术后对胆盐的转运和胆汁酸的代谢,降低胆囊结石复发率,对临床具有指导意义,值得临床推广。