大鼠半月板纤维软骨细胞的体外培养和生物学特征鉴定

目的:体外分离、培养和鉴定大鼠半月板纤维软骨细胞,为研究大鼠半月板纤维软骨细胞的损伤修复提供简单、可行的细胞培养方法。方法:机械分离大鼠膝关节内外侧半月板,0.1%Ⅱ型胶原酶消化配合机械吹打,10%FBS的培养基行原代和传代培养,倒置显微镜动态观察不同时间点半月板纤维软骨细胞的形态及生长情况,鉴定采用甲苯胺蓝染色法和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色法。CCK-8法检测大鼠纤维软骨细胞增殖。结果:在不同时间点,细胞表现出不同的生理形态,由多角形或短梭形变为梭形,最终呈现出三角形或椭圆形,并随着时间延长,细胞增殖能力逐渐增加。细胞培养48 h和72 h的OD值分别明显高于培养24 h的OD值(P0.05),差异具有统计学意义。细胞培养48 h和72 h的OD值相比较,72 h的OD值虽有增加,但并无统计学差异(P0.05)。经甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫荧光染色为阳性。结论:该方法培养的细胞形态稳定,增殖能力强,具有体内纤维软骨细胞的生物学基本特性,可为后续实验提供简单、可靠的原代大鼠半月板纤维软骨细胞培养方法。     

刚地弓形虫RH株果糖1，6-二磷酸醛缩酶的基因序列分析与融合表达

目的：对编码刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）RH株果糖1,6-二磷酸醛缩酶基因进行克隆和序列分析,并构建原核栽体pETcFN融合表达该重组蛋白,以研究该分子在弓形虫速殖子入侵中的作用。方法：从刚地弓形虫RH株速殖子cDNA中扩增编码果糖1,6-二磷酸醛缩酶的基因,并克隆到T载体上,测序确认;通过PCGENE及在线工具对此编码序列进行分析;将该基因亚克隆到表达栽体pET30a（＋）上,构建质粒pETcFN;表达产物用Western blot进行进一步确认。结果：经PCR鉴定和质粒双酶切鉴定后测序,确认插入T栽体的序列为所需的目的序列。根据序列分析,推断蛋白的预计分子量为39．2kDa,等电点为7．75;BLAST分析,发现同源性52％以上的序列32条;模序分析发现其分别在223～233、21～147及15～363位置隐含有与PS00158（PmfileScan）、PD001128（BlastProDom）及PF00274（HMMPfam）相似的模序,这些序列分子功能均为果糖二磷酸醛缩酶活性。该编码片段亚克隆到栽体上成功构建融合表达质粒pETcFN,转化到大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达,得到分子量为43kDa的融合蛋白。Western blot的结果与预测相符。     

棉花离体培养纤维的研究进展

从试管棉纤维的诱导条件、影响试管棉纤维分化和伸长的因子以及其发育机制等方面进行了综述。试管棉纤维主要是通过胚珠及愈伤组织诱导形成, 其影响因子主要是植物生长调节物质及外界环境。同时总结了目前棉花离体培养纤维中存在问题, 并展望了棉花离体培养的前景和应用价值。     

东京野茉莉种子油营养成分研究

对东京野茉莉种子的营养成分进行分析,结果表明,其种子含有丰富的营养物质：脂肪油、矿质元素,维生素等,其脂肪油中人体必需的油酸和亚油酸含量达85．4％,具有开发利用价值。     

一株高效抗砷喜温硫杆菌工程菌的构建

利用DNA体外重组技术,将大肠杆菌质粒载体pUM3上的抗砷基因簇片段亚克隆到含有强启动子（tac启动子）并具有广泛寄主范围特性的IncQ族质粒pMMB24上,删除调节基因片段,构建了含有强启动子、可在tra基因诱动下转移的组成型表达的抗砷质粒pSDRA4。通过接合转移的方式将其导入专性自养极端嗜酸性喜温硫杆菌Acidithiobacillus caldus中,构建了冶金工程菌Acidithiobacillus caldus (pSDRA4),接合转移频率为（1.444±0.797）×10-4。表明在大肠杆菌和喜温硫杆菌之间成功地建立了一个遗传转移系统。经检测,重组质粒在喜温硫杆菌中具有较好的稳定性,在无选择压力条件下传代50次基本保持稳定（重组质粒保留76% 以上）。经抗砷性能检测,与野生菌相比,构建的喜温硫杆菌工程菌抗砷能力明显提高,从10mmol/L提高到45mmol/L。     

减数分裂实验关键技术的探讨

减数分裂实验是生物学最基本和最重要的实验之一,是大学生物、医、农等专业必做的实验。近年来,我们结合教学,对多种实验材料进行研究,获得较理想的效果,实验步骤可参考一般实验指导,下面对该实验的关键技术介绍如下。１取材方法对植物和动物而言,减数分裂只发生在...     

实验室模拟滨海盐沼潮滩高程对互花米草生长的影响

为探究滨海盐沼湿地潮滩高程对互花米草生长的影响,设置六组不同高度的土柱,通过移栽互花米草进行模拟实验,研究不同高程带来的土壤水盐差异及植株生长响应情况.结果表明:(1)土壤含水率随高程的增加呈现出明显降低趋势,30 cm高程含水率最高,为46.4％,180 cm高程含水率最低,为34.1％,土壤孔隙水盐度随高程变化的趋...     

葱兰是细胞减数分裂实验的好材料

葱兰是细胞减数分裂实验的好材料詹少华,余梅（安徽省六安师专生物学系２３７０１２）葱兰［Ｚｅｐｈｙｒａｎｔｈｅｓｃａｎｄｉｄａ（Ｌｉｎｄ）Ｈｅｒｂ］百合科葱属草本花卉植物,常栽培于花园四周或盆栽,全国各地均有分布。近年来,我们结合教学,试用葱兰作减数分...     

流行性出血热(EHF)地鼠肾细胞(GHKC)灭活双价疫苗的人体观察

我国地鼠肾细胞(GHKC)和沙鼠肾细胞(MGKC)培养的EHF灭活疫苗均已进行小量人体试用观察,获得了令人鼓舞的结果。我们用GHKC研制的一批EHF灭活单价疫苗(L99株家鼠型病毒)(88-17批)对12名志愿者进行接种观察,未发现明显的不良反应,接种3针后全部中和抗体阳转(酶斑减少中和试验,EF-RNT),一年后其中10人血清仍保持抗体阳性。鉴于野鼠型和家鼠型EHF病毒间存在有明显的抗原性和免疫原性差异,为获得一种对预防两型EHF同样有效的灭活疫苗,我们用GHKC适应的两型EHF病毒株(野鼠型病毒JR株,家鼠型病毒L99株)制出GHKC灭活双价疫苗90-1批(液体苗)及90-2批(冻干苗),经检定合格,卫生部批准后进行了人体试用观察。疫苗用0.025％福尔马林灭活,加Al(OH)_3佐剂0.5