一种低温表达型T载体及其应用

在现代生物学和生物技术研究中,通过基因重组表达获得目标蛋白已成为常规技术。因其培养简单、操作方便、遗传背景清楚、克隆表达技术成熟,大肠杆菌表达系统通常是人们表达重组蛋白的首选。但是在常规温度下进行基因的重组表达,动、植物和常温微生物的基因产物多数在数小时内变性沉淀;还有一些重组蛋白对宿主具有细胞毒性,难以得到重组表达。因此,我们构建了1种新型T载体——pEXC-T;它结合TA克隆技术和低温诱导表达功能,具有表达水平高、操作方便、目标蛋白得到分子伴侣保护和低温保存等特点。采用构建和优化的pEXC载体,P1抗原蛋白、溶血素PLO两种不稳定性蛋白在pEXC中都实现了高效的可溶性表达。低温表达系统p EXC的建立和发展为蛋白质的结构与功能的研究,以及抗原和药用蛋白的制备提供了便利的途径。     

乌鲁木齐维吾尔人两种物质味盲基因频率

1996年5月,我们在新疆乌鲁木齐市天山区测定了维吾尔族群体中糖精（saccharin）和乙酰水杨酸（acetosal．aspirin,APS）味盲频率和隐性基因频率,调查对象为10～21岁,身体健康,父母同族的大、中、中学学生。糖精测定时以2号液（254×10-2mol／L）为味盲界限,乙酰水杨酸测定时以2号液（0.85×10-2mol／L）为味盲界限,具体阈值分布情况见表1。用阈值法,在维吾尔族群体中糖精测试者512人,其中男241人,女271人,味盲总数30人,占调查人数的5．86％。乙酸水杨酸测试者340人,其中男186人,味盲75人,占40．4％;女154人,味盲引人,占…     

力复霉素生物合成中N标记化合物参人的研究

使用稳定同位素15N标记化合物示踪方法,研究力复霉素分子中氮原于代谢途径。结果证明：硝酸钾(K15NO3)加入到rifl突变株,在有机培养基发酵中能促进力复霉素的中间体A32的生物合成,而且15N标记也参入到A32分子中。应用以15N标记谷氨酰胺为前体,证明酰胺氮原子是rifl突变株产物A32分子中氮原子的供体。15N标记A32,不论在高产菌株,还是无活力突变株经共合成,都能参入到力复霉素分子中。通过上述实验,阐明力复霉素氮原子的参入途径为K15NO3→→15NH3→谷氨酰胺-CO15NH2→→HA32-15NH2→→→力复霉素-15NH。     

江苏晚新生代的几种鳄类化石

本文记述了发现于江苏西部晚新生代的鳄类化石,由于材料有限,种不能确定。它们是:Tomistoma sp., Diplocynodon sp., Alligator of. sinensis.     

工程菌BL21-PET21a(+)-phy A表达植酸酶的研究

对来源于Aspergillusniger的植酸酶基因phyA进行了改造 ,去除了内含子和信号肽编码序列后重组到表达载体PET2 1a( + )上 ,导入大肠杆菌BL2 1 (DE3)中 ,构建工程菌株BL2 1 PET2 1a( + ) phyA。植酸酶基因在工程菌株中得到了高效表达。表达产物主要以包涵体形式存在 ,表达量达到菌体蛋白的 30 %以上。改进了包涵体复性技术 ,包涵体蛋白经复性、纯化后 ,生物活性达到 1 5 0 0U mg ,并且复性蛋白具有较好的热稳定性 ,经过 75～ 95℃、30min的热处理后 ,仍然保持了生物活性 ,同时有明显的热激活现象。热激活后最高生物活性达到 5 0 0 0U mg。这一发现对于植酸酶的应用研究具有一定的意义。     

在水生与气生状态下石莼光合作用对光照和温度的响应

如何对付由于高潮时的水生状态与低潮时的气生状态高频率循环所导致的不同环境条件,是潮间带海藻的光合作用所面临的独特问题。对采自汕头沿岸的石莼(Ulva lactuca)在水生和气生不同状态下光合作用对光照和温度的响应特性进行了测定,以探讨这种常见的潮间带绿藻在潮汐循环背景下的光合特性。在气生状态下,光饱和净光合速率(Pmax)随气生暴露时间的变化模式可以很好地用三次方程进行描述,而温度影响方程的系数;当水分损失为15％时,石莼的Pmax增加至最大值,然后Pmax随进一步脱水而下降,在水分损失为80％时下降至0。温度对Pmax的影响在水生状态下比在气生状态下更大。气生状态下（充分水化）Pmax在10℃时显著小于水生状态下的值,而在30℃时则相反。在10℃时,气生干出时间在6 h 以内,或在20℃时,气生干出时间在2.2 h 以内,石莼的净碳固定量在气生状态下比在水生状态下要大;而在30℃时,在气生状态下的净碳固定量比总是小于在水生状态下的净碳固定量。认为石莼在低潮气生状态下与在高潮水生状态下光合特性及净碳固定存在差异,但这种差异与环境温度及叶状体的水分状态有关。     

乙型肝炎病毒X基因准种特点的研究

以乙型肝炎病毒(HBV)X基因序列的异质性表现来探讨HBV准种在慢性感染者中的存在状态.以中国株HBV基因序列为依据,设计特异性多聚酶链反应引物,自9例慢性HBV感染患者血清中扩增HBV X基因,克隆入pGEM Teasv质粒,随机挑选克隆进行DNA测序以确定病毒的变异程度.37例测序结果提示来源于不同患者HBV X基因序列高度保守,但每个序列均不一致.X区除了存在广泛的碱基点替换突变外,序列的缺失突变占测序克隆总数的51.4%(19/37);氨基酸缺失及移框突变多发生于123位氨基酸残基之后,可导致X蛋白多种羧基端形式.结果提示HBV长期携带者体内有HBV准种共存,X区内存在热点缺失突变区,该区突变结果可能影响X蛋白反式激活功能.     

CO2浓度变化对两种淡水绿藻的显微结构和超微结构的影响

为了探讨淡水绿藻在适应CO2党旗变化过程中细胞形态和结构的变化,通过普通显微镜和电子显微镜观察了在不同CO2浓度培养下的莱因衣藻（Chlamydomonas reinhardtii Dang）和斜生栅藻（Scenedesmus obliquus Kuetz）细胞。结果表明,CO2浓度变化对莱因衣藻细胞体积没有明显的影响,但斜生栅藻在低浓度CO2培养下细胞体积明显增大,并可见细胞内含有大量颗粒,两种绿藻细胞的超微结构显示,在低浓度CO2培养下,细胞内叶绿体数目明显减少,并可见明显的淀粉盘包围的蛋白核;细胞内还可见大量的淀粉粒。而在高浓度CO2培养下,这两种绿藻细胞内均未见明显的蛋白核和大量淀粉粒出现。     

和田维吾尔族人群Y染色体遗传多样性分析北大核心

[目的]分析和田维吾尔族人群Y染色体遗传多样性及与不同人群的差异。[方法]运用基因芯片技术检测860个Y-SNP位点,挑选相关位点利用Genomestudio进行分析。[结果]共检出24种单倍群。其中,单倍群R-M207和O-M175(38.10%、14.28%)在和田维吾尔族中具有较高的频率。主成分和聚类分析显示:和田维吾尔族人群与南亚、中亚、西部欧亚人群有较近的亲缘关系;与东亚、美洲、西伯利亚人群遗传结构之间差异比较大。[结论]1和田维吾尔族Y染色体SNP突变位点多样性丰富,其中主单倍群的多样性为55%。2和田维吾尔族Y染色体的两大主单倍群:R-M207(38.10%)和O-M175(14.28%)。3和田和吐鲁番两个维吾尔族群体单倍群频率和类型十分接近无显著性差异(F=0.833,P=0.367)。4和田维吾尔族人群的单倍群频率显示明显的亚欧混合现象。     

血浆内皮素及降钙素基因相关肽在颅脑手术患者中的检测分析

目的:观察颅脑手术患者血浆内皮素及降钙素基因相关肽在应激性胃黏膜损伤中的变化规律,探讨在应激状态下胃黏膜损害的可能机制。方法:监测15例颅脑手术患者的血浆内皮素及降钙素基因相关肽,并应用放射免疫法分点测定术前及术后血浆内皮素及降钙素基因相关肽含量。结果:15例颅脑手术病人手术前后血浆内皮素及降钙素基因相关肽比较有显著差异性(P<0.05)。结论:内源性内皮素及降钙素基因相关肽可能是应激性胃黏膜损伤的重要致病因子。