近红外标记的维甲酸类造影剂用于骨肉瘤成像的研究

目的:开发一种具有"找寻、治疗、可视"功能的生物造影剂。方法:采用化学合成的方法得到近红外标记的维甲酸类造影剂,并进行骨肉瘤细胞的体外结合试验;皮下接种裸鼠,构建骨肉瘤的异种移植模型,持续10d对裸鼠进行体内光学成像,观察药物在体内的重新分布,并最终用免疫组织化学法对成像结果进行验证。结果:体外细胞结合试验证明,合成的维甲酸造影剂可以很好的与人的骨肉瘤细胞相结合,进而内化。近红外光学成像表明,该造影剂可用于骨肉瘤的早期和晚期诊断。全身成像显示了在肿瘤和肝脏的高信号强度。正电子发射断层显像(PET)显示肿瘤部位具有较高水平的18F-FDG代谢。剂量增加反应和毒性试验表明,高剂量的维甲酸造影剂必然与其全身毒性息息相关。免疫组化染色显示,发光组织中肿瘤细胞呈阳性。结论:合成的近红外标记的维甲酸造影剂可以用于检测人类骨肿瘤的异种移植,实现个体化分子诊疗的同时减少全身毒性。     

microRNA-194模拟物对成骨肉瘤细胞系SOSP_9607生物学 特性的影响

目的:观察miR-194模拟物对于成骨肉瘤细胞系SOSP₉607细胞增殖、周期和凋亡的影响。方法:四甲基偶氮唑蓝（MTT）法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪测定细胞凋亡和周期。将SOSP₉607细胞分为对照组和实验组,对照组分为阴性对照和正常细胞对照组。实验组采用miR-194模拟物（hsa-miR-194mimics）转染成骨肉瘤细胞系SOSP₉607,增强SOSP₉607细胞内miR-194的活性。结果:与对照组比较,实验组细胞的增殖能力明显下降。实验组凋亡率（10.1±0.22）%与阴性对照组凋亡率（3.3±0.19）%相比明显增高（P<0.01）。与对照组比较,实验组细胞周期G0/G1细胞比例显著增加,G2/M期细胞比例显著减少,S期细胞比例显著减少（P<0.01）。结论:通过转染miR-194模拟物增强SOSP₉607细胞中miR-194的活性对SOSP₉607细胞的增殖和凋亡造成显著影响。     

周期性静水压对人软骨细胞IL-1β和MMP-3代谢的影响

目的：以正常成人软骨细胞及OA软骨细胞为研究对象,探讨在静水压作用下正常软骨细胞IL-1B和MMP-3代谢的变化,以及与OA软骨细胞之间的差异。同时观察在力学信号刺激下软骨细胞的IL-1β和MMP-3代谢有无相关性。方法：将体外培养的正常成人膝关节软骨第3代软骨细胞随机分为加压组和对照组。甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色进行细胞鉴定。将加压组细胞放入高压恒温静水压加压系统,冲入含有95％的空气和5％的CO2混合气体,以10MPa进行加压2h,共加压5d。分别于加压前、加压第3天、加压第5天后取加压组、对照组和OA组细胞培养液检测IL-1β、MMP-3含量。同时采用MTT法分析3组细胞的增殖情况。对三组细胞中IL-1β与MMP-3的水平做双变量相关分析,采用方差分析对三组标本间的IL-1β、MMP-3含量进行比较。结果：各组细胞IL-1β与MMP-3两者间存在正相关关系。OA组细胞中IL-1β与MMP-3含量高于加压组和对照组,加压组高于对照组。加压组、OA组软骨细胞的生长曲线与对照组相比增殖高峰降低,平台时间缩短。结论：10MPa间歇性静水压加压可抑制软骨细胞增殖,增加IL-1β与MMP-3分泌。     

膝关节限位矫形器对膝关节韧带损伤术后的康复作用

目的:观察膝关节限位矫形器在膝关节韧带损伤术后康复中的作用.方法:对52例膝关节韧带损伤患者应用膝关节限位矫形器辅助康复训练,进行康复评估.结果:52例患者配戴膝关节限位矫形器后均未发生严重并发症,术后随访10～24个月,平均(15.25±3.76)个月,Lysholm膝关节功能评分为78～93分,平均(81.23±5.82)分.国际膝关节文件编制委员会(IKDC)综合评定由术前显著异常(D级)26膝,改进为随访时正常(A级)8膝、接近正常(B级)14膝、异常(C级)4膝.结论:膝关节韧带损伤患者术后配戴膝关节限位矫形器对膝关节活动度、稳定性和整体功能康复均具有明显促进作用.     

microRNA-15a模拟物对人关节软骨细胞增殖与凋亡的影响

目的：近年来研究表明,关节软骨细胞凋亡在骨关节炎发病过程中起到了重要的作用,本文旨在探讨microma-15a模拟物对于原代人膝关节软骨细胞增殖与凋亡的影响。方法：取人外伤性截肢后的膝关节软骨,采用双酶消化法分离获得人膝关节软骨细胞,并进行体外培养,通过甲苯胺蓝染色和II型胶原免疫细胞化学染色进行软骨细胞鉴定。将培养的软骨细胞传代后取第l代细胞,分为实验组和对照组,实验组采用mir．15a模拟物（has．mir-15amimics）转染软骨细胞,上调软骨细胞内mir-15a的表达量;对照组分为阴性对照组、空白对照组。采用MTT法测定细胞增殖曲线,流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果：原代细胞中细胞呈多角形、圆形与梭型,贴壁生长;甲苯胺蓝染色胞质呈深蓝色,II型胶原染色胞质呈黄褐色,为特异性染色。经统计学分析,实验组与对照组相比增殖速率明显下降（P〈0．05）。实验组凋亡率（7．13％±0．57）与阴性对照组凋亡率（2．66％±0．15）相比明显增高（P〈0．05）。结论：采用双酶消化法成功分离并培养具有生物学特性的原代人膝关节软骨细胞,通过转染mir-15a模拟物外源性增加关节软骨细胞内mir．15a表达量可显著促进其凋亡并抑制其增殖,为阐明骨关节炎发病机制提供了新的理论依据,为’临床治疗提供了新的靶点。     

miR-15a和miR-16-1模拟物对人骨肉瘤细胞系SOSP-9607凋亡和增殖的影响

目的：探讨miR-15a和miR-16-1模拟物对于人骨肉瘤细胞系SOSP-9607凋亡和增殖的影响。方法：将SOSP-9607细胞分为实验组和对照组。实验组分为miR-15a组、miR-16-1组、miR-15a＋miR-16-1组。以miR-15a组为例,采用miR-15a模拟物（hsa-miR-15a mimics）上调SOSP-9607细胞内的miR-15a表达量。对照组分为阴性对照组和空白对照组。采用流式细胞仪测定细胞凋亡率,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定细胞增殖,并计算细胞增殖效率。结果：通过统计学分析,实验组凋亡率与阴性对照组凋亡率相比明显增高（P〈0.05）;实验组的细胞增殖率明显低于对照组（P〈0.05）。结论：上调SOSP-9607细胞内miR-15a和miR-16-1的表达量可促进SOSP-9607细胞的凋亡并抑制其增殖。     

近红外标记的维甲酸类造影剂用于骨肉瘤成像的研究

目的：开发一种具有＂找寻、治疗、可视＂功能的生物造影剂。方法：采用化学合成的方法得到近红外标记的维甲酸类造影剂,并进行骨肉瘤细胞的体外结合试验;皮下接种裸鼠,构建骨肉瘤的异种移植模型,持续10d对裸鼠进行体内光学成像,观察药物在体内的重新分布,并最终用免疫组织化学法对成像结果进行验证。结果：体外细胞结合试验证明,合成的维甲酸造影剂可以很好的与人的骨肉瘤细胞相结合,进而内化。近红外光学成像表明,该造影剂可用于骨肉瘤的早期和晚期诊断。全身成像显示了在肿瘤和肝脏的高信号强度。正电子发射断层显像（PET）显示肿瘤部位具有较高水平的18F-FDG代谢。剂量增加反应和毒性试验表明,高剂量的维甲酸造影剂必然与其全身毒性息息相关。免疫组化染色显示,发光组织中肿瘤细胞呈阳性。结论：合成的近红外标记的维甲酸造影剂可以用于检测人类骨肿瘤的异种移植,实现个体化分子诊疗的同时减少全身毒性。     

microRNA-194模拟物对成骨肉瘤细胞系SOSP_9607生物学特性的影响

目的：观察miR-194模拟物对于成骨肉瘤细胞系SOSP_9607细胞增殖、周期和凋亡的影响。方法：四甲基偶氮唑蓝（MTT）法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪测定细胞凋亡和周期。将SOSP_9607细胞分为对照组和实验组,对照组分为阴性对照和正常细胞对照组。实验组采用miR-194模拟物（hsa-miR-194mimics）转染成骨肉瘤细胞系SOSP_9607,增强SOSP_9607细胞内miR-194的活性。结果：与对照组比较,实验组细胞的增殖能力明显下降。实验组凋亡率（10.1±0.22）%与阴性对照组凋亡率（3.3±0.19）%相比明显增高（P〈0.01）。与对照组比较,实验组细胞周期G0/G1细胞比例显著增加,G2/M期细胞比例显著减少,S期细胞比例显著减少（P〈0.01）。结论：通过转染miR-194模拟物增强SOSP_9607细胞中miR-194的活性对SOSP_9607细胞的增殖和凋亡造成显著影响。     

卵巢切除术构建大鼠骨关节炎合并骨质疏松模型的可行性

目的:尝试用单纯卵巢切除术建立骨性关节炎(OA)合并骨质疏松症(OP)动物模型。方法:对SD大鼠应用卵巢切除法进行骨性关节炎与骨质疏松模型的制作,饲养过程中进行不同强度的驱赶,3个月后收获大鼠组织标本。通过大体标本、组织切片以及改良Mankin评分系统对关节炎进行评价,应用双能X线对骨质疏松进行评价。结果:三组模型大鼠出现不同程度关节软骨层变薄,骨皮质松解,骨小梁稀疏、排列紊乱等骨质疏松和骨关节炎病变表现;卵巢切除+强驱赶组移行层受损严重,炎性细胞浸润,毛细血管侵入钙化层和潮线;Mankin评分显示各模型组出现不同程度的骨关节炎病变表现;三组模型大鼠骨密度较假手术对照组大鼠均明显下降(P0.05)。结论:单纯卵巢切除术可以用于骨性关节炎合并骨质疏松症动物模型的建立。     

不同场强下IRE的肿瘤消融作用及对抗肿瘤免疫的影响

目的:探讨不同电场强度的不可逆电穿孔(IRE)对于肿瘤的消融效果以及其所引起的肿瘤免疫反应。方法:将B16黑色素瘤细胞接种于C57小鼠,制作黑色素瘤小鼠模型,应用不可逆电穿孔仪对肿瘤进行消融,通过测量肿瘤生长大小研究不同场强下的消融效果。通过CD4、CD8a免疫组化染色初步了解不同场强激发的免疫反应的强弱,从而选择最佳消融参数。结果:随着电场强度增加,肿瘤消融效果逐渐趋于理想,然而平板电极夹之间过高电场引发的热效应则不利于后续抗肿瘤免疫反应的激活。选择合适的电场,通过增加电击组数可以达到良好的治疗效果。结论:IRE对肿瘤的消融优势在于它能够很好的激活机体的抗肿瘤免疫反应,因此,选择合适的电场增加电击组数可以起到很好的抗肿瘤作用,具有很好的应用前景。