Nuclear reassembly in vitro is independent of nucleosome/chromatin assembly

Ｃｈｒｏｍａｔｉｎｉｓｍａｄｅｕｐｏｆｒｅｇｕｌａｒｌｙｓｐａｃｅｄｓｕｂｕｎｉｔｓ,ｎｕｃｌｅｏｓｏｍｅｓ.Ｉｎｅｕｋａｒｙｏｔｉｃｃｅｌｌｓ,ｃｈｒｏｍａｔｉｎｉｓａｓｓｅｍｂｌｅｄｉｍｍｅｄｉａｔｅｄｌｙａｆｔｅｒＤＮＡｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ,ｂｕｔｉｎｃｅｌｌｆｒｅｅｓｙｓｔｅｍｓ,ｉｔｃａｎｂｅａｓｓｅｍｂｌｅｄｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｏｆＤＮＡｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎｗｈｅｎｅｘｏｇｅｎｏｕｓＤＮＡｗａｓａｄｄｅｄｔｏｅｇｇｏｒｏｏｃｙｔｅｅｘｔｒａｃｔｓｏｆＸｅｎｏｐｕｓｌａｅｖｉｓ.Ｔｈｅ…     

植物细胞核基质(Nuclear Matrix)的形态结构及其NuMA蛋白成分的研究

应用细胞选择性抽提并结合DGD包埋去包埋剂电镜技术对植物细胞核基质的形态结构进行了观察。结果显示胡萝卜悬浮培养细胞、银杏花粉细胞和精子细胞的细胞核内存在一个非染色质性的纤维蛋白网络体系。免疫荧光染色结果说明植物细胞核基质中含有与动物NuMA多抗交叉反应的多肽。免疫印迹反应显示胡萝卜悬浮培养细胞核基质蛋白与NuMA蛋白多抗的阳性反应条带为74KD和76 KD;银杏花粉细胞只有78 KD一条阳性带。以动物核基质NuMA蛋白保守杆状区的cDNA片段作为探针,与白菜子叶总DNA进行Southern杂交的结果表明植物细胞基因组中含有动物NuMA蛋白cDNA的同源序列。     

Relation between nuclear envelope and nuclear lamina in nuclear assembly in vitro

Xenopus laevis egg extracts cell-free nuclear assembly system was used as an experimental model to study the process of nuclear lamina assembly in nuclear reconstitution in vitro. The experimental results showed that lamin was involved in the nuclear assembly in vitro. The assembly of nuclear lamina was preceded by the assembly of nuclear matrix, and probably, inner nuclear matrix assembly provided the basis for nuclear lamina assembly. Inhibition of normal assembly of nuclear lamina, by preincubating egg extracts cell-free system with anti-lamin antibodies, resulted in abnormal assembly of nuclear envelope, suggesting that nuclear envelope assembly is closely associated with nuclear lamina assembly.     

核体合成自身DNA与病毒DNA的能力

近年来,用松胞素B(简称CB)诱导细胞去核的技术已被许多学者应用于细胞内大分子代谢及其调控过程的核质关系研究中(Colonne et al.,1980;Premveer et al.,1980;White et al., 1982)。我们在对CB诱导的去核产物的研究基础上(何大澄等1982),对核体内RNA的合成进行了研究,表明核体合成RNA的能力与核体贴壁和所带质膜的完整性以及胞质量多少有关(戎宪辉等1984)。此外,我们还研究了两种小RNA病毒和痘病毒的核酸在胞质体内的复制,证明它们的复制可以不依赖细胞核     

植物核纤层的精细结构及其体外装配

以银杏精子细胞为材料 ,用高分辨率的低压扫描电镜对精子细胞核纤层的精细结构进行了观察 .结果显示其核纤层是由 1 0nm纤维构成的精细网络 .用胡萝卜悬浮培养细胞分离纯化得到的核纤层蛋白进行体外装配分析 .观察到装配好的植物核纤层蛋白纤维较长 ,单丝直径为 8～ 1 2nm .有些纤维清晰可辨是由亚纤维构成 .免疫印迹反应证明装配好的纤维含有 6 6和 84ku的核纤层蛋白多肽 .说明植物细胞核纤层蛋白可在体外自组装     

Nuclear lamina in plant cells

By using selective extraction and diethylene glycol distearate (DGD) embedment and embedment-free electron microscopy, the nuclear lamina was demonstrated in carrot and Ginkgo male generative cells. Western blotting revealed that the nuclear lamina was composed of A-type and B-type lamins which contained at least 66-ku and 84-ku or 66-ku and 86-ku polypeptides, respectively. These lamin proteins were localized at the nudear periphery as shown by immunogold-labelling. In situ hybridization for light microscope and electron microscope showed that plant cells have the homologous sequences of animal lamin cDNA. The sorting site of lamin mRNA is mainly distributed in the cytoplasm near the nudear envelope. The data have verified that there indeed exists nudear lamina in plant cells.     

PtK2细胞的核骨架—核纤层——中间纤维体系

本文用选择性系列抽提的方法结合整装细胞电镜技术和DGD包埋-去包埋超薄切片技术,在电镜下清晰地显示了PtK 2细胞的核骨架-核纤层-中间纤维体系的精细结构。处于分裂中期的细胞经抽提后可以看到,染色体残余与中间纤维仍然保持一定的联系。用免疫荧光技术对抽提后的PtK 2细胞进行分析结果表明:其中间纤维能同时与AE1和AE3反应;能与Lamin B反应的单抗可以特异地定位于其核周,而Lamin A(C)的单抗除了与其核纤层蛋白有很强的反应外还与中间纤维有交叉反应。此外,在分裂期细胞中可以看到Lamin A(C)可能与染色体能特异结合;与HeLa细胞不一样。PtK 2细胞的核骨架成份不能与280kD的核骨架蛋白单抗反应。双向电泳结果显示出PtK 2细胞的核骨架-核纤层-中间纤维体系的组成成份与HeLa细胞相比有较大的差异,而且这种差异主要反映在核骨架组份上,TdR的处理也能导致其组份发生变化。     

非细胞体系核重建过程中两类膜泡在环形片层及核被膜形成中的作用

非洲爪蟾卵经钙离子载体A 23187激活后,在10,000g下离心得到爪蟾卵提取物。Lambda DNA加入上述提取物可构建出染色质结构,并在染色质表面重建核被膜,同时在染色质外的区域形成环形片层。核被膜与环形片层有相似的发生途径,它们都是由两类在形态、大小、膜结构上有明显差别的膜泡融合而来。首先是直径200nm的圆形小膜泡相互融合成双层膜片层,同时核孔复合体在双层膜上大量装配,以这些双层膜片层为基础,光滑的大膜泡与之融合导致环形片层的扩张与核被膜的成熟。     

痘苗病毒的复制与中间纤维的关系

应用细胞选择性抽提与核酸点杂交技术业示,痘苗病毒的DNA 存在于中间纤维-核纤层-核基质组分(IF-L-NM)中。进而用DGD包埋-去包埋和电镜放射自显影技术相结合,结果表明新合成的病毒的DNA 优先结合在中间纤维上。在此基础上采用DNA 与蛋白质的体外吸附杂交实验,进一步说明痘苗病毒DNA序列与中间纤维及某些核基质蛋白质有较高的亲和性。     

辛德毕斯病毒在BHK—21细胞中繁殖过程的研究

辛德毕斯病毒(Sindbis virus)在BHK—21细胞中繁殖的一步生长曲线表明,病毒感染后2小时便可产生大量的子代病毒;感染后6小时,病毒滴度达到最高峰,为109TCID50/ml电镜技术显示了病毒粒子的形态结构与形态发生过程。本文还对SbV的代谢合成动态及对宿主细胞的影响进行了研究和讨论。