Kit无义突变致W~(-3Bao)小鼠生殖腺异常及纯合子贫血死亡

W-3Bao是本研究组通过诱变获得、Kit无义突变的白斑小鼠.突变基因杂合子小鼠腹部、四肢肢端及尾尖白化,其部分精曲小管内无精原细胞.突变纯合子小鼠在胚胎后期色泽苍白、个体矮小,于出生前后死亡;血液学检查发现纯合子小鼠血色素极低且红细胞变大:18.5天胚胎的连续切片可见精曲小管轮廓欠清晰,精原细胞分散分布于睾丸间质,未迁入精曲小管:卵巢结构紊乱,无明显的原始卵泡结构;骨髓等器官组织未见显著异常.结论:Kit无义突变不仅导致了W-3Bao杂合子小鼠白斑形成及纯合子小鼠贫血死亡,同时影响生殖腺发育.     

绿茶多酚对小鼠皮肤伤口愈合时白介素-1β表达的影响

表没食子儿茶素-3-没食子酸酯[（-）-epigallocatechin-3-gallate,EGCG]是绿茶多酚的主要成分,具有抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、抗炎症和杀菌等多种生物学效应。本文通过组织学、ELISA和RT—PCR技术研究了EGCG对皮肤伤口愈合期间损伤部位白介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）基因表达及IL-1β分泌水平的影响效应。结果表明EGCG（50mg／L）处理72h后损伤部位的IL-1β基因表达受到抑制、IL—1β含量下降,而早期（24h内）EGCG（50mg／L）处理对IL-1β基因表达以及IL-1β的含量没有显著性影响。     

原发肾上腺淋巴瘤1例并文献复习

目的:探讨原发肾上腺淋巴瘤(PAL)的临床特点,提高对该病的认识.方法:对1例原发肾上腺淋巴瘤患者的资料进行分析,并结合国内外相关文献进行总结.结果:原发肾上腺淋巴瘤好发于老年男性,可表现为局部症状如腹痛,腰痛,也可表现为乏力,发热,体重减低等全身症状,50%病人可出现肾上腺功能不全的症状.一些病人是在行影像学检查时因偶然发现肾上腺的肿物,经病理检查而确诊的.该病多累及双侧肾上腺,最常见的病理类型是弥漫大B细胞型.原发肾上腺淋巴瘤的治疗包括手术、化疗、放疗以及它们的不同组合.该病恶性程度高,进展迅速,预后差.结论:原发肾上腺淋巴瘤虽然少见,但在肾上腺肿瘤,尤其是快速增长的肾上腺肿瘤的鉴别诊断中应考虑到它的可能,及时进行病理检查可尽早确诊.     

新生隐球菌漆酶的原核表达

目的构建含His-tag的新生隐球菌漆酶的原核表达载体并表达鉴定。方法利用PCR技术扩增LAC1基因的编码序列,将其正确插入pET-28a(+)载体中得到重组质粒,转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞后进行PCR鉴定及基因测序。将正确重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,通过不同条件进行诱导表达,用SDS-PAGE电泳及MALDITOF质谱检测并鉴定目的蛋白质。通过尿素对包涵体蛋白进行变性,并对变性后的蛋白进行SDS-PAGE电泳及MALDITOF质谱检测。结果成功构建含His-tag的新生隐球菌漆酶的原核表达载体,PCR鉴定呈阳性且基因测序结果与目的序列一致,SDS-PAGE显示在大肠杆菌BL21中成功诱导表达出相对分子质量(Mr)约为68 000的目的蛋白,经MALDITOF质谱鉴定目的蛋白在此表达系统中不可溶,可能以包涵体形式存在。结论成功构建含His-tag的新生隐球菌漆酶的原核表达载体,为进一步纯化并解析新生隐球菌漆酶的晶体结构奠定了基础。     

分泌抗PRRSV抗体的猪源单克隆B细胞永生化方法的建立

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)引起的高度接触性传染疾病,对社会经济造成重大损失。目前并未获得有效的中和抗体应用于科研及治疗中,所以建立一种筛选具有中和活性的单克隆抗体的方法,对PRRSV防治及抗原位点筛选具有重要意义。单克隆抗体在人类和动物的众多疾病治疗及诊断中得到广泛应用,而针对不同病原如何筛选出有效的中和抗体是目前急需解决的问题。在单克隆抗体筛选的众多方法中,B细胞永生化方法是一种有效的且大概率能获得单克隆中和抗体的方法。通过将bcl-6和bcl-xl两个基因中间通过f2a序列连接后构建到一个载体上,进行逆转录病毒包装。包装成熟的逆转录病毒感染免疫PRRSV的猪源淋巴细胞,并使用加入CD40L和IL21细胞因子的完全培养基培养,然后使用CD21作为筛选标记通过磁珠法进行B细胞筛选,最后对筛选得到的B细胞单克隆化并进行检测,验证是否有抗体分泌。结果...     

美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光重组酶聚合酶扩增技术（RPA）检测方法的建立及其应用

美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）在我国出现了多种基因亚型毒株混合流行和重组的复杂变化，其引起的猪繁殖与呼吸综合征（PorcineReproductiveand Respiratory Syndrome,PRRS）已成为危害程度仅次于非洲猪瘟的重要疫病。为建立一种快速而敏感性高的美洲型PRRSV检测方法，本研究分析了国内美洲型全基因组序列，利用重组酶聚合酶扩增技术（Recombinase Polymerase Amplification,RPA），设计合成特异性引物和探针，优化反应体系和条件，建立美洲型PRRSV实时荧光RPA检测方法，通过特异性、敏感性、重复性试验及田间样品的比对检测，评价该方法的检测能力，并测定和分析了田间阳性样品的ORF5基因序列。结果显示，该方法在42℃、20 min内即可完成检测，最低检测美洲型PRRSV载量为50拷贝/μL，且与欧洲型PRRSV、口蹄疫病毒、猪瘟病毒、塞内卡病毒、非洲猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒、猪流行性腹泻病毒无交叉反应，特...