植物孤基因研究进展

孤基因(orphan genes)处在一个特殊的进化分支上,和其他任何已鉴定的基因没有显著的序列相似性。孤基因普遍存在于每个物种中,比较基因组学分析发现所有已测序的物种中均包含一部分孤基因,不同的筛选条件所获得的数量不等。孤基因经常与各种胁迫响应、物种特异性进化和物质代谢调节相关联。但多数孤基因没有被很好的注释,甚至没有可以被识别的功能结构域,为孤基因的功能表征带来了一定困难。相对于保守基因而言,孤基因的研究较少,这就导致了孤基因的重要性可能被“埋没”。本文从孤基因起源与进化、植物孤基因筛选及功能等方面进行了综述,并分析了目前存在的挑战和未来的研究重点与解决方案,以期为研究孤基因功能及其作用机制提供理论基础。     

两端融合表达几丁质结合结构域提高几丁质酶抗真菌活性

【目的】通过两端融合表达几丁质结合结构域来提高几丁质酶的活性和生物防治植物病原真菌能力。【方法】以苜蓿链霉菌(Streptomyces alfalae)ACCC40021中唯一的GH19家族几丁质酶为模板,构建两端融合表达几丁质结合结构域的几丁质酶,并进行原核表达;利用3,5-二硝基水杨酸法(DNS)测定几丁质酶活。【结果】成功构建了CatD_(ChiB) (催化结构域)、rChiB (含N-端几丁质结合结构域)、DChBD_(ChiB)(含两端几丁质结合结构域)三种形式的酶,并在大肠杆菌中得到了高效表达;与CatD_(ChiB)和rChiB相比,DChBD_(ChiB)显著地提高了对α-几丁质、胶体几丁质和黑曲霉几丁质的结合能力和活性;同时增强了其对病原真菌长枝木霉的抑制作用。【结论】两端融合表达几丁质结合结构域是简单有效的提高几丁质酶活性及抗真菌活性的策略。     

4种饮用水对小鼠固有免疫及T细胞亚群的影响

为了探讨4种饮用水对小鼠固有免疫及T细胞亚群的影响,本研究将ICR小鼠按体重随机分为4组,分别为纯水组、过滤水组、自来水组和矿泉仿生水组,每组20只,雌雄各半,共4批。各组小鼠自由饮水摄食90 d,分别进行碳廓清实验和腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验,应用LDH法检测NK细胞活性,同时测定胸腺和脾脏指数,应用血细胞分析仪检测外周血白细胞和中性粒细胞计数,采用流式细胞术检测T细胞亚群CD4+和CD8+百分比,并计算CD4+/CD8+比值。研究显示,各组小鼠的体重增长、胸腺指数、脾脏指数、吞噬指数α、外周血白细胞计数、中性粒细胞计数、小鼠脾细胞表面标志物CD4+百分比和CD8+百分比差异均无统计学意义(p0.05);过滤水组腹腔巨噬细胞吞噬指数、NK细胞活性高于纯水组和矿泉仿生水组(p0.05);自来水组NK细胞活性高于过滤水组、纯水组和矿化水组(p0.05);过滤水组吞噬率高于矿泉仿生水组(p0.05);自来水组、过滤水组、矿泉仿生水组的小鼠CD4+/CD8+比值均高于纯水组(p0.05);其余各组间无统计学差异。本研究表明,长期饮用过滤水对小鼠固有免疫有一定的促进作用,此外,过滤水和矿泉仿生水对小鼠T淋巴细胞亚群CD4+/CD8+比值有提高作用。     

萝卜硫素诱导RASD1的表达促进宫颈癌HELA细胞凋亡及周期阻滞的机制研究

目的:探讨萝卜硫素靶向RASD1,对宫颈癌细胞(HELA)凋亡及周期的影响机制。方法:不同浓度的萝卜硫素(SFN)作用于HELA细胞48h,采用CCK-8法检测SFN对HELA细胞增殖的影响;采用RT-PCR法检测SFN对RASD1基因mRNA表达水平的影响;采用Western印迹法检测SFN对RASD1蛋白表达水平的影响;采用流式细胞技术检测加药以及过表达RASD1对HELA细胞凋亡及周期的影响,采用Western blot检测HELA中cleaved-caspase3和cleaved-parp相关凋亡蛋白以及p21和cdc2周期相关蛋白的影响。结果:SFN抑制宫颈癌细胞增殖,且加药组中RASD1的mRNA和蛋白表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。流式细胞凋亡分析结果提示:加SFN或是过表达RASD1细胞组凋亡率明显高于对照组,Western blot结果表明加SFN或过表达RASD1后细胞cleaved-caspase3以及cleaved-parp蛋白水平升高,差异具有统计学意义(P0.05);ModFit LT软件分析结果表明加SFN或过表达RASD1细胞S期显著低于对照组,G2/M期细胞增多,同时Western blot结果示p21蛋白的表达水平增高,而cdc2蛋白表达降低,其差异有统计学意义(P0.05)。结论:在宫颈癌HELA细胞中RASD1作为SFN的作用靶点,诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞。     

北五味子果实中果胶的超声提取工艺研究

采用超声波法提取北五味子果实中的果胶成份,咔唑-浓硫酸显色法测果胶得率,并应用正交试验设计对其提取工艺参数进行了优化。试验结果表明:各因素对北五味子果胶提取的影响顺序依次为超声功率提取温度料液比提取时间,最佳工艺参数为超声功率200 W,提取温度为65℃,料液比为1∶30,提取时间为50 min,果胶提取率为6.32%。     

苍白球电毁损对帕金森病大鼠HVSs 振荡波的影响研究

目的:应用直流电核团毁损术毁损帕金森病(PD)大鼠模型的内侧苍白球(GPi),记录其手术前后脑电生理活动的变化,以探讨内苍白球射频毁损术治疗PD的可能机制。方法:成年SD大鼠随机分为GP毁损组、假手术组及正常组。对PD毁损组和假手术组大鼠采用6-羟基多巴胺(6-OHDA)右侧黑质致密部(SNc)、中脑腹侧被盖区(VTA)两点注射法建立PD大鼠模型,并经腹腔注射阿扑吗啡(APO)诱发旋转以对模型建立进行评价。通过多导联宏电极在体脑电生理记录技术对各组大鼠进行右侧(注射侧)大脑皮层M1、M2区脑电及纹状体场电位的连续24小时记录,同时进行视频录像。对GP毁损组大鼠行直流电GPi毁损术,术后4天对各组大鼠均行阿扑吗啡诱导旋转行为检验,继续记录脑电活动,记录数据经频率谱分析及相干分析以揭示各记录位点信号的频率成分以及不同位点神经元集群间的功能连接和同步性。结果:对GP毁损组大鼠毁损术前后在清醒静息状态下的皮层脑电和纹状体场电位有明显改变,术后HVSs(High Voltage Spindles)在持续时间上明显缩短发作次数明显减少;对各组大鼠术后在静息状态下的脑电信号进行对比,GP毁损组大鼠较假手术组的HVSs持续时间和发作频率均减少并接近正常组大鼠水平,相干性分析显示GP毁损组大鼠术后在HVSs频段(5-13Hz)上的相干程度显著小于假手术组。结论:在清醒静息状态下6-OHDA建立的PD大鼠皮层-基底节环路上HVSs持续时间延长发生频率增高,经GP毁损术后其时间缩短发作次数减少同步性降低并接近正常水平,从而改善PD症状,该现象可能解释临床采用苍白球射频毁损术治疗PD的治疗机制。     

禄丰樟木箐州级自然保护区药用维管植物资源多样性分析

目的:为掌握禄丰樟木箐州级自然保护区的药用维管植物资源现状及其组成特点,提高对保护区植物资源的就地保护和合理利用水平.方法:基于20余年积累的数据,编制保护区药用维管植物资源数据库,对科属种特征、生活型组成、药用部位、药用功效等进行分析.结果:(1)樟木箐自然保护区药用维管植物共有158科462属741种.少种科的科数...     

大鼠骨骼肌卫星细胞诱导分化为胰岛素生成细胞的研究

目的探讨大鼠骨骼肌卫星细胞（MDSCs）定向诱导分化为胰岛素生成细胞（IPCs）,为1型糖尿病的干细胞治疗提供一种新的研究思路。 方法通过二次酶消化法和差速贴壁培养法分离、培养大鼠MDSCs,利用不同的诱导培养液使MDSCs定向分化为IPCs,并对诱导后细胞进行形态观察,通过双硫腙染色和免疫组化染色对MDSCs-IPCs形态进行鉴定,采用Q-PCR和Western Blot方法检测MDSCs-IPCs中C-peptide和Insulin的表达,通过胰岛素释放实验检测MDSCs-IPCs的生物学功能,β细胞和MDSCs-IPCs两组间比较采用t检验。 结果MDSCs在接种4 h后开始贴壁部分细胞伸出小的突起,48 h后绝大多数细胞贴壁呈梭形、胞浆丰富、折光度高。随着培养时间的延长,细胞的梭形形状更为明显且生长迅速。免疫组化结果显示细胞表达Desmin、α-Sarcomeric Actinin、MyoD1、Myf5和PAX7。成胰诱导后MDSCs形成胰岛样的圆形细胞团,双硫腙染色呈猩红色,Insulin免疫组化染色阳性。Q-PCR结果显示MDSCs-IPCs中C-peptide和Insulin mRNA表达量分别是β细胞的0.73倍（P > 0.05）和0.79倍（P > 0.05）。胰岛素释放实验显示,5.6 mmol/L和16.7 nmlol/L葡萄糖刺激培养2 h后,β细胞和MDSCs-IPCs分泌胰岛素量分别为[（20.3±4.2）mU/L]、[（16.1±3.7）mU/L]、[（60.5±9.3）mU/L]和[（40.9±7.3）mU/L],葡萄糖可调节MDSCs-IPCs胰岛素的分泌。 结论MDSCs易于分离培养、增殖能力强,体外可诱导分化为有功能的IPCs,适合作为再生医学的种子细胞。     

粗茎鳞毛蕨应用的研究

为开发利用粗茎鳞毛蕨(Dryopteris crassirhizoma Nakai)的药用和观赏价值、提高其质量和产量,对其进行了人工有性繁殖和复壮研究.在大批量人工有性育苗的基础上,予以分组复壮、对照栽培.筛选出了经济简便的技术路线,观察了形态发育与栽培条件的相关性.     

表没食子儿茶素没食子酸酯对蛛网膜下腔出血大鼠脑损伤的保护作用研究

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对蛛网膜下腔出血(SAH)脑损伤的影响及其可能机制。方法:选取健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠80只,按照随机数字表法分为假手术组(Sham组)、SAH组、SAH+EGCG组、蛛网膜下出血+生理盐水组(SAH+NS组),每组各20只。SAH造模成功后1d、3d,检测大鼠神经功能评分及脑组织含水量;造模成功3d后,脑组织石蜡切片HE染色观察脑细胞形态,并采用超敏C-反应蛋白(hs CRP)试剂盒检测血清hs CRP水平,通过Western blotting检测脑组织脑源性神经生长因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)及与其高度亲和的酪氨酸激酶受体B(tropomyosin-related kinase B,TrkB)的表达。结果:(1)SAH+EGCG组神经功能评分较Sham组明显降低,但较同期SAH组增高明显(P0.05);(2)与Sham组比较,SAH+EGCG组脑组织含水量明显增加,但与同期SAH组比较,SAH+EGCG组脑组织含水量明显降低(P0.05);(3)与SAH组比较,SAH+EGCG组血清hs CRP水平明显降低(P0.05);(4)与SAH组比较,SAH+EGCG组脑组织石蜡切片HE染色神经细胞水肿明显减轻,且坏死神经元减少,细胞核固缩明显减轻;(5)与SAH组比较,SAH+EGCG组脑组织BDNF、TrkB的表达量明显升高(P0.05)。结论:EGCG能够有效的保护大鼠SAH后的脑损伤,促进神经功能修复,减轻预后神经功能障碍,可能与其促进脑组织BDNF、TrkB的表达有关。