三尖杉酯碱诱导HL-60细胞程序性死亡过程中的细胞质和细胞核出泡与染色质凝集

本文利用视频显微影像反差增强技术(VideoEnhancement Contrast,VEC)对三尖杉酯碱诱导的单个HL-60活细胞程序死亡(Apo-ptosis,Apo)全过程进行了观察,结果表明每个Apo细胞在染色质凝集前都要发生细胞核的出泡,而每一个核出泡又都是由相应的质出泡所诱导的,但并不是每个质出泡都能诱导核出泡,质出泡的次数远远高于核出泡,提示核、质出泡可能与染色质凝集有关,并且核、质出泡是程序死亡细胞形成Apo小体所必需的。进一步研究则说明核、质出泡与微丝解聚和重组有关。核、质出泡虽可加速细胞程序死亡过程中的染色质凝集,但并不是程序死亡细胞染色质凝集所必需的,提示HL-60细胞程序死亡过程中的核变化和质变化可能是相对独立的。     

Taxol诱导CHO细胞微核化的动态分析

本实验观察到10μM Taxol对CHO细胞的G_1→S→G_2→M期的进程不产生影响,但使CHO的有丝分裂中期大大延长,不能形成纺锤体,凝集的染色体散在于胞质中,不形成中期板。经Taxol处理的CHO细胞的TM要比正常CHO细胞TM长13倍,不能完成胞质分裂,形成带有3—15个微核的细胞,最小的微核只含有1个染色体的DNA含量,微核化细胞形成率可高达96%左右。微核化细胞可进入下一个细胞周期,形成更多微核的细胞。用1×10~(-4)M二硝基苯酚(DNP)不影响微核化细胞的形成,加进10微克/毫升环己亚胺后7小时使微核化细胞形成速率减慢。     

平阳霉素(争光霉素A_5)对艾氏腹水癌细胞核酸代谢及其作用机制之探讨

艾氏腹水癌小鼠腹腔内注入平阳霉素1/6半致死剂量,腹水癌细胞DNA合成受到抑制。随注入药物时间之延长,DNA合成呈直线下降。但在同一剂量和时间条件下,对腹水癌细胞RNA合成率没有影响。通过放射自显影和MPV Ⅱ显微分光光度计,测定了S期细胞百分数和单个S期细胞中~3H-TdR放射自显影银粒,说明DNA合成率之抑制不是由于S期细胞百分数之降低,而是由于单个S期细胞中DNA合成强度之下降。进一步用MPV Ⅱ显微分光光度计对同一S期细胞中放射自显影银粒和孚尔根萤光定量测定,发现平阳霉素能引起早S期细胞积累;同时早S期细胞DNA合成抑制也较为明显。说明早S期细胞对平阳霉素较为敏感。其机制可能与早S期细胞合成之DNA富含GC组分有关。这与博莱霉素优先和富含GC组分的多聚核苷酸结合的结果是一致的。     

三种蛋白磷酸酶抑制剂对A_（23187）诱导的HL－60细胞程序性死亡的影响

钙离子载体Ａ２３１８７可以引起细胞内Ｃａ２＋浓度升高,并可诱导某些细胞程序死亡。本文发现１ｇ／ｍｌＡ２３１８７作用于ＨＬ－６０细胞４小时即可诱导程序死亡,以无毒性浓度的蛋白磷酸酶２Ｂ（ＰＰ２Ｂ）的抑制剂环抱菌素Ａ（ＣｓＡ）（０．５－３ｇ／ｍ１）预处理可以抑制Ａ２３１８７诱导的ＨＬ－６０细胞程序死亡,磷酸酶１、２Ａ、２Ｃ的抑制剂ｏｋａｄａｉｃａｃｉｄ（ＯＡ）和酪氨酸磷酸酶的抑制剂钒酸钠（ｓｏｄｉｕｍｏｒｔｈｏｖａｎａｄａｔｅ,ＳｏＶ）则无此效应。流式细胞术测定群体细胞内总Ｃａ２＋变化发现,ＣｓＡ不抑制Ａ２３１８７诱导的胞内Ｃａ２＋浓度升高,表明ＣｓＡ作用于Ｃａ２＋升高后的下游事件。     

Ca2+参与水霉菌丝细胞壁修饰的证据

以细胞壁崩溃酶-Driselflse短时间处理水霉(Saprozegma ferax)菌丝,pH5．0时可使原生质从菌丝亚顶端喷出,pH6．0～8．0时则不导致该现象发生;适当浓度EGTA的存在,可提高pH5．0时酶解引起的原生质喷出频率、使pH6．0～8．0时生长菌丝的顶端原生质也喷出、并且喷出多发生在菌丝最顶端;外加CaCl₂．不抑制菌丝顶端原生质的喷出,排除了Ca²⁺抑制酶活性的可能。随后的跟踪观察显示,长时间以缺Ca²⁺培养介质培养菌丝,同样能够导致菌丝顶端原生质喷出。上述研究结果表明,培养介质中Ca²⁺和H⁺对菌丝完整性的维持起调节作用,细胞壁上的Ca²⁺可能参与了水霉菌丝细胞壁物理特性的修饰。     

pH影响Ca~(2 )和EGTA对水霉(Saprolegnia ferax)菌丝顶端生长的作用效应

水霉(Saprolegia ferax)菌丝在pH6.0-8.0的OM液体培养基中生长良好,在pH5.0时生长速率有所下降,在pH3.0—4.0时停止生长。短时间(30min)作用研究表明,低浓度的CaCl_2促进pH5.0(1—5mmol/L)和pH6.0(1mmol/L)条件下的菌丝顶端生长,抑制pH7.0—8.0条件下的菌丝生长。1mmol/L以上的EGTA则抑制pH5.0条件下菌丝顶端生长,促进pH6.0—8.0条件下的菌丝顶端生长。但CaCl_2和EGTA都不能使pH3.0—4.0条件下的菌丝恢复生长。长时间(8h)作用跟踪观察表明,2mmol/L EGTA(pH6.8)短时间作用可促进菌丝生长,但随着培养时间延长,则产生抑制作用,并诱导原生质从菌丝最顶端喷出。说明细胞壁Ca~(2 )起着提供胞外Ca~(2 )源和细胞壁修饰成分的双重作用。Ca~(2 )通道阻断剂verapamil对菌丝顶端生长的抑制作用也说明顶端生长所需的Ca~(2 )来自胞外。     

在ts-RSV LA90细胞转化过程中钙流变化的研究

本文以ts-RSV LA90细胞为模型,用放射性同位素示踪技术测定了通过细胞质膜的~(45)Ca~(2+)流水平;同时用钙指示剂Indo-1 AM和光学多道分析仪测定了胞内[Ca~(2+)]_i,初步研究了Ca~(2+)流和[Ca~(2+)]_i在v-src基因引起细胞转化过程中的动态变化。结果表明LA90细胞质膜上~(45)Ca~(2+)流的改变是细胞转化过程中可以检测到的早期事件之一,转化状态(33℃)细胞的~(45)Ca~(2+)流大于正常状态(40℃)的,细胞从正常到转化(40℃→33℃)的25分钟内~(45)Ca~(2+)流就有明显增大。TMB-8可以抑制转化引起的~(45)Ca~(2+)流出的增大,小牛血清可以刺激正常状态细胞的~(45)Ca~(2+)流出增大,~(45)Ca~(2+)流出与温度有一定依赖关系;细胞转化引起的~(45)Ca~(2+)流入增大,可被异博定抑制,~(45)Ca~(2+)流入不受温度的影响。LA90细胞[Ca~(2+)]_i在转化早期有明显升高,并维持在较正常细胞高2—3倍的水平,A23187-Br可提高正常LA90细胞[Ca~(2+)]_i,[Ca~(2+)]_i不受温度的影响。从质膜上~(45)Ca~(2+)流和[Ca~(2+)]_i的增大说明转化细胞虽然对胞外Ca~(2+)浓度依赖性下降,但维持增殖及转化状态仍然需要一定的胞外Ca~(2+),并通过提高质膜Ca~(2+)流入和释放内源性Ca~(2+),使转化细胞[Ca~(2+)]_i维持在较高水平上。LA90细膜质膜上~(45)Ca~(2+)流和[Ca~(2+)]_i的增大在细胞转化中起着重大作用。     

活细胞的离心淘洗分离

离心淘洗的原理是当外向的离心力和内向的流力与浮力之间达到平衡时,由于不同大小的细胞具有不同的沉降系数,它们分别停留在一定的位置,从而可通过淘洗将不同大小的细胞分离开。它的突出优点是速度快(1—1.5小时),可分离大量活细胞(10~7-10~9细胞),可以得到各种不同周期时相的细胞,以便进行细胞增殖及其调控的研究。目前使用该法已经可以分离血细胞、骨髓细胞、自然杀伤细胞、培养细胞、实体肿瘤细胞及其宿主细胞等等。本文主要介绍我室开展此项工作的初步结果。     

由G_o期过渡到S期时温度敏感突变株tsAF-8的Pre-rRNA基因的活化

用0.5％低血清培液使tsAF-8细胞进入G_o态后,再培养于含正常量(10％)血清的培液中,分别在允许温度(33.5℃)、非允许温度(39.5℃)、放线菌素D(0.03μg/ml)(33.5℃)或丁酸钠(5mmol/L)(33.5℃)的条件下,用~3HTdR放射自显影检测G_o期tsAF-8细胞进入S期的过程,并用银染核仁组织区(NOR)的方法观察pre-rRNA基因(rDNA)的活化程度。在允许温度时G_o期细胞进入S期,pre-rRNA基因被活化。在非允许温度或低浓度放线菌素D(33.5℃)条件下,G_o期细胞不进入S期,pre-rRNA基因也不活化。5mmol/L丁酸钠(33.5℃)条件下细胞不能进入S期,而pre-rRNA基因被活化,但活化程度较低。     

中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1)中期染色体悬浮液的制备及其流式核型分析

流式核型分析是用流式细胞光度术(FCM)定量分析染色体的 DNA 分布,以便得到某种染色体在物种或细胞群体中的频数。其原理是把染色体分散于悬浮液中,用荧光染料对DNA 进行染色后,染色体以百万分之一秒的速度逐个通过激光束的焦点,产生的闪光被接收,并转换为电脉冲后,以频率分布图表示。流式分类是上述方法的延伸,使带有特殊 DNA